[학위논문]인간 T 세포, Jurkat에서 인테그린을 통한 세포외기질과의 부착에 있어서 4-1BB 신호전달 관한 연구 Adhesion of integrins to fibronectin through the 4-1BB signaling in Jurkat, a human T cell line원문보기
4-1BB(CD137)는 Tumor necrosis factor receptor(TNFR) superfamily의 한 군 (family)이다. 4-1BB는 활성화된 T 세포에서 발현되어지는 30 kDa의 분자량을 가진 transmembrane glycoprotein이며 활성화된 lymphocyte에서 틀이적으로 유도됨으로 ILA(induced of lymphocyte ...
4-1BB(CD137)는 Tumor necrosis factor receptor(TNFR) superfamily의 한 군 (family)이다. 4-1BB는 활성화된 T 세포에서 발현되어지는 30 kDa의 분자량을 가진 transmembrane glycoprotein이며 활성화된 lymphocyte에서 틀이적으로 유도됨으로 ILA(induced of lymphocyte activation)로써도 잘 알려져 있다. 4-1BB를 통한 signal은 T세포의 생존과 증식 그리고 cytokine인 IL-2생성에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 4-1BB를 통한 signal pathway는 아직 잘 밝혀져 있지는 않지만 traf2와 결합하는 것으로 알려져 있으며 TRAF2를 통한 signal은 NF-kB와 JNK를 활성화시키는 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 4-1BB를 통한 신호전달이 세포의 부착에 관여하는지를 확인하고자 한다. 이를 확인하기 위해서 두 가지 system, 즉 immobilized fibronectin(FN)과 soluble FN을 이용하여 규명하였다. Immobilized FN을 이용하여 실험한 경우에는 positive control로써 PMA와 Min^2+을 Jurkat 8-1에 처리하였으며 이때 negative control인 mouse IgG를 처리한 것 보다 각각 3.5배, 2배정도 증가하였다. 또한 4-1BB의 cross-linking에 의해서는 약 3배정도 증가하였다. Soluble FN을 이용하여 실험한 경우에서는 다소 낮은 부착정도를 보였지만 4-1BB의 경우 negative control에 비해 1.3배정도 증가하였으며 Min^2+의 경우는 약 2.6배정도 증가하였다. 하지만PMA의 경우는 거의 변화가 없었다. Jurkat 8-1을 4-1BB로 cross-linking시켰을 경우에 FN에 대한 Jurkat 8-1의 부착증가가 ß1 integrins에 의한 것인지를 규명하기 위해 antagonistic antibody인 anti-CD29(ß1 integrin)을 처리하여 integrins을 inhibition 시킨 후에 부착정도를 실험하였다. 결과 Jurkat 8-1의 FN에의 부착이 감소하는 것을 확인하였고 이것은 4-1BB를 통한 signal이 ß1 integrins을 활성화시킴으로써 FN에의 부착을 유도한 것이다. 또한 4-1BB의 cross-linking을 통해 신호를 전달 한 후 세포내 단백질들의 tyrosine phosphorylation의 변화를 확인함으로써 FN에의 부착을 매개하는 분자를 찾고자 하였다. 이에 약 60 kDa의 분자량을 가진 특정 protein의 tyrosine잔기의 인산화가 증가하는 것을 확인하였으며 TRAF2와 Luk의 단일 클론항체로 immunoblotting을 수행한 결과 TRAF2는 아니지만 Lck와 유사한 위치에 있음을 확인하였다. 그러나 아직 Lck라고 단정지을 수는 없으며 보다 구체적인 실험을 수행해야 할 것이다. 이 단백질을 규명하는 것은 4-1BB가 세포의 FN에의 부착을 유도하는 것을 보다 구체적으로 이해할 수 있으며 또한 ß1 integrins의 활성화를 기작을 이해하는 데에도 큰 도움이 되리라 기대되어진다.
4-1BB(CD137)는 Tumor necrosis factor receptor(TNFR) superfamily의 한 군 (family)이다. 4-1BB는 활성화된 T 세포에서 발현되어지는 30 kDa의 분자량을 가진 transmembrane glycoprotein이며 활성화된 lymphocyte에서 틀이적으로 유도됨으로 ILA(induced of lymphocyte activation)로써도 잘 알려져 있다. 4-1BB를 통한 signal은 T세포의 생존과 증식 그리고 cytokine인 IL-2생성에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 4-1BB를 통한 signal pathway는 아직 잘 밝혀져 있지는 않지만 traf2와 결합하는 것으로 알려져 있으며 TRAF2를 통한 signal은 NF-kB와 JNK를 활성화시키는 것으로 알려져 있다. 본 논문에서는 4-1BB를 통한 신호전달이 세포의 부착에 관여하는지를 확인하고자 한다. 이를 확인하기 위해서 두 가지 system, 즉 immobilized fibronectin(FN)과 soluble FN을 이용하여 규명하였다. Immobilized FN을 이용하여 실험한 경우에는 positive control로써 PMA와 Min^2+을 Jurkat 8-1에 처리하였으며 이때 negative control인 mouse IgG를 처리한 것 보다 각각 3.5배, 2배정도 증가하였다. 또한 4-1BB의 cross-linking에 의해서는 약 3배정도 증가하였다. Soluble FN을 이용하여 실험한 경우에서는 다소 낮은 부착정도를 보였지만 4-1BB의 경우 negative control에 비해 1.3배정도 증가하였으며 Min^2+의 경우는 약 2.6배정도 증가하였다. 하지만PMA의 경우는 거의 변화가 없었다. Jurkat 8-1을 4-1BB로 cross-linking시켰을 경우에 FN에 대한 Jurkat 8-1의 부착증가가 ß1 integrins에 의한 것인지를 규명하기 위해 antagonistic antibody인 anti-CD29(ß1 integrin)을 처리하여 integrins을 inhibition 시킨 후에 부착정도를 실험하였다. 결과 Jurkat 8-1의 FN에의 부착이 감소하는 것을 확인하였고 이것은 4-1BB를 통한 signal이 ß1 integrins을 활성화시킴으로써 FN에의 부착을 유도한 것이다. 또한 4-1BB의 cross-linking을 통해 신호를 전달 한 후 세포내 단백질들의 tyrosine phosphorylation의 변화를 확인함으로써 FN에의 부착을 매개하는 분자를 찾고자 하였다. 이에 약 60 kDa의 분자량을 가진 특정 protein의 tyrosine잔기의 인산화가 증가하는 것을 확인하였으며 TRAF2와 Luk의 단일 클론항체로 immunoblotting을 수행한 결과 TRAF2는 아니지만 Lck와 유사한 위치에 있음을 확인하였다. 그러나 아직 Lck라고 단정지을 수는 없으며 보다 구체적인 실험을 수행해야 할 것이다. 이 단백질을 규명하는 것은 4-1BB가 세포의 FN에의 부착을 유도하는 것을 보다 구체적으로 이해할 수 있으며 또한 ß1 integrins의 활성화를 기작을 이해하는 데에도 큰 도움이 되리라 기대되어진다.
