KAI1은 전렵선암의 전이 억제 유전자로 알려진 이래 여러 종류의 암에서 전이를 억제하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있다. Transmembrane 4 superfamily (TM4SF) 중 하나인 transmembrane 당단백을 암호하고있는 KAI1 은 인간 염색체 11p11.1에 위치하며 다양한 암에서 전이를 억제하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있다. KAI1의 발현감소는 좋지 않은 예후와 관련되어있는데, 이는 일반적으로 감소된 KAI1 단백에 의해 시험관에서 세포의 침윤력이 증가되며, 세포간의 상호작용이 감소하며, 세포의 세포 외 기질간의 유착정도가 달라지고, 생체 내에서의 전이능력의 증가를 보여준다. 본 연구에서 KAI1 유전 차의 C-말단 부분에 28 아미노산이 결손된 alternatively Splice variant가 존재함을 발견하였고, 이 splice KAI1 유전자가 대장암세포의 전이와 침윤에 미치는 영향을 연구하고자 하였다. wild 및 splice형 KAI1 전이억제 단백이 안정되게 과발현된 대장암 ...
KAI1은 전렵선암의 전이 억제 유전자로 알려진 이래 여러 종류의 암에서 전이를 억제하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있다. Transmembrane 4 superfamily (TM4SF) 중 하나인 transmembrane 당단백을 암호하고있는 KAI1 은 인간 염색체 11p11.1에 위치하며 다양한 암에서 전이를 억제하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있다. KAI1의 발현감소는 좋지 않은 예후와 관련되어있는데, 이는 일반적으로 감소된 KAI1 단백에 의해 시험관에서 세포의 침윤력이 증가되며, 세포간의 상호작용이 감소하며, 세포의 세포 외 기질간의 유착정도가 달라지고, 생체 내에서의 전이능력의 증가를 보여준다. 본 연구에서 KAI1 유전 차의 C-말단 부분에 28 아미노산이 결손된 alternatively Splice variant가 존재함을 발견하였고, 이 splice KAI1 유전자가 대장암세포의 전이와 침윤에 미치는 영향을 연구하고자 하였다. wild 및 splice형 KAI1 전이억제 단백이 안정되게 과발현된 대장암 세포주를 각각 확립하여 RT-PCR과 western blot을 통해 KAI1 mRNA 및 단백의 발현정도를 측정하였다, Immunoprecipitation 방법으로 단백결함능을 보고, 세포수준에서 cell adhesion 및 cell migration assay를 시행하여 세포의 운동성과 침윤력에 미치는 영창을 살폈고 정상 및 splice형 KAI1 단백이 안정되게 과발현된 세포주를 syngeneic host (CT-26 cell:Balb/c mouse)의 피하에 주입하여 각각의 종양형성 능력을 비교하였다, 대장암 조직에서 정상 KAI1과 splice형 KAI1의 발현은 전이 병소 및 예후가 불량한 조직에서 splice형 KAI1 mRNA의 발현이 증가되어 있었다. 정상 및 splice형 KAI1 유전자를 CT-26 대장암 세포주에 transfection 시켜서 RT-PCR을 한 결과 정상과 splice형 KAI1 mRNA 및 단백이 안정되게 과발현된 대장암 세포주플 얻을 수 있었다. 세포 유착 실험결과 splice형 KA11을 과발현시킨 세포에서 세포와 기질 간의 유착정도가 현저히 증가하였고, integrin α3β1과의 면역침강법을 이용한 실험결과에서 정상 KAI1 단백과 integrin α3β1과의 결합보다 splice형 KA11과는 약해진 결합을 확인하였다. 또한 Transwell migration apparatus를 이용한 세포 침윤 검사상 CT-26/splice KAI1 이 운동성과 침윤력이 높았고, 동물 실험에서 정상 및 splice형 KAI1 전이억제 단백이 안정되게 과발현된 세포주를 syngeneic host Balb/c mouse의 피하에 주입하여 각각의 종양 형성 능력을 본 결과, CT-26/splice KAI1 세포주를 주입한 mouse에서 종양 형성이 증가됨을 보였다. 정상 KAI1과 splice형 KAI1간의 세포 운동성과 성장 그리고 전이에 미치는 기능적 차이는 정상 KAI1의 세포막을 관통하는 구조적인 특성으로 미루어 다른 조절 단백과의 상호작용에 중요한 두 KAI1 단백의 구조적 차이로 인해 splice형 KAI1로 인한 복합체 구조의 실패로 인해 cytoske1etal architecture의 조절에 이상을 가져올 수 있을 것으로 가정된다, 이에 본 결과는 splice형 KAI1 단백은 암전이 억제 기전에서 세포 유착 및 전이력이 증가됨을 보이는 것으로 정상 KAI1 단백에 비해 암전이 억제 기전이 상실됨을 시사하였다.
