초록 ▼

용어보기논문에서 용어와 풀이말을 자동 추출한 결과로, 시범 서비스 중입니다. AI-Helper

세포를 이용한 외부유전자 발현 기술은 단백질의 효율적 생산성과 단백질 분리 정제 용이성의 극대화 측면에서 많은 연구가 진행되어왔다. 포유 동물세포에서의 외부 유전자의 발현은 박테리아 및 하등 진핵세포의 경우에 비해 정제과정과 효율성이 불리하지만 높은 생리적 활성도 때문에 단백질 의약품 생산에 많이 이용되고 있다. 고등 진핵생물의 많은 단백질들은 생리적 활성을 갖게 하는 glycosylation과 같은 post-translation modification 과정을 거치게 된다. 그러므로 박테리아 및 하등 진핵세포는 고등 진핵생물의 단백질들을 활성을 갖는 형태로 생산하는데는 사용할 수 없다. 이로 인해 포유 동물세포에서의 외부 유전자 발현 system에 관해 중점적 연구가 진행되어왔다. 본 연구자는 포유동물세포인 CHO cell을 이용해서 인체에 유용한 단백질인 human ...

세포를 이용한 외부유전자 발현 기술은 단백질의 효율적 생산성과 단백질 분리 정제 용이성의 극대화 측면에서 많은 연구가 진행되어왔다. 포유 동물세포에서의 외부 유전자의 발현은 박테리아 및 하등 진핵세포의 경우에 비해 정제과정과 효율성이 불리하지만 높은 생리적 활성도 때문에 단백질 의약품 생산에 많이 이용되고 있다. 고등 진핵생물의 많은 단백질들은 생리적 활성을 갖게 하는 glycosylation과 같은 post-translation modification 과정을 거치게 된다. 그러므로 박테리아 및 하등 진핵세포는 고등 진핵생물의 단백질들을 활성을 갖는 형태로 생산하는데는 사용할 수 없다. 이로 인해 포유 동물세포에서의 외부 유전자 발현 system에 관해 중점적 연구가 진행되어왔다. 본 연구자는 포유동물세포인 CHO cell을 이용해서 인체에 유용한 단백질인 human EPO (EPO) 를 생산하였다. human EPO cDNA를 운반할 vector로는 효과적인 발현을 위한 pMSG로 transcription terminator region과 selection antibiotic region (ampicillin) 그리고 multiple cloning site로 구성되어 있고 그 크기는 약 6.3kb 정도이다. 이 벡터의 효과적인 expression을 확인하기 위하여 hEPO protein에 specific한 antibody를 사용한 Western blot 방법으로 EPO의 발현과 양을 확인하였다. 또 위의 cell line을 suspension culture에 adaptation 시킴으로써 고역가의 human EPO를 경제적으로 얻을 수 있는 재조합 세포주를 개발하였다. 이 세포주로부터 human EPO를 제조하는 방법에 대하여 연구한 결과 pMSG-hEPO gene을 CHO cell에 형질 전환시키고 suspension culture에 적응시킨 결과 약 30㎍/106cell/day 의 human EPO를 생산함을 확인하였다. 기린-암젠사의 특허 (국제특허공개 85-2610호) 세포주 10.5μg/106cell/day 생산량보다 약 3배 가량 증가한 양이다.

Abstract ▼ AI-Helper

Erythropoietin (EPO), a glycoprotein involved in the proliferation and differentiation of erythroid progenitor cells has been used for the treatment of anemia resulting from chronic renal failure as well as AZT treatment of AIDS patients. Since the high degree of glycosylation in EPO is critical for...

Erythropoietin (EPO), a glycoprotein involved in the proliferation and differentiation of erythroid progenitor cells has been used for the treatment of anemia resulting from chronic renal failure as well as AZT treatment of AIDS patients. Since the high degree of glycosylation in EPO is critical for its in vivo activity and stability, the expression of highly glycosylated form of EPO from CHO cells is very important for its pharmaceutical production. To overcome the limitation in the large-scale production of recombinant EPO, a recently developed vector system, which allows the position-independent stable expression of the foreign gene, was employed for the efficient expression of EPO. A CHO cell line stably expressing human EPO at the level of 30㎍/106cell/day was obtained after methotrexate selection. We have tested the growth of this cell line in the suspension culture. It was initially adapted to chemically defined medium, CD-CHO, for 2 weeks under the adherent growth condition and then to suspension culture. The high level of EPO expression under the suspension culture condition was stably maintained

주제어