4-IBB(CD137) is a member of tumor necrosis factor receptor(TINFR) superfamily that is expressed primarily on activated T cell. 4-IBB is induced by lymphocyte activation (ILA). Interaction of 4-IBB with its ligand or its agonistic antibodies augment IL-2 production and proliferation and survival of T...
4-IBB(CD137) is a member of tumor necrosis factor receptor(TINFR) superfamily that is expressed primarily on activated T cell. 4-IBB is induced by lymphocyte activation (ILA). Interaction of 4-IBB with its ligand or its agonistic antibodies augment IL-2 production and proliferation and survival of T cells, suggesting that 4-IBB functions as an important accessory molecule for T cell activation. Although the signal transduction pathways initiated by 4-IBB have not been well elucidated, p56^ICK and TRAF2 bind with 4-IBB cytoplasmic domain and transduce the signal. TRAF2 have been shown to be responsible for signal transduction pathways mediating NF-kB and JNK activation. On this study, we would document whether 4-IBB is responsible for cell adhesion. Integrin-mediated leukocyte adhesion is a critical aspect of leukocyte function that is tightly regulated by diverse stivuli, including CD2, CD3, CD7, CD28 and PMA, Min^2+, chemokines. To characterize, we used two systems of soluble fibronectin (FN) and immobilized FN treatment. Treatment of PMA, or Min^2+ as positive control on Jurkat 8-1 was increased each 3.5-fold and 2-fold to negative control. Cross-linking of anti-4-IBB mAb on Jurkat 8-1 was increased 3-fold to negative control in immobilized FN system. Contrast to immobilized FN system, corss-linking of anti-4-1BB mAb on Jurkat 8-1 was increased slightly in soluble fibronectin system. Increasement of adhesion through croo-linking of anti-4-1BB mAb on Jurkat 8-1 reduced by treatment of antagonistic anti-CD29 (beta 1 integrin) mAb. And then we performed immunoblot to identify the change of tyrosine phosphorylation in cytoplasmic proteins for searching of proteins mediating adhesion signal through 4-1BB. As a result, we found about a 60 kDa protein. In further study, we have to chracterize the 60 kDa protein and it's characterization will improve the understanding of adhesion signal between 4-1BB and integrin.
4-IBB(CD137) is a member of tumor necrosis factor receptor(TINFR) superfamily that is expressed primarily on activated T cell. 4-IBB is induced by lymphocyte activation (ILA). Interaction of 4-IBB with its ligand or its agonistic antibodies augment IL-2 production and proliferation and survival of T cells, suggesting that 4-IBB functions as an important accessory molecule for T cell activation. Although the signal transduction pathways initiated by 4-IBB have not been well elucidated, p56^ICK and TRAF2 bind with 4-IBB cytoplasmic domain and transduce the signal. TRAF2 have been shown to be responsible for signal transduction pathways mediating NF-kB and JNK activation. On this study, we would document whether 4-IBB is responsible for cell adhesion. Integrin-mediated leukocyte adhesion is a critical aspect of leukocyte function that is tightly regulated by diverse stivuli, including CD2, CD3, CD7, CD28 and PMA, Min^2+, chemokines. To characterize, we used two systems of soluble fibronectin (FN) and immobilized FN treatment. Treatment of PMA, or Min^2+ as positive control on Jurkat 8-1 was increased each 3.5-fold and 2-fold to negative control. Cross-linking of anti-4-IBB mAb on Jurkat 8-1 was increased 3-fold to negative control in immobilized FN system. Contrast to immobilized FN system, corss-linking of anti-4-1BB mAb on Jurkat 8-1 was increased slightly in soluble fibronectin system. Increasement of adhesion through croo-linking of anti-4-1BB mAb on Jurkat 8-1 reduced by treatment of antagonistic anti-CD29 (beta 1 integrin) mAb. And then we performed immunoblot to identify the change of tyrosine phosphorylation in cytoplasmic proteins for searching of proteins mediating adhesion signal through 4-1BB. As a result, we found about a 60 kDa protein. In further study, we have to chracterize the 60 kDa protein and it's characterization will improve the understanding of adhesion signal between 4-1BB and integrin.
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