초록 ▼

□ 연구의 목적 및 내용
다제내성 Acninetobacter nosocomialis 균 감염제어를 위해 균종표적 약물전달체 siderophore의 기능을 연구하여 A. nosocomialis 균을 표적하는 siderophore- 항생제 복합체를 개발하는 것임

□ 연구개발성과
1. A. nosocomialis siderophore profile 구축 및 siderophore gene cluster 분석
○ Casamino acids 농도와 균 성장에 따른 siderophore 생성 최적화
○ Side

□ 연구의 목적 및 내용
다제내성 Acninetobacter nosocomialis 균 감염제어를 위해 균종표적 약물전달체 siderophore의 기능을 연구하여 A. nosocomialis 균을 표적하는 siderophore- 항생제 복합체를 개발하는 것임

□ 연구개발성과
1. A. nosocomialis siderophore profile 구축 및 siderophore gene cluster 분석
○ Casamino acids 농도와 균 성장에 따른 siderophore 생성 최적화
○ Siderophore 활성에 관여하는 siderophore gene cluster 구성인자 EntA, EntC, EntF 발굴
○ HPLC-MS 분석을 이용하여 철 흡수에 관여하는 FepA 수용체 발굴
○ A. nosocomialis의 전장유전체를 확보, 철 겹핍 환경에서 특이적으로 발현되는 전장전사체 및 siderophore gene cluster 확보

2. A. nosocomialis 균표적 약물전달체로서의 siderophore 기능 규명
○ Siderophore gene cluster 구성 유전자(fepA, entE, entC, entA, fes, entF, entS) 돌연변이 균 구축
○ 유전적 보완성을 이용하여 철환원력 및 생존에 관여하는 siderophorer 구성인자 EntA, EntC, EntF, EntS, FepA 발굴
○ in vitro cell line과 in vivo mouse 모델을 이용하여 숙주세포 내 생존에 관여하는 siderophore 구성인자 EntF와 FepA 발굴

3. A. nosocomialis 균표적 siderophore-항생제 복합체 개발및 효능 검증
○ CAS assay와 HPLC 분석을 이용하여 3종의 siderophore 화합물 발굴
○ 양성자 핵자기 공명기법 1H NMR 분석을 이용하여 발굴된 3종의 화합물이 철과 결합하기 위한 리간드를 갖는 catechol구조 확인
○ 제한된 철 환경인 mouse에 A. nosocomialis 균 감염시 철이 결합된 aicnetobactin과 철 포획체간에 상호작용 규명

□ 연구개발성과의 활용계획 (기대효과)
○ Siderophore profiling 과정에서 확보된 A. nosocomialis의 전장유전체와 전장전사체를 병원성 인자 탐색에 활용
○ Siderophore 생존인자를 타깃으로 하는 병원성 세균 감염제어 물질 개발에 활용
○ Native한 3종의 siderophore 화합물을 균종 특이성이 약물 전달시스템 개발에 활용

(출처 : 요약문 12p)

Abstract ▼

□ Purpose&Contents
It is necessary to siderophore–antibiotic conjugate as a therapeutic agent against multidrug-resistant Acinetobacter nosocomialis. This study is aimed to screen and develop siderophore for conjugating antibiotics as a therapeuticagent against the bacterial infection.

□ R

□ Purpose&Contents
It is necessary to siderophore–antibiotic conjugate as a therapeutic agent against multidrug-resistant Acinetobacter nosocomialis. This study is aimed to screen and develop siderophore for conjugating antibiotics as a therapeuticagent against the bacterial infection.

□ Results
1. Analysis of the siderophore profile and gene cluster of A. nosocomialis
○ Optimization of the production of siderophore using the casamino acids and the bacterial growth
○ Profiling EntA, EntC, and EntF composed of the siderophore gene cluster
○ Identification of FepA receptor for iron uptake using the HPLC-MS
○ Identification and characterization of the specific genes up-regulated by iron-depleted condition using Next-RNA sequencing

2. Functional analysis of the siderophore as a drug delivery system
○ Construction of the genes deletion mutants involved in siderophore gene cluster
○ Identification of EntA, EntC, EntF, EntS, and FepA required for the bacterial survival under iron depleted conditions using geneticcomplementation
○Identification of EntF and FepA required for the survival in the host cells using in vitro cell line and in vivo mouse model

3. Development of siderophore-antibiotics conjugate as a therapeutic agent against the bacterial infection
○ Identification of three siderophore compounds using CAS assay and HPLC analysis
○ Identification of the ligands for Fe(III) in three siderophore compounds unsing H1NMR
○ Functional analysis of acinetobactin in the bacterial pathogenesis

□ Expected Contribution
○ Genome and transcriptome of A. nosocomialis are used in the screening of virulence factor
○ Siderophores required for the bacterial survival under iron-depleted condition are used in the development for therapeutic agent therapeutic against the bacterial infection
○ Three native siderophore are utilized in the development of the drug delivery system

(source : SUMMARY 13p)