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단백질은 3차원 구조를 가지고 있어 단백질칩을 제작할 때에 고체 지지체 위에 방향성을 가지고 고정할 필요가 있다. 단백질을 칩 위에 고정화할 때에 비오틴-애비딘 결합을 이용하는 것은 그 결합력이 매우 강하고(K_(d) = 10^(-15)), 단백질이 고체지지체 위에 직접 공유결합으로 결합하면서 생길 수 있는 물리, 화학적 변성을 최소화할 수 있으므로 단백질 고정화 방법에 적합하다. ...

단백질은 3차원 구조를 가지고 있어 단백질칩을 제작할 때에 고체 지지체 위에 방향성을 가지고 고정할 필요가 있다. 단백질을 칩 위에 고정화할 때에 비오틴-애비딘 결합을 이용하는 것은 그 결합력이 매우 강하고(K_(d) = 10^(-15)), 단백질이 고체지지체 위에 직접 공유결합으로 결합하면서 생길 수 있는 물리, 화학적 변성을 최소화할 수 있으므로 단백질 고정화 방법에 적합하다. 유전자 재조합을 이용하여 목적단백질의 N-말단과 C-말단에 세포 내에서 비오틴 리가아제에 의해 비오틴이 결합되는 펩타이드 서열을 삽입한 뒤 비오틴 리가아제를 포함하고 있는 박테리아에서 발현시켜 비오틴화된 단백질을 얻었다. 이 방법은 안전하고 간편하게 단백질을 비오틴화하여 정제할 수 있는 방법이다. 인공 비오틴 수용체가 입혀진 유리 기판 위에 N-말단과 C-말단으로 방향성이 제어된 GST 단백질을 고정화하고 폴리클론항체와 단일클론항체를 반응시켜 결합을 알아보았다. 방향성이 제어된 단백질칩은 단백질의 기능과 상호작용을 분석하는 데 있어서 많은 기여를 할 것으로 기대된다.

Abstract ▼ AI-Helper

Proteins do function properly when they have their own 3-dimensional structures. Especially, this is very important to study the function of proteins on solid surface. Biotin-avidin interaction is suitable to immobilize protein on glass slide because their interaction is very strong(K_(d) = 10^(-15)...

Proteins do function properly when they have their own 3-dimensional structures. Especially, this is very important to study the function of proteins on solid surface. Biotin-avidin interaction is suitable to immobilize protein on glass slide because their interaction is very strong(K_(d) = 10^(-15)) and immobilized proteins on solid surface by this interaction is maintained their own structures, compared with directly immobilized proteins by covalent bonding that may change their physical and chemical properties. N-terminally and C-terminally in vitro biotinylated peptide sequence is inserted to target protein using molecular cloning. Biotinylation to each protein is accomplished in bacteria containing biotin ligase gene. This process is very safe and easy to express and purify biotinylated proteins. We carried out immobilization of N-terminally and C-terminally biotinylated GST on glass slide covered with artificial streptavidin and studied binding immoiblized GST with polyclonal antibody and monoclonal antibody. Site-specific immobilized protein chip will contribute the analysis of function and interaction of proteins.

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