KAI1은 전렵선암의 전이 억제 유전자로 알려진 이래 여러 종류의 암에서 전이를 억제하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있다. Transmembrane 4 superfamily (TM4SF) 중 하나인 transmembrane 당단백을 암호하고있는 KAI1 은 인간 염색체 11p11.1에 위치하며 다양한 암에서 전이를 억제하는데 중요한 기능을 한다고 알려져 있다. KAI1의 발현감소는 좋지 않은 예후와 관련되어있는데, 이는 일반적으로 감소된 KAI1 단백에 의해 시험관에서 세포의 침윤력이 증가되며, 세포간의 상호작용이 감소하며, 세포의 세포 외 기질간의 유착정도가 달라지고, 생체 내에서의 전이능력의 증가를 보여준다. 본 연구에서 KAI1 유전 차의 C-말단 부분에 28 아미노산이 결손된 alternatively Splice variant가 존재함을 발견하였고, 이 splice KAI1 유전자가 대장암세포의 전이와 침윤에 미치는 영향을 연구하고자 하였다. wild 및 splice형 KAI1 전이억제 단백이 안정되게 과발현된 대장암 세포주를 각각 확립하여 RT-PCR과 western blot을 통해 KAI1 mRNA 및 단백의 발현정도를 측정하였다, Immunoprecipitation 방법으로 단백결함능을 보고, 세포수준에서 cell adhesion 및 cell migration assay를 시행하여 세포의 운동성과 침윤력에 미치는 영창을 살폈고 정상 및 splice형 KAI1 단백이 안정되게 과발현된 세포주를 syngeneic host (CT-26 cell:Balb/c mouse)의 피하에 주입하여 각각의 종양형성 능력을 비교하였다, 대장암 조직에서 정상 KAI1과 splice형 KAI1의 발현은 전이 병소 및 예후가 불량한 조직에서 splice형 KAI1 mRNA의 발현이 증가되어 있었다. 정상 및 splice형 KAI1 유전자를 CT-26 대장암 세포주에 transfection 시켜서 RT-PCR을 한 결과 정상과 splice형 KAI1 mRNA 및 단백이 안정되게 과발현된 대장암 세포주플 얻을 수 있었다. 세포 유착 실험결과 splice형 KA11을 과발현시킨 세포에서 세포와 기질 간의 유착정도가 현저히 증가하였고, integrin α3β1과의 면역침강법을 이용한 실험결과에서 정상 KAI1 단백과 integrin α3β1과의 결합보다 splice형 KA11과는 약해진 결합을 확인하였다. 또한 Transwell migration apparatus를 이용한 세포 침윤 검사상 CT-26/splice KAI1 이 운동성과 침윤력이 높았고, 동물 실험에서 정상 및 splice형 KAI1 전이억제 단백이 안정되게 과발현된 세포주를 syngeneic host Balb/c mouse의 피하에 주입하여 각각의 종양 형성 능력을 본 결과, CT-26/splice KAI1 세포주를 주입한 mouse에서 종양 형성이 증가됨을 보였다. 정상 KAI1과 splice형 KAI1간의 세포 운동성과 성장 그리고 전이에 미치는 기능적 차이는 정상 KAI1의 세포막을 관통하는 구조적인 특성으로 미루어 다른 조절 단백과의 상호작용에 중요한 두 KAI1 단백의 구조적 차이로 인해 splice형 KAI1로 인한 복합체 구조의 실패로 인해 cytoske1etal architecture의 조절에 이상을 가져올 수 있을 것으로 가정된다, 이에 본 결과는 splice형 KAI1 단백은 암전이 억제 기전에서 세포 유착 및 전이력이 증가됨을 보이는 것으로 정상 KAI1 단백에 비해 암전이 억제 기전이 상실됨을 시사하였다.
