보고서 정보
주관연구기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
연구책임자 |
강민수
|
참여연구자 |
최병국
,
정옥미
,
임춘태
,
이희수
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2016-12 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
등록번호 |
TRKO202000030926 |
과제고유번호 |
1545011765 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2020-11-21
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키워드 |
닭.장.유익균.생균제.항원운반체.cicken.gut.probiotic.antigen delivery vehicle.
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초록
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5. 최종 연구결과 요약
〇 제1세부과제명: 닭 장내 유익균을 이용한 생균제 개발
- 닭 장내 유익균 분리 및 특성 분석
。닭 및 오리 장내 유산균 및 바실러스속균 분리
- 닭(SPF 닭 4수, 육계 20수) 및 오리(육용오리 20수)의 맹장분변을 채취하여 장내 유익균을 분리한 결과, 닭에서 Bacilllus 2종(32주), Lactobacillus 6종(56주) 및 Streptococcus 1종(8주), 오리에서 Bacilllus 2종(33주), Lactobacillus 5종(36주), Streptococcu
5. 최종 연구결과 요약
〇 제1세부과제명: 닭 장내 유익균을 이용한 생균제 개발
- 닭 장내 유익균 분리 및 특성 분석
。닭 및 오리 장내 유산균 및 바실러스속균 분리
- 닭(SPF 닭 4수, 육계 20수) 및 오리(육용오리 20수)의 맹장분변을 채취하여 장내 유익균을 분리한 결과, 닭에서 Bacilllus 2종(32주), Lactobacillus 6종(56주) 및 Streptococcus 1종(8주), 오리에서 Bacilllus 2종(33주), Lactobacillus 5종(36주), Streptococcus 1종(20주) 및 Bifidobacterium 1종(1 주) 등을 분리하였음.
。균주별 특성 분석 및 유용성 조사
- 유산균 29주를 선발하여 β-용혈성, 젤라틴 액화능, 암모니아, 인돌, phenylpyruvic acid 등의 유해 대사산물 생성여부 등 안전성을 조사하여 시험균주 모두 용혈성 없고 유해 대사산물을 생성하지 않는 것을 확인하였음.
- 유산균 29주에 대해 각각 산성(pH 2.5) 및 담즙산(0.3%) 함유 조건에서의 내성을 조사한 결과, 산성 조건에서는 15주(51.7%)만이 90% 이상의 생존률을 보였고, 담즙산 함유 조건에서는 29주 모 두 99% 이상의 생존를을 보였음.
- 유산균 29주에 대해 총 16종의 약제에 대하여 MC를 측정하여 감수성을 조사한 결과, 20주(69.0%)의 유산균에서 5종 이상의 약제에 감수성을 보였고, 특히 6주(L. dextrinicus Lac154, L. sakei Lac170, L. reuteri Lac065, L. johnsonii Bro033, L. johnsonii Lac038, S. alactolyticus Bro390)는 8가지 약제에 대한 내성을 보였음.
- 유산균 29주에 대한 효소 생성능을 조사에서 β-glucuronidase의 활성은 18주(62.1%)에서 음성으로 나타났으며, 반대로 생균제로서의 역할을 하는 α/β-galactosidase, α/β-glucosidase의 활성은 각각 51.7%, 37.9%, 20.7%, 13.7%의 균주에서 양성으로 나타났음.
- 생균제 및 항원운반체 개발용 후보균주 선발
ᄋ생균제로서의 유용성 및 병원균 억제능 조사
- 유산균 29주에 대해 exopolysaccharide(EPS) 생성여부를 조사하여 17균주가 24시간 배양하였을 때 30 mg/ml 이상의 EPS를 생성하였고, L. johnsonii Bro033의 생성능이 가장 높은 것을 확인하였음.
- Lactobacillus 2주(L. salivarius Lac151, L. salivarius Lac201)는 병원성균 3종에 대해 모두 높은 정도의 항균력을 나타내었으며, 또다른 Lactobacillus 5주(L. dextrinicus Lac154, L. dextrinicus Lac186, L. sakei Lac187, L. coryniformis subsp. torquens Lac182, L. johnsonii Lac082)는 S. Enteritidis ATCC13076, 5. Typhimurium ATCC14028에 대해서만 높은 항균력을 확인하였음.
