Purification and characterization of an antifungal protein from bacillus amyloliquefaciens MET 0908 : Bacillus amyloliquefaciens MET 0908이 생산하는 항진균 활성 물질의 분리·정제 및 특성에 관한 연구원문보기
병에 걸린 수박 잎, 줄기, 과실로부터 탄저병을 유발하는 식물병원균 Colletotrichum lagenarium을 분리하였다, 이들 식물병원균에 대해 강력한 항진균활성을 보이는 길항미생물 MET 0908을 토양으로부터 분리하였으며, 이 미생물은 Bacillus amyloliquefaciens로 동정되었다. 분리, 동정된 길항균과 식물병원균을 혼합배양하여 얻은 배양여액을 탄저병균에 처리한 결과, 식물병원균의 ...
병에 걸린 수박 잎, 줄기, 과실로부터 탄저병을 유발하는 식물병원균 Colletotrichum lagenarium을 분리하였다, 이들 식물병원균에 대해 강력한 항진균활성을 보이는 길항미생물 MET 0908을 토양으로부터 분리하였으며, 이 미생물은 Bacillus amyloliquefaciens로 동정되었다. 분리, 동정된 길항균과 식물병원균을 혼합배양하여 얻은 배양여액을 탄저병균에 처리한 결과, 식물병원균의 균사 성장을 강력하게 억제하였다. 길항균과 식물 병원균을 30℃, pH 6.0에서 5일 동안 혼합배양하였을 경우 최적의 항진균활성을 나타냈다. In vivo bioassay, pot assay 실험결과, 혼합배양된 배양여액은 병원균을 강력하게 억제하였다. 또한 수박탄저병 예방에 사용되는 농약과 비교했을 경우에도 더 강력한 항진균활성을 나타냈다. 항진균활성을 나타내는 물질을 30% 황산암모늄에 의한 침전, 이온교환수지크로마토그래피, 젤 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 단백질 전기영동에 의해 분자량을 측정한 결과 약 38 및 40 kDa의 단백질로 확인되었다. 정제된 단백질은 80℃ 에서도 항진균활성을 유지했으며, 수박 덩굴마름병균, 고추탄저병균, 고추역병균등 많은 종류의 식물병원균들에 대해서도 항진균활성을 나타냈다. Confocal microscopy와 전자현미경 관찰 결과, 정제된 단백질은 병원균의 세포벽에 작용하는 것으로 추정되었으며, 병원균의 세포벽을 구성하는 chitin, chitosan, cellulose, S-glucan에 대한 기질 특이성을 조사한 결과 이 단백질은 endo-S-glucanase로 확인되었다. 정제된 38 kDa 및 40 kDa 단백질의 N-말단 아미노산 서열을 비교, 분석한 결과 각각, Ser-Lys-Ile-X-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-X-Gln-Ala-Pro-Ala-Pro-X-Ala-, Asn-Lys-Ile-X-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile--Asp-Ala-Pro-X-Pro-X-Ala--으로 밝혀졌으며, 기존에 알려진 S-glucanase와 아미노산 서열을 비교한 결과 기존에 밝혀진 단백질 및 항진균성 단백질과는 전혀 다른 아미노산 서열을 갖고 있음을 확인하였다. 따라서 B. amyloliquefaciens MET 0908이 생산하는 S-glucanase는 아마도 기존에 알려지지 않은 새로운 단백질로 추정된다.
병에 걸린 수박 잎, 줄기, 과실로부터 탄저병을 유발하는 식물병원균 Colletotrichum lagenarium을 분리하였다, 이들 식물병원균에 대해 강력한 항진균활성을 보이는 길항미생물 MET 0908을 토양으로부터 분리하였으며, 이 미생물은 Bacillus amyloliquefaciens로 동정되었다. 분리, 동정된 길항균과 식물병원균을 혼합배양하여 얻은 배양여액을 탄저병균에 처리한 결과, 식물병원균의 균사 성장을 강력하게 억제하였다. 길항균과 식물 병원균을 30℃, pH 6.0에서 5일 동안 혼합배양하였을 경우 최적의 항진균활성을 나타냈다. In vivo bioassay, pot assay 실험결과, 혼합배양된 배양여액은 병원균을 강력하게 억제하였다. 또한 수박탄저병 예방에 사용되는 농약과 비교했을 경우에도 더 강력한 항진균활성을 나타냈다. 항진균활성을 나타내는 물질을 30% 황산암모늄에 의한 침전, 이온교환수지 크로마토그래피, 젤 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 단백질 전기영동에 의해 분자량을 측정한 결과 약 38 및 40 kDa의 단백질로 확인되었다. 정제된 단백질은 80℃ 에서도 항진균활성을 유지했으며, 수박 덩굴마름병균, 고추탄저병균, 고추역병균등 많은 종류의 식물병원균들에 대해서도 항진균활성을 나타냈다. Confocal microscopy와 전자현미경 관찰 결과, 정제된 단백질은 병원균의 세포벽에 작용하는 것으로 추정되었으며, 병원균의 세포벽을 구성하는 chitin, chitosan, cellulose, S-glucan에 대한 기질 특이성을 조사한 결과 이 단백질은 endo-S-glucanase로 확인되었다. 정제된 38 kDa 및 40 kDa 단백질의 N-말단 아미노산 서열을 비교, 분석한 결과 각각, Ser-Lys-Ile-X-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-X-Gln-Ala-Pro-Ala-Pro-X-Ala-, Asn-Lys-Ile-X-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile--Asp-Ala-Pro-X-Pro-X-Ala--으로 밝혀졌으며, 기존에 알려진 S-glucanase와 아미노산 서열을 비교한 결과 기존에 밝혀진 단백질 및 항진균성 단백질과는 전혀 다른 아미노산 서열을 갖고 있음을 확인하였다. 따라서 B. amyloliquefaciens MET 0908이 생산하는 S-glucanase는 아마도 기존에 알려지지 않은 새로운 단백질로 추정된다.
