인간의 질병 및 생명과 관련된 생물학적 제제의 개발과 생산이 늘어가면서 그 제조 과정 중, 미생물 또는 임상 검체가 제공하는 여러 병원성 인자, 특히 Mycoplasma에 대한 감염이 점차 문제되고 있다. 현재까지 알려진 Mycoplasma 검출 방법인 배양법, DNA 염색법 (DNA fluorochome stain), 면역형광염색법 (immunofluorescence), 중합효소연쇄반응 (PCR)등은 검출에 충분한 민감도나 특이도를 보여주지 못한다. 본 연구에서 고안한 DNA chip은 유전자 서열 분석에 기초한 혼성화 원리에 의해 단시간내에 가장 많은 종류의 유전자 분석이 가능하며, 특이적 probe와 표적 DNA간의 적절한 혼성화 조건에 의해 단일 ...
인간의 질병 및 생명과 관련된 생물학적 제제의 개발과 생산이 늘어가면서 그 제조 과정 중, 미생물 또는 임상 검체가 제공하는 여러 병원성 인자, 특히 Mycoplasma에 대한 감염이 점차 문제되고 있다. 현재까지 알려진 Mycoplasma 검출 방법인 배양법, DNA 염색법 (DNA fluorochome stain), 면역형광염색법 (immunofluorescence), 중합효소연쇄반응 (PCR)등은 검출에 충분한 민감도나 특이도를 보여주지 못한다. 본 연구에서 고안한 DNA chip은 유전자 서열 분석에 기초한 혼성화 원리에 의해 단시간내에 가장 많은 종류의 유전자 분석이 가능하며, 특이적 probe와 표적 DNA간의 적절한 혼성화 조건에 의해 단일 염기서열에 의해서도 특이적 검출이 가능한 최신 진단 방법이라 할 수 있다. 따라서, 본 연구에서는 Mycoplasma의 16S/23S intergenic spacer region을 이용한 종특이적 probe로 인한 Mycoplasma 검출용 DNA chip의 개발을 PCR 직접 염기서열 분석 및 PCR-RFLP와 비교하여 그 유용성을 검증하고자 하였다. 본 연구에서 고안한 DNA chip은 염기서열 분석법에 의해 검출되지 않는 1종의M. neurolyticum과 PCR-RFLP에 의해 검출되지 않는 2종의M. penetrans와 M. spermatophilum을 포함한 총 11종의 Mycoplasma의 유전형 감별이 가능하였다. 즉, 본 연구의 DNA chip 결과는, 특정 염기서열의 반복으로 인한 구조적 이상을 야기함으로써 검출이 불가능한 염기 서열 분석의 방법적 한계와 다수의 제한 효소 처리에 의한 번거로움과 명확한 결과를 나타내지 않는 PCR-RFLP의 방법적 한계를 극복함으로써 앞으로 Mycoplasma유전형 감별을 위한 DNA chip 기술에 기반한 검출 가능성을 충분히 제시할 것으로 사료된다. 또한, 본 연구의 결과가 생물학적 제제를 생산하는 회사 및 대규모의 세포 은행을 보유한 국립기관의 숙주 특이적인 Mycoplasma의 감염원을 즉시 예측하고 제거하며 Mycoplasma 감염을 예방하는데 이용되는 등, 대량의 생물학적 제제의 생산, 유지 및 관리를 위한 신속하고 효율적인 대체 방법을 제시하고 있다고 생각한다.
