몇 가지 항체를 가공하여 지질층에 삽입시켜 immunoliposome을 제조하고 그 특성에 관하여 고찰해 보았다. 우선 안정된 리포좀을 제조하기 위해서는 몇 가지 요소들이 고려되어져야 하는데 지질성분, 지질과 항체와의 몰 비, 그리고 각종 첨가제들에 대한 것들이다. 이러한 요소들을 최적화시켜야만 안정된 리포좀 제조할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 본실험에서는 인지질 그 자체만으로는 안정한 이중층 리포좀을 형성하지 못하는 불포화 PE(DOPE)에 P-IgG를 2.5×10^(-4)mol/lipid mol을 첨가함으로써 안정한 리포좀을 만들 수 있었으며 p-IgG가 PE리포좀을 형성하는데 필수적임을 알기 위해 다중및 단일클론의 항체를 삽입한 리포좀을 destabilization한 결과 이는 PE리포좀에서만 득별히 나타나는 것으로 밝혀져 이것으로 P-IgG가 PE 리포좀에 필수적임을 알 수 있었다. 수용성 마커인 calcein이 첨가된 immunoliposome의 안정성을 시간별로 확인할 결과 제조 후 1시간이 경과한 후 형광성의 방출이 4%이하인 매우 안정한 리포좀을 만들 수 있었다. 몇 가지 첨가제에 의한 영향도 조사하였는데 DOC의 경우 최종 농도가 0.09wt%일 때 리포좀의 ...
몇 가지 항체를 가공하여 지질층에 삽입시켜 immunoliposome을 제조하고 그 특성에 관하여 고찰해 보았다. 우선 안정된 리포좀을 제조하기 위해서는 몇 가지 요소들이 고려되어져야 하는데 지질성분, 지질과 항체와의 몰 비, 그리고 각종 첨가제들에 대한 것들이다. 이러한 요소들을 최적화시켜야만 안정된 리포좀 제조할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 본실험에서는 인지질 그 자체만으로는 안정한 이중층 리포좀을 형성하지 못하는 불포화 PE(DOPE)에 P-IgG를 2.5×10^(-4)mol/lipid mol을 첨가함으로써 안정한 리포좀을 만들 수 있었으며 p-IgG가 PE리포좀을 형성하는데 필수적임을 알기 위해 다중및 단일클론의 항체를 삽입한 리포좀을 destabilization한 결과 이는 PE리포좀에서만 득별히 나타나는 것으로 밝혀져 이것으로 P-IgG가 PE 리포좀에 필수적임을 알 수 있었다. 수용성 마커인 calcein이 첨가된 immunoliposome의 안정성을 시간별로 확인할 결과 제조 후 1시간이 경과한 후 형광성의 방출이 4%이하인 매우 안정한 리포좀을 만들 수 있었다. 몇 가지 첨가제에 의한 영향도 조사하였는데 DOC의 경우 최종 농도가 0.09wt%일 때 리포좀의 포집율이 최대가 되었고 형광성 표시자인 calcein의 경우 최종 pH는 8.5~9.5정도에서 안정한 리포좀이 제조될 수 있었다. 한편 DOPA의 영향도 규명되어 졌는데 포집율이 높은 안정된 리포좀은 20% DOPA가 첨가되었을 때였으나 SRBC와의 destabilization에는 오히려 아주 없거나 소량(5% 이하) 첨가하였을 때 방출율이 높게 나타났다. 단일 및 다중클론항체가 삽입된 immunoliposome의 경우 본 실험에서 사용된 항체와 지질의 최적 몰비는 모두 2.5×10^(-4)이었으나 이는 항체의 종류와 지질을 달리하여 적용할 때마다 새로이 알맞은 조건을 알아내야 할 것이다. 이제 실질적인 암치료의 관점에서 다중 및 단일클론항체가 삽입된 리포좀내부에 여러종류의 항암제들이 적절한 조건에서 최적화되어 제조 되어진다면 이를 통해 실질적인 약물 전달에 많은 효용성을 나타낼 것이다. 본 실험을 통해 나타난 결과들이 이러한 실질적인 약물전달 system에 있어서 몇 가지 기준이 될 수 있을 것으로 기대된다.
몇 가지 항체를 가공하여 지질층에 삽입시켜 immunoliposome을 제조하고 그 특성에 관하여 고찰해 보았다. 우선 안정된 리포좀을 제조하기 위해서는 몇 가지 요소들이 고려되어져야 하는데 지질성분, 지질과 항체와의 몰 비, 그리고 각종 첨가제들에 대한 것들이다. 이러한 요소들을 최적화시켜야만 안정된 리포좀 제조할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 본실험에서는 인지질 그 자체만으로는 안정한 이중층 리포좀을 형성하지 못하는 불포화 PE(DOPE)에 P-IgG를 2.5×10^(-4)mol/lipid mol을 첨가함으로써 안정한 리포좀을 만들 수 있었으며 p-IgG가 PE리포좀을 형성하는데 필수적임을 알기 위해 다중및 단일클론의 항체를 삽입한 리포좀을 destabilization한 결과 이는 PE리포좀에서만 득별히 나타나는 것으로 밝혀져 이것으로 P-IgG가 PE 리포좀에 필수적임을 알 수 있었다. 수용성 마커인 calcein이 첨가된 immunoliposome의 안정성을 시간별로 확인할 결과 제조 후 1시간이 경과한 후 형광성의 방출이 4%이하인 매우 안정한 리포좀을 만들 수 있었다. 몇 가지 첨가제에 의한 영향도 조사하였는데 DOC의 경우 최종 농도가 0.09wt%일 때 리포좀의 포집율이 최대가 되었고 형광성 표시자인 calcein의 경우 최종 pH는 8.5~9.5정도에서 안정한 리포좀이 제조될 수 있었다. 한편 DOPA의 영향도 규명되어 졌는데 포집율이 높은 안정된 리포좀은 20% DOPA가 첨가되었을 때였으나 SRBC와의 destabilization에는 오히려 아주 없거나 소량(5% 이하) 첨가하였을 때 방출율이 높게 나타났다. 단일 및 다중클론항체가 삽입된 immunoliposome의 경우 본 실험에서 사용된 항체와 지질의 최적 몰비는 모두 2.5×10^(-4)이었으나 이는 항체의 종류와 지질을 달리하여 적용할 때마다 새로이 알맞은 조건을 알아내야 할 것이다. 이제 실질적인 암치료의 관점에서 다중 및 단일클론항체가 삽입된 리포좀내부에 여러종류의 항암제들이 적절한 조건에서 최적화되어 제조 되어진다면 이를 통해 실질적인 약물 전달에 많은 효용성을 나타낼 것이다. 본 실험을 통해 나타난 결과들이 이러한 실질적인 약물전달 system에 있어서 몇 가지 기준이 될 수 있을 것으로 기대된다.
