초록 ▼

5. 최종 연구결과 요약
○ 제1세부과제명: 낭충봉아부패병 실시간유전자진단키트의 실험실내 유효성 평가
< 산업체 >
- 현장진단용 핵산추출키트 제작 : 분쇄도구와 direct lysis buffer (DLB)를 이용한 꿀벌시료로부터 현장 핵산추출키트를 제작하였고, 그 효율을 최적화 하였고 키트 완제품의 한 구성품으로 제작완료 하였음
- 낭충봉아부패병 실시간유전자진단용 프라이머 제작 : 한국과 베트남형, 중국형, 인도형, 서양형 및 유럽형별 낭충봉아부패병 바이러스검출용 특이프라이머를 제작하고 농도를 설정하였으며

5. 최종 연구결과 요약
○ 제1세부과제명: 낭충봉아부패병 실시간유전자진단키트의 실험실내 유효성 평가
< 산업체 >
- 현장진단용 핵산추출키트 제작 : 분쇄도구와 direct lysis buffer (DLB)를 이용한 꿀벌시료로부터 현장 핵산추출키트를 제작하였고, 그 효율을 최적화 하였고 키트 완제품의 한 구성품으로 제작완료 하였음
- 낭충봉아부패병 실시간유전자진단용 프라이머 제작 : 한국과 베트남형, 중국형, 인도형, 서양형 및 유럽형별 낭충봉아부패병 바이러스검출용 특이프라이머를 제작하고 농도를 설정하였으며 , PCR 최적조건을 설정하였고 특이성을 확인하였음. 최적온도 조건은 98°C 30sec； 30cycles (98°C, 3sec； 57°C, 8sec; 72°C, 3sec)로 설정되었음
- 마이크로플루이딕칩 실시간유전자진단키트 프로토타입 제작 : 시료추출도구, SBV 진단 chip, 일회용 파이펫, 일회용 장갑, 일회용 팁, 2x Mastermix, Dilution buffer (DB), Direct lysis buffer (DLB), 시약 및 칩 스탠드 등으로 구성된 프로토타입을 제작하였음

< 검역본부 >
- 낭충봉아부패병 실시간유전자진단용 프라이머 설계 : 한국과 베트남형, 중국형, 인도형, 서양형 및 유럽형별 낭충봉아부패병 바이러스 검출용 특이프라이머를 설계하였음
- 낭충봉아부패병 표준항원패널 제작 : 낭충봉아부패병 바이러스 감염량에 따른 항원패널을 제작하였음
- 낭충봉아부패병 야외 양성 및 음성시료 확보하였음 (양성 42, 음성 80시료 확보)
- 현장진단용 핵산추출기법 실험실내 평가 및 기존추출법과 비교하였음
- 표준시료에 대한 현장진단키트의 민감성 및 특이성 평가 : kSBV (한국형 낭충봉아부패병 바이러스, korean type Sacbrood virus)에 대한 민감성은 91%, 특이성은 100% 로 나타남

○ 제2세부과제명: 낭충봉아부패병 실시간유전자진단키트의 현장 유효성 평가
< 산업체 >
- 현장진단키트 저전력 적용 평가시험을 통해 무전원 배터리로 6시간동안 사용가능확인하였으며, 차량 전원공급장치로 사용할 수 있도록 제작하였음

< 검역본부 >
- 핵산추출 및 실시간유전자진단키트 현장적용시험 및 문제점 개선 : 야외적용시험을 통해 1시간내 진단이 가능함을 확인하였으며, 검출한계는 conventional RT-PCR 수준과 동일함을 확인함

(출처 : 5. 최종 연구결과 요약 2p)

Abstract ▼

Sacbrood virus (SBV) is one of the most serious honeybee viruses. The virus causes failure to pupate and death in both larvae and adult bees. Recently，Korean Sacbrood virus (KSBV) caused a great loss in Korean honeybee colonies. Therefore, a simple, sensitive and specific method for the field detect

Sacbrood virus (SBV) is one of the most serious honeybee viruses. The virus causes failure to pupate and death in both larvae and adult bees. Recently，Korean Sacbrood virus (KSBV) caused a great loss in Korean honeybee colonies. Therefore, a simple, sensitive and specific method for the field detection of SBV is needed urgently. In this study, a novel Ultra real-time PCR (GENECHECKER^®) method was developed for rapid field detection of sacbrood virus (SBV) from honeybees、Apis cerana)infected with SBV in Korea. This novel Ultra real-time system with a special polymer chip (Rapi：chip) allowing for fast thermal changes (8 ℃/s ramping rate for both heating and cooling) and an integrated camera module for fluorescence detection， which is suitable for field diagnosis. In the field application of novel Ultra real-time PCR system, the whole diagnostic process was completed within 30 minutes including reverse transcription reaction and total RNA extraction. In addition，this method could distinguish closely-related SBV strains.
This molecular-based diagnostic tools was useful for the rapid and sensitive field diagnosis of SBV infection of honeybees.

(출처 : Abstract 65p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• I. 연구배경 및 목표 ... 3
• 1. 연구배경 ... 3
• 2. 연구최종목표 ... 5
• 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 5
• II. 연구방법 및 수행전략 ... 6
• 1. 재 료 ... 6
• 2. 연구전략 및 방법 ... 6
• III. 연구결과 ... 8
• 1. 제1세부과제명 : 낭충봉아부패병 실시간유전자진단키트의 실험실내 유효성 평가 ... 8
• 2. 제2세부과제명 : 낭충봉아부패병의 실시간유전자진단키트의 현장 유효성 평가 ... 61
• IV. 연구결과요약 ... 62
• 1. 낭충봉아부패병 실시간유전자진단키트의 실험실내 유효성 평가 ... 62
• 2. 낭충봉아부패병의 실시간유전자진단키트의 현장 유효성 평가 ... 63
• V. 금후 추진계획 ... 63
• VI. 참고문헌 ... 63
• VII. 영문초록 ... 65
• 끝페이지 ... 65