돼지 유행성 설사증과 전염성 위장염의 감별진단을 위한 분변의 in situ hybridization, multiplex RT-PCR 및 전자현미경기법 In situ hybridization for differential diagnosis of porcine epidemic diarrhea and transmissible gastroenteritis in fecal samples and comparison with multiplex RT-PCR and electron microscopy원문보기
돼지 유행성 설사증과 전염성 위장염은 국내 양돈산업에 가장 중요한 바이러스성 질병이다. 두 질병은 포유자돈에 높은 폐사율을 나타냄으로써 커다란 경제적 손실을 야기하고 있다. 이 두 질병은 임상증상이나 병리학적 소견이 매우 흡사하기에 감별진단이 어렵다. 따라서 두 질병을 감별 진단하기 위해 살아있는 돼지로부터 채취한 설사 분변을 대상으로 in situ hydridization(ISH) 기법을 수립하고, 이 기법과 비교하기 위해 multiplex RT-PCR파 전자현미경기법을 대조하였다. 바이러스 입자를 분리하기 위해 분변을 44,000 □g로 초고속원심분리 한 후, 그 ...
돼지 유행성 설사증과 전염성 위장염은 국내 양돈산업에 가장 중요한 바이러스성 질병이다. 두 질병은 포유자돈에 높은 폐사율을 나타냄으로써 커다란 경제적 손실을 야기하고 있다. 이 두 질병은 임상증상이나 병리학적 소견이 매우 흡사하기에 감별진단이 어렵다. 따라서 두 질병을 감별 진단하기 위해 살아있는 돼지로부터 채취한 설사 분변을 대상으로 in situ hydridization(ISH) 기법을 수립하고, 이 기법과 비교하기 위해 multiplex RT-PCR파 전자현미경기법을 대조하였다. 바이러스 입자를 분리하기 위해 분변을 44,000 □g로 초고속원심분리 한 후, 그 펠렛을 슬라이드에 부착시켜 ISH를 실시하였다. 두 바이러스의 M과 s proteins 중 염기서열이 잘 보존된 부위의 일부를 각각 probe로 사용하여 biotin을 labelling하여 ISH를 2시간 이내에 수행하였다. 그 결과 총 30증례의 살아있는 자돈의 설사 분변 중 11증례(36%)가 돼지 유행성 설사증 양성이었고 2증례(6%)가 전염성 위장염 양성이었다. Multiplex RI-PCR에 의해서는 13증례(43%)가 돼지 유행성 설사증. 2증례(6%)가 전염성 위장염으로 진단되었다. 전자현미경기법으로는 9증례(30%)에 코로나 바이러스가 관찰되었다. 이 연구에서 확립된 ISH 기법과 mutiplex RT-PCR 결과를 상대 비교한 결과 민감도는 73·3%였으며, 특이도는 86.6%였다. 두 방법간에 80%의 일치와 kappa value는 0.60로서 신뢰도가 전자현미경법과 비고하였을 때 보다 높게 나타났다. 전자현미경법 결과와 비교했을 때 민감도와 특이도는 77.7%, 71.4%였으며. 두 방법간에 73.3%의 일치와 kappa value는 0.43으로 신뢰도가 양호했다. 따라서 분변을 이용하여 빠른 시간 내에 돼지 유행성 설사증과 전염성 위장염 바이러스를 감별 진단하는데 있어서 ISH 기법은 multiplex RT-PCR과 같이 매우 유용한 것으로 확인되었다.
