초록 ▼

용어보기논문에서 용어와 풀이말을 자동 추출한 결과로, 시범 서비스 중입니다. AI-Helper

홍조류의 세포벽에서 추출되는 카라기난은 D-갈락토오스가 α(1→3)와 β(1→4)의 교차 연결로 구성되어 있으며 α(1→3)로 연결된 갈락토오스 잔기에 황산기가 결합되어 있는 황산화 갈락탄이다. 카라기난은 단백질과 반응성이 우수하여 이를 이용해서 식품의 조직 개량제, 안정제 등 전반적으로 사용될 뿐만 아니라 화장품에도 널리 사용되고 있다. 본 연구에서는 Pseudoalteromonas carrageenovora로부터 합성되는 κ-카라기난 ...

홍조류의 세포벽에서 추출되는 카라기난은 D-갈락토오스가 α(1→3)와 β(1→4)의 교차 연결로 구성되어 있으며 α(1→3)로 연결된 갈락토오스 잔기에 황산기가 결합되어 있는 황산화 갈락탄이다. 카라기난은 단백질과 반응성이 우수하여 이를 이용해서 식품의 조직 개량제, 안정제 등 전반적으로 사용될 뿐만 아니라 화장품에도 널리 사용되고 있다. 본 연구에서는 Pseudoalteromonas carrageenovora로부터 합성되는 κ-카라기난 분해효소의 유전자 cgk A를 PCR로 증폭시켜 pET44a에 삽입하여 재조합하였다. PCR로 증폭된 cgk A는 염기서열 분석 결과 1141bp 길이로 재조합된 플라스미드는 총 6698bp였다. 재조합 유전자 pKC44a는 E.coli로 형질전환 시켜졌고 배양 후 추출한 재조합 효소 유전자는 아가로즈겔 전기영동에서 약 6.5kb의 크기로 나타났고 다시 증폭되어 확인된 PCR 생성물의 염기서열을 Genebank database에서 비교해본 결과 본래의 미생물 유전자 염기서열과 99% 일치하였다. 재조합 κ-카라기난 분해효소는 20℃의 온도와 최종 IPTG 농도가 0.1mM일 때 가장 높은 효소활성을 나타내었고 배양 시간이 경과함에 따라 활성은 15일 이상 지속되었다. 재조합 효소는 S-sepharose와 이온 교환 크로마토그래피와 Resource-S로 정제되었으며, SDS-PAGE로 효소의 순도와 분자량을 확인하였으며, 그 결과 약 42kDa으로 측정되었다. k-carrageenase의 특성 실험을 진행하였다. Ph 의존성, 온도의 대한 의존성, 반응시간에 대한 효소활성을 측정 하였다. 그 결과 Ph 8.0, 온도는 35도, 반응시간은 4시간에서 가장 높은 효소활성을 나타내었다.

Abstract ▼ AI-Helper

The cgkA gene of Pseudoalteromonas carrageenovora encoding a κ-carrageenase was cloned by PCR. The recombinat plasmid, pKC44a, was constructed by ligation of PCR product in pET44a vector system. pKC44a transformed into E. coli BL21(DE3) was incubated in LB broth at 37℃ for 2 hr 20 min. Recombinant κ...

The cgkA gene of Pseudoalteromonas carrageenovora encoding a κ-carrageenase was cloned by PCR. The recombinat plasmid, pKC44a, was constructed by ligation of PCR product in pET44a vector system. pKC44a transformed into E. coli BL21(DE3) was incubated in LB broth at 37℃ for 2 hr 20 min. Recombinant κ-carrageenase was expressed by IPTG, to give final concentration of 0.1 mM at 20℃. The recombinant enzyme was excreted in the enzyme culture medium and the activity was increased as time progressed. The protien expressed from pKC44a was purified by ionic exchange chromatographied. The molecular weight of recombinant κ-carrageenase was estimated as 42 kDa by SDS-PAGE. The purified κ-carrageenase had maximal activity at 35℃ and pH 8.0 for 4 hrs.