아시아산 고둥인 총알고둥(Littorina brevicula)에서의 metallothionein의 분리와 정제 Isolation and purification of Metallothionein from an Asian Periwinkle Littorina brevicula원문보기
해양 복족류인 총알고둥(Littorina brevicula)을 400μgIL 의 카드륨(CdCI₂)에서 30일 동안 노출시켜 cadmium-binding metallothionein (Cd-MT)을 유도하였다. 총알고둥의 소화선, 생식선, 아가미와 신장부위에서 세포 내 카드륨의 분포는 대부분(80%)이 용해된 상태로 세포질 단백질과 결합하고 있는 것으로 나타났다. homogenized 조직의 supernatants 로부터 일련의 크로마토그래피 분리방법으로 Cd-MT가 정제되었다. reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase ...
해양 복족류인 총알고둥(Littorina brevicula)을 400μgIL 의 카드륨(CdCI₂)에서 30일 동안 노출시켜 cadmium-binding metallothionein (Cd-MT)을 유도하였다. 총알고둥의 소화선, 생식선, 아가미와 신장부위에서 세포 내 카드륨의 분포는 대부분(80%)이 용해된 상태로 세포질 단백질과 결합하고 있는 것으로 나타났다. homogenized 조직의 supernatants 로부터 일련의 크로마토그래피 분리방법으로 Cd-MT가 정제되었다. reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase HPLC) 후, 하나의 Cd-MT peak 를 얻었다. 이 peak의 SDS-PAGE 분석 결과, 45kDa 근처에서 broad single band가 나타났다. 이 MT fraction 을 carboxymethylation 으로 sulfhydryl 기를 방해한 후에/는 apparent 분자량이 16kDa 인 하나의 band 를 관찰할 수 있었다. 많은 thiol기들 사이의 inter-disulfide 결합에 의해 단백질들이 뭉치게 된 것으로 사료된다. 이 MT는 mass spectrometric 분석을 통해 8.5kDa 의 분자량을 갖는다는 것으로 나타났다.
해양 복족류인 총알고둥(Littorina brevicula)을 400μgIL 의 카드륨(CdCI₂)에서 30일 동안 노출시켜 cadmium-binding metallothionein (Cd-MT)을 유도하였다. 총알고둥의 소화선, 생식선, 아가미와 신장부위에서 세포 내 카드륨의 분포는 대부분(80%)이 용해된 상태로 세포질 단백질과 결합하고 있는 것으로 나타났다. homogenized 조직의 supernatants 로부터 일련의 크로마토그래피 분리방법으로 Cd-MT가 정제되었다. reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase HPLC) 후, 하나의 Cd-MT peak 를 얻었다. 이 peak의 SDS-PAGE 분석 결과, 45kDa 근처에서 broad single band가 나타났다. 이 MT fraction 을 carboxymethylation 으로 sulfhydryl 기를 방해한 후에/는 apparent 분자량이 16kDa 인 하나의 band 를 관찰할 수 있었다. 많은 thiol기들 사이의 inter-disulfide 결합에 의해 단백질들이 뭉치게 된 것으로 사료된다. 이 MT는 mass spectrometric 분석을 통해 8.5kDa 의 분자량을 갖는다는 것으로 나타났다.
This research examines the induction of cadmium-binding metallothionein (Cd-MT) from the marine gastropod, Littorina brevicula, which was exposed to 400 ㎍/L Cd for 30 days. The subcellular distribution of cadmium in combined tissues of the gill, digestive gland, gonad and kidney reveals that most ca...
This research examines the induction of cadmium-binding metallothionein (Cd-MT) from the marine gastropod, Littorina brevicula, which was exposed to 400 ㎍/L Cd for 30 days. The subcellular distribution of cadmium in combined tissues of the gill, digestive gland, gonad and kidney reveals that most cadmium(>80%) was bound to cytosolic (soluble) protein, metallothionein. The Cd-MT was purified from supernatant of homogenized tissues, using various chromatographic techniques. After reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase HPLC), one Cd-MT peak was acquired. SDS-PAGE analysis of this peak showed a broad single band, around 45kDa. After blocking the sulfhydryl residues (carboxymethylation of MT fraction), we could observe only one band having apparent molecular weight 16kDa. We infer that inter-disulfide linkage between many thiol group led to MT aggregation. Mass spectrometric analysis revealed that the molecular masses of the MT were about 8.5kDa.
This research examines the induction of cadmium-binding metallothionein (Cd-MT) from the marine gastropod, Littorina brevicula, which was exposed to 400 ㎍/L Cd for 30 days. The subcellular distribution of cadmium in combined tissues of the gill, digestive gland, gonad and kidney reveals that most cadmium(>80%) was bound to cytosolic (soluble) protein, metallothionein. The Cd-MT was purified from supernatant of homogenized tissues, using various chromatographic techniques. After reverse-phase high-performance liquid chromatography (reverse-phase HPLC), one Cd-MT peak was acquired. SDS-PAGE analysis of this peak showed a broad single band, around 45kDa. After blocking the sulfhydryl residues (carboxymethylation of MT fraction), we could observe only one band having apparent molecular weight 16kDa. We infer that inter-disulfide linkage between many thiol group led to MT aggregation. Mass spectrometric analysis revealed that the molecular masses of the MT were about 8.5kDa.
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