돼지 유행성 설사증과 전염성 위장염은 국내 양돈산업에 가장 중요한 바이러스성 질병이다. 두 질병은 포유자돈에 높은 폐사율을 나타냄으로써 커다란 경제적 손실을 야기하고 있다. 이 두 질병은 임상증상이나 병리학적 소견이 매우 흡사하기에 감별진단이 어렵다. 따라서 두 질병을 감별 진단하기 위해 살아있는 돼지로부터 채취한 설사 분변을 대상으로 in situ hydridization(ISH) 기법을 수립하고, 이 기법과 비교하기 위해 multiplex RT-PCR파 전자현미경기법을 대조하였다. 바이러스 입자를 분리하기 위해 분변을 44,000 □g로 초고속원심분리 한 후, 그 펠렛을 슬라이드에 부착시켜 ISH를 실시하였다. 두 바이러스의 M과 s proteins 중 염기서열이 잘 보존된 부위의 일부를 각각 probe로 사용하여 biotin을 labelling하여 ISH를 2시간 이내에 수행하였다. 그 결과 총 30증례의 살아있는 자돈의 설사 분변 중 11증례(36%)가 돼지 유행성 설사증 양성이었고 2증례(6%)가 전염성 위장염 양성이었다. Multiplex RI-PCR에 의해서는 13증례(43%)가 돼지 유행성 설사증. 2증례(6%)가 전염성 위장염으로 진단되었다. 전자현미경기법으로는 9증례(30%)에 코로나 바이러스가 관찰되었다. 이 연구에서 확립된 ISH 기법과 mutiplex RT-PCR 결과를 상대 비교한 결과 민감도는 73·3%였으며, 특이도는 86.6%였다. 두 방법간에 80%의 일치와 kappa value는 0.60로서 신뢰도가 전자현미경법과 비고하였을 때 보다 높게 나타났다. 전자현미경법 결과와 비교했을 때 민감도와 특이도는 77.7%, 71.4%였으며. 두 방법간에 73.3%의 일치와 kappa value는 0.43으로 신뢰도가 양호했다. 따라서 분변을 이용하여 빠른 시간 내에 돼지 유행성 설사증과 전염성 위장염 바이러스를 감별 진단하는데 있어서 ISH 기법은 multiplex RT-PCR과 같이 매우 유용한 것으로 확인되었다.
Porcine epidemic diarrhea (PED) and transmissible gastroenteritis (TGE) are a highly contagious viral disease of piglet. In Korea, these diseases result in the high mortality of suckling piglets and severe economic loss in the swine industry every year, since the clinical signs of these diseases are...
Porcine epidemic diarrhea (PED) and transmissible gastroenteritis (TGE) are a highly contagious viral disease of piglet. In Korea, these diseases result in the high mortality of suckling piglets and severe economic loss in the swine industry every year, since the clinical signs of these diseases are very similar to each other. Thus the effective differential diagnosis has been required. In this study, In situ hybridization (ISH) was established for detecting PED virus (PEDV) and TGE virus (TGEV) in fecal samples and its sensitivity was compared with that of transmission electron microscopy (TEM) and multiplex reverse transcription-PCR (multiplex RT-PCR). To purify virus particles, fecal samples were ultracentrifuged and the resultant peliets were used for the detection of PEDV and TGEV by ISH, TEM and multiplex RT-PCR, respectively. Biotinylated cDNA probes for ISH were designed in a part of the PEDV membrane protein and the TGEV spike protein, and used for ISH. All steps of ISH were achieved within 2 hours. Among 30 fecal samples, 11 specific hybridization signals for PEDV (36%) and 2 specific hybridization signals for TGEV (6%) were detected. By multiplex RT-PCR, 13 were positive for PEDV (43%) and 2 were positive for TGEV (6%). By TEM, coronavirus particles were demonstrated in 9 out of 30 fecal samples (30%). Therefore, ISH may be the rapid, sensitive diagnostic method for the differential detection of PEDV and TGEV in fecal samples.
Porcine epidemic diarrhea (PED) and transmissible gastroenteritis (TGE) are a highly contagious viral disease of piglet. In Korea, these diseases result in the high mortality of suckling piglets and severe economic loss in the swine industry every year, since the clinical signs of these diseases are very similar to each other. Thus the effective differential diagnosis has been required. In this study, In situ hybridization (ISH) was established for detecting PED virus (PEDV) and TGE virus (TGEV) in fecal samples and its sensitivity was compared with that of transmission electron microscopy (TEM) and multiplex reverse transcription-PCR (multiplex RT-PCR). To purify virus particles, fecal samples were ultracentrifuged and the resultant peliets were used for the detection of PEDV and TGEV by ISH, TEM and multiplex RT-PCR, respectively. Biotinylated cDNA probes for ISH were designed in a part of the PEDV membrane protein and the TGEV spike protein, and used for ISH. All steps of ISH were achieved within 2 hours. Among 30 fecal samples, 11 specific hybridization signals for PEDV (36%) and 2 specific hybridization signals for TGEV (6%) were detected. By multiplex RT-PCR, 13 were positive for PEDV (43%) and 2 were positive for TGEV (6%). By TEM, coronavirus particles were demonstrated in 9 out of 30 fecal samples (30%). Therefore, ISH may be the rapid, sensitive diagnostic method for the differential detection of PEDV and TGEV in fecal samples.
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