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본 실험은 Vesicular Stomatitis Virus (VSV)-G 단백질을 외피단백질 (envelope protein)로 가지는 가성 베큘로바이러스 (Baculovirus)를 개발하기 위하여 고안되었다. VSV-G 유전자는 Polyhedrin 프로모터의 조절을 통하여 발현한다. 그러므로, G 유전자는 이것이 감염된 곤충세포에서는 매우 높은 수준의 발현을 보이지만, ...

본 실험은 Vesicular Stomatitis Virus (VSV)-G 단백질을 외피단백질 (envelope protein)로 가지는 가성 베큘로바이러스 (Baculovirus)를 개발하기 위하여 고안되었다. VSV-G 유전자는 Polyhedrin 프로모터의 조절을 통하여 발현한다. 그러므로, G 유전자는 이것이 감염된 곤충세포에서는 매우 높은 수준의 발현을 보이지만, 포유동물 세포에서는 발현하지 못한다. 가성 베큘로바이러스의 외피에 VSV-G 단백질이 발현함을 Western blotting을 통하여 확인하였다. 이러한 재조합 베큘로바이러스는 간암세포에 특이적인 발현을 유도하는 AFP (알파-페토프로테인) 프로모터를 포함하고 있다. 인간 AFP 프로모터/엔헨서 (BacG-AFP-Luc+)의 조절하에 발현하는 루시페라아제 유전자를 포함하는 재조합 베큘로바이러스의 기내배양 후, 루시페라아제 유전자의 발현은 AFP를 발현하는 Huh7과 HepG2 세포주에서는 발현하였으나, AFP를 형성하지 못하는 세포에서는 발현하지 못하였다. 인간 간암 세포에 전달된 재조합 베큘로바이러스 (BacG-AFP-Luc+)는 VSV-G를 가지지 않는 재조합 베큘로바이러스 (Bac-AFP-Luc+)에 비하여 유전자 전달의 효과가 5배 이상 높게 나타났다. 본 연구에서는 생체내에서 EGFP 발현을 유도하기 위하여, CMV프로모터의 조절을 통하여 EGFP를 발현하는 재조합 베큘로바이러스를 만들었다 (BacG-CMV-EGFP). EGFP의 유전자 전달효율은 전달체로서 재조합 베큘로바이러스를 사용하여 정상 쥐 방광에서 연구하였다. 생체내 방광조직에서 바이러스에 의한 유전자의 전달이 가능하였다. 본 연구를 통하여 재조합 베큘로바이러스가 생체내에서 종양세포로 전달될 수 있음을 보였다. 베큘로바이러스 전달체를 이용한 AFP 프로모터 / 엔헨서의 사용은 유전자치료를 적용함에 있어서 많은 기여를 할 수 있을 것이다.

Abstract ▼ AI-Helper

We have developed the recombinant baculovirus pseudotyped with Vesicular Stomatitis Virus (VSV) G protein. The VSV-G gene was under the control of the polyhedrin promoter so that it was expressed at high levels in infected insect cells but not in mammalian cells. The presence of VSV-G protein in pur...

We have developed the recombinant baculovirus pseudotyped with Vesicular Stomatitis Virus (VSV) G protein. The VSV-G gene was under the control of the polyhedrin promoter so that it was expressed at high levels in infected insect cells but not in mammalian cells. The presence of VSV-G protein in purified baculovirus preparations was confirmed by Western analysis. This recombinant baculovirus also carried human AFP (α-Fetoprotein) promoter for hepatocyte specific gene expression. After an in vitro infection by a recombinant baculovirus carrying the luciferase gene under the control of human AFP promoter/enhancer (BacG-AFP-Luc+), the luciferase gene was expressed in AFP-producing Huh7 and HepG2 cell lines, but not in AFP-non-producing cell lines. BacG-AFP-Luc+ transduced with human hepatoma cells in vitro at efficiency about fivefold greater than the recombinant baculovirus lacking VSV-G (the virus Bac-AFP-Luc+). In the present study, to induce EGFP (Enhanced Green Fluorescence Protein) expression in vivo, this study constructed a recombinant baculovirus vector containing the EGFP gene under the control of CMV promoter (BacG-CMV-EGFP). The transduction efficacy of an EGFP was investigated in a normal rat bladder tissue using a recombinant baculovirus as delivery vehicle. The virus in vivo can transduce the bladder tissue. These experiments demonstrate the feasibility of in vivo transduction of tumor cell with recombinant baculovirus. The utilization of the AFP promoter/enhancer in a baculovirus vector could provide benefits in gene therapy applications.

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