- 유산균 29주에 대해 병원성균 억제와 관련된 응집능력(autoaggregration 및 coaggregration)을 조사하여 L. vaginalis Lac031, L. johnsonii Lac082 등이 autoaggregation과 3종의 병원균에 대한 coaggregation이 모두 높은 것을 확인하였음.
- 유산균 29주에 대해 장상피세포 부착능을 조사하여 5주(L. coryniformis subsp. torquens Lac152, L. animalis Lac153, L. vaginalis Lac074, L, crispatus Bro011, L. johnsonii Lac082, S. alactolyticus Lac390)가 부착능이 높은 것을 확인하였음.
。생균제 후보주 선발, 배양조건 및 유전적 특성 조사
- 장내 유익균에 대한 특성 분석 및 항원성 검사 결과, L. animalis Lac153, L. salivarius Bro001, L. reuteri Lac019, L. salivarius Lac151, L. salivarius Lac201 등이 가장 적합한 균주로 조사되어 생균제 후보주로 최종 선발하였음.
- 최종 선발된 후보균주들을 대상으로 대량생산에 적합한 최적 배양조건(MRS-cysteine 배지, 16 h) 을 확립하였음.
- 후보균주들의 16S rRNA 유전자 및 플라스미드 보유양상을 비교분석하여, 향후 항원운반체 제작에 필요한 각 후보주들의 유전적 특성 기초자료를 확보하였음.
(출처 : 요약 1p)
Abstract
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Antimicribial resistance of pathogenic bacteria is one of main challenges that the chicken industry faces. Probiotics, which are feed supplements composed of beneficial microorganisms such as lactic acid bacteria, has been considered as an alternative for antibiotics. In this study, 186 lactic acid
Antimicribial resistance of pathogenic bacteria is one of main challenges that the chicken industry faces. Probiotics, which are feed supplements composed of beneficial microorganisms such as lactic acid bacteria, has been considered as an alternative for antibiotics. In this study, 186 lactic acid bacteria were isolated from guts of chickens and ducks and 29 of the isolates were screened for their potential as probiotic candidates. The isolates were tested for acid and bile salt tolerance, aggregation, antibiotic susceptibility, enzyme activity, antibacterial activity, and so on. Although all 29 isolates were tolerant to bile salts, only 15 isolates (51.7%) were resistant to acidic pH. Twenty isolates (69.0%) were susceptible to five or more antibiotics and activities of α-galactosidase, β-galactosidase, α-glucosidase and β-glucosidase in 29 isolates tested were 51.7%, 37.9%, 20.7%, 13.7%, respectively. In the antibacterial activity assay, two Lactobiaillus isolates (L. salivarius Lac151, L. salivarius Lac201) showed relatively high actibacterial activities to all pathogenic Salmonella and Escherichia, coli strains tested. Also, five isolates including L. coryniformis subsp. torquens Lac152, L. animalis Lac153, L, vaginalis Lac074, L. crispatas Bro011, L. johnsonii Lac082, and Streptococcus alactolyticus Lac390, effectively adhered to the chicken ileal epithelial cell in vitro. Overall findings indicate that L. animalis Lac153, L. salivarius Bro001, L. reuteri Lac019, L. salivarius Lac151, and L. salivarius Lac201 are useful probiotic candidates. Further evaluation of the potential of the candidates as probiotics and vaccine delivery vehicles is required.
(출처 : Abstract 21p)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- I. 연구배경 및 목표 ... 3
- 1. 연구배경 ... 3
- 2. 연구최종목표 ... 4
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 4
- II. 연구방법 및 수행전략 ... 4
- 1. 재 료 ... 4
- 2. 연구전략 및 방법 ... 4
- III. 연구결과 ... 5
- 1. 제1세부과제명: 닭 장내 유익균을 이용한 생균제 개발 ... 5
- IV. 연구결과요약 ... 15
- 1. 닭 장내 유익균 분리 및 특성 분석 ... 15
- 2. 생균제 및 항원운반체 개발용 후보균주 선발 ... 16
- V. 고 찰 ... 17
- VI. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 18
- VII. 연구사업 추진상 문제점 및 건의사항 ... 19
- VIII. 주요연구과제 변경사항 ... 19
- IX. 참고자료 ... 19
- X. 영문초록 ... 21
- 끝페이지 ... 21
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