병원성 Pseudomonas aeruginosa LAM95-110에 의한 Cephalosporinase의 생산 및 효소학적 성질 Production and Properties of Cephalosporinase from Pathogenic Pseudomonas aeruginosa LAM95-110원문보기
서울시내 각 대학병원으로 부터 분양 받은 항생제 내성 병원균으로부터 cepha 계 항생물질에 내성이 큰 균주를 분리한후 이중 cephalosporinase 생산성이 우수한 균주 LAM95-110을 선별하여 효소생산을 위한 최적 배양조건을 검토하고, 효소를 정제하여 그 특성을 조사하였다. 선별된 LAM95-110은 형태학적,. 생화학적 특성 등을 중합한 결과 Pseudomonas aeruginosa로 동정 되었다. 효소 생산을 위한 최적 배지조성은 2.0% mannitol, 0.5% peptone, 0.5% tryptone, 0.2% ...
서울시내 각 대학병원으로 부터 분양 받은 항생제 내성 병원균으로부터 cepha 계 항생물질에 내성이 큰 균주를 분리한후 이중 cephalosporinase 생산성이 우수한 균주 LAM95-110을 선별하여 효소생산을 위한 최적 배양조건을 검토하고, 효소를 정제하여 그 특성을 조사하였다. 선별된 LAM95-110은 형태학적,. 생화학적 특성 등을 중합한 결과 Pseudomonas aeruginosa로 동정 되었다. 효소 생산을 위한 최적 배지조성은 2.0% mannitol, 0.5% peptone, 0.5% tryptone, 0.2% NaCl 였으며 초발 pH 7.0, 배양온도 30에서 27시간 진탕배양할때 효소생산이 가장 우수하였으며 항생물질에 의해 유도되어지지 않았다. 효소는 streptomycin처리, ammonium sulfate fractionation (40%-80%), CM-cellulose column chromatography, Ultrgel AcA44 gel filtration 등을 통하여 정제되었으며 polyacrylamide gel 전기영동상 단일 band를 나타내었다. 정제효소의 분자량은 43,500 dalton 정도이고, 단일 polypeptide chain으로 구성 되어있었다. 효소의 작용 최적온도는 37℃였고 40℃이상에서는 열에 불안정하였으며, 반응 최적pH는 7.0로 나타났고, pH 6.0에서 9.0까지 안정성을 보였다. 정제된 cephalosporinase의 활성은 Ag^(+), Pb^(2+), Cu^(2+) 등과 cloxacillin, iodoacetate, 등에 의해서 저해되었으며 Na^(+)에 의해서는 활성이 증가하여 50mM 농도에서 활성이 증가 하였다. 효소의 Km 값은 cefazolin 및 cephaloridine에 대하여 5mM였으며 Vmax값은 각각 3.57unit/ml/min과 2.12unit/ml/min으로 조사되었다.
서울시내 각 대학병원으로 부터 분양 받은 항생제 내성 병원균으로부터 cepha 계 항생물질에 내성이 큰 균주를 분리한후 이중 cephalosporinase 생산성이 우수한 균주 LAM95-110을 선별하여 효소생산을 위한 최적 배양조건을 검토하고, 효소를 정제하여 그 특성을 조사하였다. 선별된 LAM95-110은 형태학적,. 생화학적 특성 등을 중합한 결과 Pseudomonas aeruginosa로 동정 되었다. 효소 생산을 위한 최적 배지조성은 2.0% mannitol, 0.5% peptone, 0.5% tryptone, 0.2% NaCl 였으며 초발 pH 7.0, 배양온도 30에서 27시간 진탕배양할때 효소생산이 가장 우수하였으며 항생물질에 의해 유도되어지지 않았다. 효소는 streptomycin처리, ammonium sulfate fractionation (40%-80%), CM-cellulose column chromatography, Ultrgel AcA44 gel filtration 등을 통하여 정제되었으며 polyacrylamide gel 전기영동상 단일 band를 나타내었다. 정제효소의 분자량은 43,500 dalton 정도이고, 단일 polypeptide chain으로 구성 되어있었다. 효소의 작용 최적온도는 37℃였고 40℃이상에서는 열에 불안정하였으며, 반응 최적pH는 7.0로 나타났고, pH 6.0에서 9.0까지 안정성을 보였다. 정제된 cephalosporinase의 활성은 Ag^(+), Pb^(2+), Cu^(2+) 등과 cloxacillin, iodoacetate, 등에 의해서 저해되었으며 Na^(+)에 의해서는 활성이 증가하여 50mM 농도에서 활성이 증가 하였다. 효소의 Km 값은 cefazolin 및 cephaloridine에 대하여 5mM였으며 Vmax값은 각각 3.57unit/ml/min과 2.12unit/ml/min으로 조사되었다.