Two kinds of target-sensitive liposomes including polyclonal and monoclonal antibodies were prepared and their destabilization effects were characterized. Not only polyclonal anti-SRBC(Sheep Red Blood Cell) antibody(Ab) embedded PE-immunoliposome was produced to react with SRBC; suface antigen, resu...
Two kinds of target-sensitive liposomes including polyclonal and monoclonal antibodies were prepared and their destabilization effects were characterized. Not only polyclonal anti-SRBC(Sheep Red Blood Cell) antibody(Ab) embedded PE-immunoliposome was produced to react with SRBC; suface antigen, resulting in a target-specific release of liposome contents, but the other type of monoclonal anti-β-HCG(Human Chorionic Gonadotropin)-antibody encapsulated immuno- liposome was prepared and its lysis was also examined. In both experiments 50mM of calcein was used as a releasing marker and the palmitoyl-immunoglobin G(p-IgG) to DOPE (dioleoylphosphatidylethanolamine) molar ratio for stable liposome was identified by 2.5×10^(-4). The molar ratio of N-hydroxysuccinmide ester of palmitic acid(NHSP) to p-lgG was also set to 20 by experiment. We have made a conclusion that such important factors as final concentration of deoxycholic acid(DOC), pH of calcein, and addition of DOPA or cholesterol are very decisive ones for stable immunoliposome, so these factor's characters were optimized during the experiment. When 50mM calcein was encapsulated in the polyclonal-Ab-PE-liposome as an aqueous marker binding of SRBC resulted in a cell concentration dependent lysis of the liposomes as detected by the release of encapsulated calcein. The resulted releasing rate of encapsulated calcein was above than 40% compared with that of control, EL-4 cell line, less than 15%. 5% and 20% of dioleoylphosphatidic acid(DOPA) included PE-liposomes were also prepared respectively to determine their destabilization effects compared with those of PE-liposomes only and 5% of DOPA added irmmunoliposome represented the most effective releasing rate almost at 70%. The other type of PE-liposome was prepared with monoclonal antibody of HCG, 50mM of calcein and also showed the destabilization effect with the reaction of HCG. Here, when the monoclonal-Ab-PE-liposome was bound to HCG-tanned SRBC the releasing rate of encapsulated calcein was more than 70% with the concentration gradient of cell line.
Two kinds of target-sensitive liposomes including polyclonal and monoclonal antibodies were prepared and their destabilization effects were characterized. Not only polyclonal anti-SRBC(Sheep Red Blood Cell) antibody(Ab) embedded PE-immunoliposome was produced to react with SRBC; suface antigen, resulting in a target-specific release of liposome contents, but the other type of monoclonal anti-β-HCG(Human Chorionic Gonadotropin)-antibody encapsulated immuno- liposome was prepared and its lysis was also examined. In both experiments 50mM of calcein was used as a releasing marker and the palmitoyl-immunoglobin G(p-IgG) to DOPE (dioleoylphosphatidylethanolamine) molar ratio for stable liposome was identified by 2.5×10^(-4). The molar ratio of N-hydroxysuccinmide ester of palmitic acid(NHSP) to p-lgG was also set to 20 by experiment. We have made a conclusion that such important factors as final concentration of deoxycholic acid(DOC), pH of calcein, and addition of DOPA or cholesterol are very decisive ones for stable immunoliposome, so these factor's characters were optimized during the experiment. When 50mM calcein was encapsulated in the polyclonal-Ab-PE-liposome as an aqueous marker binding of SRBC resulted in a cell concentration dependent lysis of the liposomes as detected by the release of encapsulated calcein. The resulted releasing rate of encapsulated calcein was above than 40% compared with that of control, EL-4 cell line, less than 15%. 5% and 20% of dioleoylphosphatidic acid(DOPA) included PE-liposomes were also prepared respectively to determine their destabilization effects compared with those of PE-liposomes only and 5% of DOPA added irmmunoliposome represented the most effective releasing rate almost at 70%. The other type of PE-liposome was prepared with monoclonal antibody of HCG, 50mM of calcein and also showed the destabilization effect with the reaction of HCG. Here, when the monoclonal-Ab-PE-liposome was bound to HCG-tanned SRBC the releasing rate of encapsulated calcein was more than 70% with the concentration gradient of cell line.
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