초록 ▼

◦제1세부과제명: 국내 블루텅 진단 기법 개선 및 현황 조사
- 국내 블루텅 항원 진단법 개선
∘ 블루텅 진단 및 혈청형 동시 감별 DNA chip 개발
• BTV serogroup multiplex RT-PCR 확립을 위한 혈청형 공동부위 각 2개(NS3, VP6)와 혈청형 8부위를 세트로 구성하여 primer 선정, 반응조건 선정, 민감도 확인(정제 DNA 검출한계 1~10copy/ul)
• 블루텅 혈청형 1~24를 8개의 그룹으로 구분하여 각 그룹별 3개의 혈청형을 검사하는 multiplex RT-PCR에

◦제1세부과제명: 국내 블루텅 진단 기법 개선 및 현황 조사
- 국내 블루텅 항원 진단법 개선
∘ 블루텅 진단 및 혈청형 동시 감별 DNA chip 개발
• BTV serogroup multiplex RT-PCR 확립을 위한 혈청형 공동부위 각 2개(NS3, VP6)와 혈청형 8부위를 세트로 구성하여 primer 선정, 반응조건 선정, 민감도 확인(정제 DNA 검출한계 1~10copy/ul)
• 블루텅 혈청형 1~24를 8개의 그룹으로 구분하여 각 그룹별 3개의 혈청형을 검사하는 multiplex RT-PCR에 대한 primer 선정, 반응조건 선정, 민감도 확인
• BTV common(NS 3), BTV 혈청형 1, 8에 대한 primer로 유전자 증폭 후 BTV-1에 대한 3개의 지역형(Asia, Aus, EU & Africa)과 BTV-8에 대한 2개의 지역형(EU, Africa) 감별이 가능한 특이 probe로 확인하는 DNA chip 구축
- 국내 블루텅 바이러스 분석 및 현황조사

∘ 블루텅 예찰 및 모니터링
• 목적예찰 : 제주지역 2015년 소 287마리에 대한 항체 조사결과 양성율 39.0% 제주지역 2016년 소 120마리에 대한 항체 조사결과 양성율 17.5%
• 통계예찰 : 2015년 채혈된 소 1,328마리(양성율 17.0%)두, 염소 650마리(2.0%), 2016년 채혈된 소 1,250마리 및 염소 364마리 검사 진행중
• 매개체 모니터링 : 채집된 등에모기 중 종, 지역, 시기적으로 대표성이 있도록 선정된 등에모기를 2015년 채집 9,962개체에 대한 항원검사(RT-qPCR)결과 1개 풀에서 BTV 유전자 검출(바이러스 미분리), 2016년 채집 223개체 검사결과 모두 음성(진행중)
- 블루텅 국내 바이러스주 확보

제2세부과제명 : 블루텅 바이러스 혈청형 감별 진단기법 기술전수
- 블루텅 항원진단법 기술전수
∘ 최신 개발 혈청형 감별 실시간 유전자 진단법 기술전수(영국 퍼브라이트연구소)
- 국내 블루텅 바이러스 2개 분리주(BTV-1, BTV-3) 특성 분석
∘ 아시아지역의 여러 블루텅 바이러스의 reassortment로 형성
• 아시아에서 분리된 중국의 BTV-1, 4, 16형, 대만의 BTV-2, 12형, 일본의 BTV-3, 21형, 파키스탄의 BTV-16형 바이러스와의 높은 상관성 확인
- 식물발현시스템(Nicotiana benthamiana )을 이용한 BTV rVP2의 항원성 및 면역원성 분석
∘ BTV VP2 14종(혈청형별, 지역형별) 식물발현 확인 및 주요 혈청형(4형, 8형) rVP2에 대한 마우스(IFNAR(-/-))에서의 방어능 확인 : 백신 항원 사용 가능성 확인

(출처 : 최종 연구결과 요약 2p)

Abstract ▼

Bluetongue is a non-contagious, arthropod-borne viral disease caused by the bluetongue virus (BTV) in ruminants. BTV is transmitted by various Culicoides biting midges, a tiny blood sucking insect classified into the Ceratopogonidae family. Until now, 27 serotypes of BTVs have been identified worldw

Bluetongue is a non-contagious, arthropod-borne viral disease caused by the bluetongue virus (BTV) in ruminants. BTV is transmitted by various Culicoides biting midges, a tiny blood sucking insect classified into the Ceratopogonidae family. Until now, 27 serotypes of BTVs have been identified worldwide. In Korea, although there have been no direct economic losses by BTV infection in livestock, serotype 1 and 3 BTV was isolated from healthy cattle in 2012 and 2014, respectively. The whole genome of the two Korean BTV isolates were analyzed and the viruses belong to the eastern topotype, and classified as nucleotype H (BTV-1) and B (BTV-3). In addition, the sequence analysis of the Korean isolates suggested that the isolates had undergone vigorous reassortment with the viruses circulating in eastern asian countries such as Japan, China and Taiwan.
For detecting and serotyping the BTV strains, we developed a set of multiplex RT-PCR for identifying 24 serotypes of BTV. In addition, we developed a DNA chip for differentiating 3 topotypes (Asia/Australia/ Europe and Africa) of BTV-1 and 2 topotypes (Europe/Africa) of BTV-8, simultaneously. These methods developed in this study will be useful in monitoring and characterizing the BTVs in Korea. Continued surveillance will be needed for better understanding the BTV status and for immediate response to the incursion of novel BTV strains into Korea.

(출처 : 영문초록 26p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 농림축산검역검사기술개발 연구과제 최종결과보고서 Final Report (FR) ... 2
• Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
• 1. 연구배경 ... 4
• 2. 연구최종목표 ... 5
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• Ⅲ. 연구결과 ... 7
• 1. 제1세부과제명: 국내 블루텅 진단 기법 개선 및 현황조사 ... 7
• 2. 제2세부과제명: 블루텅 바이러스 혈청형 감별 진단기법 기술전수 ... 17
• Ⅳ. 연구결과요약 ... 24
• 1. 제1세부과제명 : 국내 블루텅 진단 기법 개선 및 현황조사 ... 24
• 2. 제2세부과제명 : 블루텅 바이러스 혈청형 감별 진단기법 기술전수 ... 24
• Ⅵ. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 24
• Ⅶ. 주요연구과제 변경사항 ... 25
• Ⅷ. 참고자료 ... 25
• IX. 영문초록 ... 26
• 끝페이지 ... 26