The KAI1, a metastasi3 suppressor gene for prostate cancer, is reported to be correlated with the progression of a variety of other human cancers, It belongs to the transmembrane 4 superfamily (TM4SF), and the studies of TM4SF proteins have emphasized their inhibitory effects on in vitro tumor cell ...
The KAI1, a metastasi3 suppressor gene for prostate cancer, is reported to be correlated with the progression of a variety of other human cancers, It belongs to the transmembrane 4 superfamily (TM4SF), and the studies of TM4SF proteins have emphasized their inhibitory effects on in vitro tumor cell motility and in vitro metastasis. A splice variant of KAI1 was found through RT-PCR analysis, which lacks 28 amino acids that span from distal part of second extracellular loop to part of fourth transmembrane region. The genomic DNA analysis revealed that altarnative splice of exon 7 resulted the splice variant of KAI1. To analyse the role of splice KAI1 in motility and metastalic process of mouse colon adenocarcinoma (CT-26) cells, two stable cell lines that express wild-type (CT-26/wild KAI1) or splice variant of KAI1 (CT-26/splice KAU) were established. Immunoprecipitation study showed that the interaction of splice KAI1 with integrin α3β1 was more decreased than that of wild KAI1. Also, CT-26/splice KAI1 cells showed increased in vitro invasive potential and cell-extracellular matrix (ECM) adhesion as well as an increased in vivo tumorigenicity compared with those of CT-26/wild KAI1, These results indicate that the metastasis suppressor function of splice KAI1 was decreased compared with wild KAI1, and suggest that the functional difference of effects on cell motility, growth and metastasis between wild and splice KAI1 might be explained partially by structural differences of two KAI1 proteins, which are important in the interaction with other regulatory proteins.
The KAI1, a metastasi3 suppressor gene for prostate cancer, is reported to be correlated with the progression of a variety of other human cancers, It belongs to the transmembrane 4 superfamily (TM4SF), and the studies of TM4SF proteins have emphasized their inhibitory effects on in vitro tumor cell motility and in vitro metastasis. A splice variant of KAI1 was found through RT-PCR analysis, which lacks 28 amino acids that span from distal part of second extracellular loop to part of fourth transmembrane region. The genomic DNA analysis revealed that altarnative splice of exon 7 resulted the splice variant of KAI1. To analyse the role of splice KAI1 in motility and metastalic process of mouse colon adenocarcinoma (CT-26) cells, two stable cell lines that express wild-type (CT-26/wild KAI1) or splice variant of KAI1 (CT-26/splice KAU) were established. Immunoprecipitation study showed that the interaction of splice KAI1 with integrin α3β1 was more decreased than that of wild KAI1. Also, CT-26/splice KAI1 cells showed increased in vitro invasive potential and cell-extracellular matrix (ECM) adhesion as well as an increased in vivo tumorigenicity compared with those of CT-26/wild KAI1, These results indicate that the metastasis suppressor function of splice KAI1 was decreased compared with wild KAI1, and suggest that the functional difference of effects on cell motility, growth and metastasis between wild and splice KAI1 might be explained partially by structural differences of two KAI1 proteins, which are important in the interaction with other regulatory proteins.
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