초록 ▼

식품의약품안전처는 국내 백신 자급화 지원을 위해 표준항체 패널을 개발하여 백신제조사 및 연구기관에 분양하고자 한다. 생물의약품연구과는 2013년부터 표준항체패널 개발 연구를 수행하였으며 ‘15년 수두백신 표준혈장, ’16년 폐구균 백신 면역원성 평가용 표준혈청, ‘17년에는 인유두종 바이러스(Human papillomavirus, HPV), b형 연쇄구균(Group B streptococcus, GBS), 수막구균백신 면역원성 평가용 표준혈청 등을 개발하여 확보하였다. 확보된 표준항체패널을 백신 제조사 등에 분양하기 위해서는 초기

식품의약품안전처는 국내 백신 자급화 지원을 위해 표준항체 패널을 개발하여 백신제조사 및 연구기관에 분양하고자 한다. 생물의약품연구과는 2013년부터 표준항체패널 개발 연구를 수행하였으며 ‘15년 수두백신 표준혈장, ’16년 폐구균 백신 면역원성 평가용 표준혈청, ‘17년에는 인유두종 바이러스(Human papillomavirus, HPV), b형 연쇄구균(Group B streptococcus, GBS), 수막구균백신 면역원성 평가용 표준혈청 등을 개발하여 확보하였다. 확보된 표준항체패널을 백신 제조사 등에 분양하기 위해서는 초기 설정역가의 변동사항에 대한 안정성 평가가 필수적이다.

본 연구과제에서는 각 백신별 표준항체패널의 역가 측정을 위한 면역원성평가 시험법을 확립하고 개발된 혈청의 역가측정을 통해 역가설정 및 안정성평가를 수행하고자 하였다. 인유두종바이러스, 수두바이러스,인플루엔자바이러스, 폐구균, b형 연쇄구균 백신 개발을 위한 면역원성 평가시험법의 조건을 최적화하여 확립하였고, 표준작업지침서를 제정하여 각 시험법의 밸리데이션을 수행하였다. 확립한 시험법을 바탕으로 HPV백신 표준혈청을 제조 후 항체가를 산정하고, 수두, 폐구균, b형 연쇄구균백신 개발을 위한 표준항체 패널의 안정성시험을 수행하였으며, 이와 별도로 인플루엔자백신 면역원성 시험법간 상관성을 비교하였다.

HPV백신 면역원성시험법은 각 항원에 특이적인 IgG항체의 총 역가를 측정할 수있는 VLP(Virus-like particle)ELISA시험법과, pseudovirus를 이용한 중화항체가 시험법(Pseudovirus-based neutralization assay, PBNA)을 확립하였으며, 표준항체패널을 확립하기 위해 HPV 4가 백신(6, 11, 16, 18형)을 접종받은 사람의 혈청을 수집, 표준항체 패널의 항체가 설정을 위해, 공동연구기관과 VLP ELISA, PBNA시험법을 동시에 수행하여, 최종적인 표준항체패널의 항체가를 설정하였다. 수두백신의 면역원성시험법은 gold standard(reference) 방법인 fluorescent antibody to membrane antigen(FAMA)시험법을 확립하였고, 2015년 개발 완료한 수두 표준혈장패널의 안정성 시험을 FAMA시험법 및 glycoprotein EIA(gpEIA)을 실시하여, 표준혈장패널의 품질유지를 보증하였다. 폐구균백신 면역원성시험법은 실제 항체방어력 및 opsonophagocytic killing에 의해 항체기능을 평가하는 시험법인 옵소닌항체가 측정법(Modified opsonophaphagocytic killing assay, MOPA)을 확립하였으며, ‘16년 개발한 폐구균 표준혈청패널의 항체가검증 및 온도, 보관기간에 따른 안정성 평가를 실시하여 측정한 결과를 바탕으로 미개봉 표준혈청의 보관 시 저장조건(-70℃)에서 표시 항체가가 유지될 것으로 예상되는 기간을 산출하였다.
마찬가지로 b형 연쇄구균의 면역원성시험법은 옵소닌항체가 측정법(Opsonophagocytic killing assay,OPKA)를 확립하였으며, ’17년 개발한 b형 연쇄구균 표준혈청 패널의 항체가검증 및 온도, 보관기간에 따른 안정성 평가를 실시하였다. 또한 인플루엔자백신 면역원성시험법의 경우, 시험법 개선을 위해 WHO(World Health Organization) 표준시험법인 혈구 응집억제 시험(Hemagglutination inhibition, HI)및 중화항체가 측정시험법(Microneutralization assay)의 중요항목(critical factor)을 조건 별로 수행해 시험법을 최적화하고, 사람 혈청에 대한 시험법 간 결과 분석을 통해 상관관계를 도출하였다.