A strain of Pseudomonas sp. was isolated from pathogenic bacterial samples. Among them, strain LAM95-110 with a high activity of Cephalosporinase(EC 3.5.2.6) was selected. Selected strain LAM95-110 was idendified as Pseudomonas aeruginosa on the basis of morphological, physiological, and biochemical...
A strain of Pseudomonas sp. was isolated from pathogenic bacterial samples. Among them, strain LAM95-110 with a high activity of Cephalosporinase(EC 3.5.2.6) was selected. Selected strain LAM95-110 was idendified as Pseudomonas aeruginosa on the basis of morphological, physiological, and biochemical characteristics. The production of Cephalosporinase reached its maximum value after 27hrs, when cultivated in the optimal medium containing 2% mannitol, 0.5% peptone, 0.5% tryptone, 0.2% NaCl at 30℃ with initial pH 7.0 and was not induced by substrate(cefazolin). The enzyme was purified by 4 steps with strepomycin treatment, ammonium sulfate fractionation (40-80%), CM-cellulosecolumn chromaography, and Ultrogel AcA 44 gel filtration and it's yield 7.4%. The final enzyme preparation gave a single band in the sodium dodesyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The purified enzyme had a molecular weight of approximately 43,500 and consisted of one subunit of identical molecular weight. Optimum temperature and pH for Cephalosporinase activity were 37℃ and pH 7.0, respectively. The enzyme was stable at pH 6.0-9.0 and unstable up to 40℃. The purified Cephalosporinase was activated by Na^(+) ion but strongly inhibited by Ag^(+), Pb^(2+), Cu^(2+), cloxacillin, and idoacetate. In kinetic studies, the Km values for cefazolin and cephaloridine were 5mM but Vmax value for cefazolin was 3.57unit/ml/min and that for cephaloridine was 2.12unit/ml/min(pH 7.0, 30℃).
A strain of Pseudomonas sp. was isolated from pathogenic bacterial samples. Among them, strain LAM95-110 with a high activity of Cephalosporinase(EC 3.5.2.6) was selected. Selected strain LAM95-110 was idendified as Pseudomonas aeruginosa on the basis of morphological, physiological, and biochemical characteristics. The production of Cephalosporinase reached its maximum value after 27hrs, when cultivated in the optimal medium containing 2% mannitol, 0.5% peptone, 0.5% tryptone, 0.2% NaCl at 30℃ with initial pH 7.0 and was not induced by substrate(cefazolin). The enzyme was purified by 4 steps with strepomycin treatment, ammonium sulfate fractionation (40-80%), CM-cellulosecolumn chromaography, and Ultrogel AcA 44 gel filtration and it's yield 7.4%. The final enzyme preparation gave a single band in the sodium dodesyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The purified enzyme had a molecular weight of approximately 43,500 and consisted of one subunit of identical molecular weight. Optimum temperature and pH for Cephalosporinase activity were 37℃ and pH 7.0, respectively. The enzyme was stable at pH 6.0-9.0 and unstable up to 40℃. The purified Cephalosporinase was activated by Na^(+) ion but strongly inhibited by Ag^(+), Pb^(2+), Cu^(2+), cloxacillin, and idoacetate. In kinetic studies, the Km values for cefazolin and cephaloridine were 5mM but Vmax value for cefazolin was 3.57unit/ml/min and that for cephaloridine was 2.12unit/ml/min(pH 7.0, 30℃).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.