A plant pathogenic fungus, Colletotrichum lagenarium causing watermelon anthracnose was isolated from naturally infected leaves, stems, and fruits of watermelon. A bacterial strain MET 0908, showing a powerful antifungal activity against the C. lagenarium pathogen, was isolated from soil, and identi...
A plant pathogenic fungus, Colletotrichum lagenarium causing watermelon anthracnose was isolated from naturally infected leaves, stems, and fruits of watermelon. A bacterial strain MET 0908, showing a powerful antifungal activity against the C. lagenarium pathogen, was isolated from soil, and identified as Bacillus amyloliquefaciens. The culture filtrates of the isolate co-cultured with C. lagenarium significantly inhibited fungal growth. The antifungal activity was observed maximum level after 5 days co-culture at 30℃ from B. amyliliquefaciens MET 0908 with C. lagenarium. Maximum production of the antifungal activity was observed at 30℃ and at pH 6.0. In in vivo bioassay and pot assay, the crude extracts of co-culture showed strong antifungal activity against C. lagenarium. In comparison with agricultural chemicals, the crude extracts exhibited better effect than that chemicals known to work against plant pathogens. Two antifungal proteins were purified by 30% ammonium sulfate saturation, concentration using Centricon, DEAE-Sepharose^(TM) Fast Flow column chromatography and Sephacryl S-100 gel filtration chromatography. Molecular weights of purified proteins were estimated as 38 and 40 kDa by SDS-PAGE, respectively. The purified proteins were very stable up to 80℃ for 20 min and exhibited a broad spectrum of antifungal activity against various fungi including Venturia sp., Fusarium sp., Fusarium gramineaum, Pythium ultinum, Phytophthora, capsici. Didymella bryoniae, Monosporascus canonballus and Colletotrichum gloeosporioides. A confocal microscopy and scanning electron microscopy showed that antifungal proteins act on the cell wall of C. lagenarium. In the study of substrates specificity to fungal cell wall components including chitin, chitosan, cellulose, and S-glucan, the purified proteins exhibited S-glucanase activity. The N-terminal amino acid sequences of the antifungal proteins 38 kDa and 40 kDa were determined as Ser-Lys-Ile-x-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-x-Gln-Ala-Pro-Ala-Pro-x-Ala, Asn-Lys-Ile-x-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-x-Asp-Ala-Pro-x-Pro-Ala, respectively. On the search of National Center for Biotechnology Information(NCBI) BLAST, the sequences of the purified proteins showed no significant homology with any known antifungal proteins and these results suggest that purified proteins may be a novel ones.
A plant pathogenic fungus, Colletotrichum lagenarium causing watermelon anthracnose was isolated from naturally infected leaves, stems, and fruits of watermelon. A bacterial strain MET 0908, showing a powerful antifungal activity against the C. lagenarium pathogen, was isolated from soil, and identified as Bacillus amyloliquefaciens. The culture filtrates of the isolate co-cultured with C. lagenarium significantly inhibited fungal growth. The antifungal activity was observed maximum level after 5 days co-culture at 30℃ from B. amyliliquefaciens MET 0908 with C. lagenarium. Maximum production of the antifungal activity was observed at 30℃ and at pH 6.0. In in vivo bioassay and pot assay, the crude extracts of co-culture showed strong antifungal activity against C. lagenarium. In comparison with agricultural chemicals, the crude extracts exhibited better effect than that chemicals known to work against plant pathogens. Two antifungal proteins were purified by 30% ammonium sulfate saturation, concentration using Centricon, DEAE-Sepharose^(TM) Fast Flow column chromatography and Sephacryl S-100 gel filtration chromatography. Molecular weights of purified proteins were estimated as 38 and 40 kDa by SDS-PAGE, respectively. The purified proteins were very stable up to 80℃ for 20 min and exhibited a broad spectrum of antifungal activity against various fungi including Venturia sp., Fusarium sp., Fusarium gramineaum, Pythium ultinum, Phytophthora, capsici. Didymella bryoniae, Monosporascus canonballus and Colletotrichum gloeosporioides. A confocal microscopy and scanning electron microscopy showed that antifungal proteins act on the cell wall of C. lagenarium. In the study of substrates specificity to fungal cell wall components including chitin, chitosan, cellulose, and S-glucan, the purified proteins exhibited S-glucanase activity. The N-terminal amino acid sequences of the antifungal proteins 38 kDa and 40 kDa were determined as Ser-Lys-Ile-x-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-x-Gln-Ala-Pro-Ala-Pro-x-Ala, Asn-Lys-Ile-x-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-Asn-Ile-x-Asp-Ala-Pro-x-Pro-Ala, respectively. On the search of National Center for Biotechnology Information(NCBI) BLAST, the sequences of the purified proteins showed no significant homology with any known antifungal proteins and these results suggest that purified proteins may be a novel ones.
주제어
#antifungal protein bacillus amyloliquefaciens MET 0908 항진균활성물질
학위논문 정보
저자
김평일
학위수여기관
전남대학교 대학원
학위구분
국내박사
학과
농생물학과
발행연도
2002
총페이지
91p.
키워드
antifungal protein bacillus amyloliquefaciens MET 0908 항진균활성물질
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