본 연구과제를 통해 확립한 시험법 및 표준혈청의 안정성 검증은 향후 표준항체패널을 보급 시 기존 및 개발 중인 백신의 품질관리에 기여하고, 국내 자급화 백신임상시험의 면역원성 평가에 적극 활용할 수 있을 것으로 기대 된다.

(출처 : 국문 요약문 2p)

Abstract ▼

Ministry of Food and Drug Safety(MFDS) has developed a standardized antibody panel to support domestic vaccine self-sufficiency, and distribute it to vaccine manufacturers and research institutes.
Biological research division has established those standardized antibody panels for the immunogenici

Ministry of Food and Drug Safety(MFDS) has developed a standardized antibody panel to support domestic vaccine self-sufficiency, and distribute it to vaccine manufacturers and research institutes.
Biological research division has established those standardized antibody panels for the immunogenicity assessment. Since reference serum is biologically complex and can be lost its activity and antibody titer by a variety of variables, it is essential to evaluate the stability of the intial setting activity.

In this project, standardized immunogenicity tests for Human papillomavirus(HPV), chickenpox,influenza, Group B streptococcus(GBS), and pneumococcal vaccines were established and stabilitytests of standardized antibody panels were conducted to confirm the quality of the standardizedantibody panel. For the standardization of immunogenicity assay, system and assay methods forthe evaluation of HPV, VZV, influenza, Group B streptococcus(GBS), and pneumococcal vaccine immunogenicity were established. Standard operating procedures and validation tests of each assay were verified.

HPV immunogenicity tests were based on a virus-like particle(VLP) ELISA test and a pseudovirus-based neutralization assay(PBNA). Sera from people injected HPV four-type vaccine(6, 11, 16, 18) were collected and antibody titer were measured by performing the VLP ELISA and PBNA. Cooperative study was performed to set the antibody titer. VZV immunogenicity test was conducted with fluorescent antibody to membrane antigen(FAMA) which is a goldstandard(reference) method to evaluate protective immunity against varicella. To assure the qualityof the developed VZV standardized plasma panel(2015), FAMA test and glycoprotein EIA(gpEIA) were performed. For the pneumococcal vaccine and GBS immunogenicity test, opsonophagocytic killing assay which measures functional antibodies by opsonophagocytosis was studied. Based on the validation of opsonic titer on pneumococcal standard serum panel developed in 2016 and GBS standard serum panel in 2017, the antibody titer was maintained by comparision of its original potency from the manufacturing year. Through thermal degradation test with those panels at thespecific storage temperature(4, 25, 40 ℃) for 90 days, the shelf life of the labeled opsonic titer atthe storage temperature(-70℃) of the unopened standard serum panel was calculated to be maintained. Furthermore, in order to improve the immunogenicity test of influenza vaccine, the hemagglutination inhibition(HI) testing method which is regarded as World Health Organization(WHO) standard testing method and microneutralization assay(MN) were optimized by verifying the critical factors and adult antibody titer of influenza virus vaccinated or unvaccinated were measured to analyze the correlation with microneutralization assay results.

The results of this study will contribute to the quality control of vaccine through the supply of the highly reliable standardized antibody panel in Korea.

(출처 : SUMMARY 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 국문 요약문 ... 2
• Summary ... 3
• 목차 ... 4
• 연구개발과제 연구결과 ... 5
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 5
• 제2장 총괄연구개발과제의 국내･외 연구개발 현황 ... 8
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 20
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 142
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 146
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 147
• 제7장 참고문헌 ... 148
• 제8장 첨부서류 ... 156
• 끝페이지 ... 252