인간의 질병 및 생명과 관련된 생물학적 제제의 개발과 생산이 늘어가면서 그 제조 과정 중, 미생물 또는 임상 검체가 제공하는 여러 병원성 인자, 특히 Mycoplasma에 대한 감염이 점차 문제되고 있다. 현재까지 알려진 Mycoplasma 검출 방법인 배양법, DNA 염색법 (DNA fluorochome stain), 면역형광염색법 (immunofluorescence), 중합효소연쇄반응 (PCR)등은 검출에 충분한 민감도나 특이도를 보여주지 못한다. 본 연구에서 고안한 DNA chip은 유전자 서열 분석에 기초한 혼성화 원리에 의해 단시간내에 가장 많은 종류의 유전자 분석이 가능하며, 특이적 probe와 표적 DNA간의 적절한 혼성화 조건에 의해 단일 염기서열에 의해서도 특이적 검출이 가능한 최신 진단 방법이라 할 수 있다. 따라서, 본 연구에서는 Mycoplasma의 16S/23S intergenic spacer region을 이용한 종특이적 probe로 인한 Mycoplasma 검출용 DNA chip의 개발을 PCR 직접 염기서열 분석 및 PCR-RFLP와 비교하여 그 유용성을 검증하고자 하였다. 본 연구에서 고안한 DNA chip은 염기서열 분석법에 의해 검출되지 않는 1종의M. neurolyticum과 PCR-RFLP에 의해 검출되지 않는 2종의M. penetrans와 M. spermatophilum을 포함한 총 11종의 Mycoplasma의 유전형 감별이 가능하였다. 즉, 본 연구의 DNA chip 결과는, 특정 염기서열의 반복으로 인한 구조적 이상을 야기함으로써 검출이 불가능한 염기 서열 분석의 방법적 한계와 다수의 제한 효소 처리에 의한 번거로움과 명확한 결과를 나타내지 않는 PCR-RFLP의 방법적 한계를 극복함으로써 앞으로 Mycoplasma유전형 감별을 위한 DNA chip 기술에 기반한 검출 가능성을 충분히 제시할 것으로 사료된다. 또한, 본 연구의 결과가 생물학적 제제를 생산하는 회사 및 대규모의 세포 은행을 보유한 국립기관의 숙주 특이적인 Mycoplasma의 감염원을 즉시 예측하고 제거하며 Mycoplasma 감염을 예방하는데 이용되는 등, 대량의 생물학적 제제의 생산, 유지 및 관리를 위한 신속하고 효율적인 대체 방법을 제시하고 있다고 생각한다.
As biological products associated with human life and diseases are tremendously increasing, laboratory contaminations of the products by pathogenic microorganism, especially Mycoplasma spp. have also been reported frequently. So, it is urgent to develop a method for the detection of contamination of...
As biological products associated with human life and diseases are tremendously increasing, laboratory contaminations of the products by pathogenic microorganism, especially Mycoplasma spp. have also been reported frequently. So, it is urgent to develop a method for the detection of contamination of mycoplasma from the biological products. Culture, DNA fluorochrome stain, immunofluorescence stain and polymerase chain reaction (PCR), which are currently available for the detection of mycoplasma, are not sufficient in sensitivity and specificity. On the other hand, DNA chip method has characteristics that it is possible to differentiate a number of genotypes in a timely fashion, and that it is strictly influenced by specific probes and hybridization condition, even though it is not adopted for the detection of mycoplasma. Therefore, I developed a DNA chip-based mycoplasma-detecting method by using 16S/23S intergenic spacer region of mycoplasma, and evaluated its usefulness by comparing PCR-sequencing and PCR-RFLP method. Although DNA chip could not detected all of 25 Mycoplasma species, it detected 11 species of mycoplasma included M. neurolyticum, which was not detected by sequencing and M. penetrans, M. spermatophilum, which were not is undetected by PCR-RFLP. In conclusion, the DNA chip method in the current study provide the feasibility for the development of DNA chip-based genotyping method for mycoplasma. So, I expect that this results will be a foundation for the development of a method of mycoplasma detection and genotype with high specificity. Furthermore, if data of mycoplasmal contamination in the currently available biological products are accumulated, these data will provide useful materials for the expectation and prevention of host-specific Mycoplasma contamination. DNA chip in this study will be a countermeasure to ensure good quality and safety of biological products.
As biological products associated with human life and diseases are tremendously increasing, laboratory contaminations of the products by pathogenic microorganism, especially Mycoplasma spp. have also been reported frequently. So, it is urgent to develop a method for the detection of contamination of mycoplasma from the biological products. Culture, DNA fluorochrome stain, immunofluorescence stain and polymerase chain reaction (PCR), which are currently available for the detection of mycoplasma, are not sufficient in sensitivity and specificity. On the other hand, DNA chip method has characteristics that it is possible to differentiate a number of genotypes in a timely fashion, and that it is strictly influenced by specific probes and hybridization condition, even though it is not adopted for the detection of mycoplasma. Therefore, I developed a DNA chip-based mycoplasma-detecting method by using 16S/23S intergenic spacer region of mycoplasma, and evaluated its usefulness by comparing PCR-sequencing and PCR-RFLP method. Although DNA chip could not detected all of 25 Mycoplasma species, it detected 11 species of mycoplasma included M. neurolyticum, which was not detected by sequencing and M. penetrans, M. spermatophilum, which were not is undetected by PCR-RFLP. In conclusion, the DNA chip method in the current study provide the feasibility for the development of DNA chip-based genotyping method for mycoplasma. So, I expect that this results will be a foundation for the development of a method of mycoplasma detection and genotype with high specificity. Furthermore, if data of mycoplasmal contamination in the currently available biological products are accumulated, these data will provide useful materials for the expectation and prevention of host-specific Mycoplasma contamination. DNA chip in this study will be a countermeasure to ensure good quality and safety of biological products.
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