당뇨병의 합병증으로서 골대사질환의 발생가능성이 제시되고 있으나, 아직 그 정확한 원인은 밝혀지지 않고 있다. 그 원인을 체계적으로 밝히기 위하여 조골세포에서 고혈당에 의하여 발현의 변화가 일어나는 유전자를 탐색하였다. 조골세포 유사세포인 UMR-106 세포주를 통법에 따라 CO₂배양기에서 배양하고, High ...
당뇨병의 합병증으로서 골대사질환의 발생가능성이 제시되고 있으나, 아직 그 정확한 원인은 밝혀지지 않고 있다. 그 원인을 체계적으로 밝히기 위하여 조골세포에서 고혈당에 의하여 발현의 변화가 일어나는 유전자를 탐색하였다. 조골세포 유사세포인 UMR-106 세포주를 통법에 따라 CO₂배양기에서 배양하고, High glucose (11 mM)와 osmotic control로 manitol (11 mM)을 24시간 처치하였다. mRNA를 분리한 후 mRNA를 기질로 하여 Reverse Transcription 반응을 수행한 후, High glucose 처치에 의하여 차이가 나는 유전자를 Differential-Display PCR을 이용하여 탐색하였다. .PCR에서 발현의 차이가 나는 유전자의 Cloning과 DNA sequencing을 하고 BLAST searching을 통하여 유전자를 동정하고, Differential-Display PCR에서 발현의 차이가 나는 유전자에 대하여 RT-PCR실험으로 확인하였다. 고혈당 처치로 인하여 14개의 유전자 발현이 변화되었다. Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3 (Gfra3)의 발현이 high glucose의 처치로 현저히 저하되었다. 반면 동일한 농도의 mannitol 처치로는 Gfra3의 발현이 감소되지 않았다. 따라서, high glucose에 의한 Gfra 발현의 감소는 osmosis에 의한 변화라기 보다는 high glucose 자체가 세포내에서 유전자의 발현에 영향을 미친 것으로 사료된다. 또한, tyrosyl-tRNA synthetase의 발현도 high glucose에 의하여 현저히 저하됨이 관찰되었다. 따라서, High glucose는 조골세포에서 Gfra3과 tyrosyl-tRNA synthetase의 발현을 현저히 감소시킴으로써, 당뇨병이 조골세포에서 Gfra3와 tyrosyl-tRNA synthetase의 기능에 영향을 미쳐 골대사의 장애를 줄 수 있으리라 사료된다.
당뇨병의 합병증으로서 골대사질환의 발생가능성이 제시되고 있으나, 아직 그 정확한 원인은 밝혀지지 않고 있다. 그 원인을 체계적으로 밝히기 위하여 조골세포에서 고혈당에 의하여 발현의 변화가 일어나는 유전자를 탐색하였다. 조골세포 유사세포인 UMR-106 세포주를 통법에 따라 CO₂배양기에서 배양하고, High glucose (11 mM)와 osmotic control로 manitol (11 mM)을 24시간 처치하였다. mRNA를 분리한 후 mRNA를 기질로 하여 Reverse Transcription 반응을 수행한 후, High glucose 처치에 의하여 차이가 나는 유전자를 Differential-Display PCR을 이용하여 탐색하였다. .PCR에서 발현의 차이가 나는 유전자의 Cloning과 DNA sequencing을 하고 BLAST searching을 통하여 유전자를 동정하고, Differential-Display PCR에서 발현의 차이가 나는 유전자에 대하여 RT-PCR실험으로 확인하였다. 고혈당 처치로 인하여 14개의 유전자 발현이 변화되었다. Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3 (Gfra3)의 발현이 high glucose의 처치로 현저히 저하되었다. 반면 동일한 농도의 mannitol 처치로는 Gfra3의 발현이 감소되지 않았다. 따라서, high glucose에 의한 Gfra 발현의 감소는 osmosis에 의한 변화라기 보다는 high glucose 자체가 세포내에서 유전자의 발현에 영향을 미친 것으로 사료된다. 또한, tyrosyl-tRNA synthetase의 발현도 high glucose에 의하여 현저히 저하됨이 관찰되었다. 따라서, High glucose는 조골세포에서 Gfra3과 tyrosyl-tRNA synthetase의 발현을 현저히 감소시킴으로써, 당뇨병이 조골세포에서 Gfra3와 tyrosyl-tRNA synthetase의 기능에 영향을 미쳐 골대사의 장애를 줄 수 있으리라 사료된다.
It has been suggested that disorders of bone metabolism is one of the complications of Diabetes Mellitus. However, the exact mechanisms of action of diabetes on bone metabolism are yet to be determined. In the present study, I have explored to search for high glucose regulated genes in osteoblast-li...
It has been suggested that disorders of bone metabolism is one of the complications of Diabetes Mellitus. However, the exact mechanisms of action of diabetes on bone metabolism are yet to be determined. In the present study, I have explored to search for high glucose regulated genes in osteoblast-like UMR-106 cells. UMR-106 cells were treated with high glucose and manitol as osmotic control and total RNA was isolated. Differential Display-PCR (DD-PCR) was carried out and followed by cloning, sequencing and searching gene bank data base to identify the high glucose induced gene(s). By the DD-PCR experiments, it has been found that expression of 2 PCR products were decreased by high glucose : the 2 PCR products was identified as "Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3(Gfra3), tyrosyl-tRNA synthetase". Furtehr RT-PCR analysis confirmed that high glucose significantly decreases mRNA expression of Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3(Gfra3), tyrosyl-tRNA synthetase. These results suggest that high glucose may play an important role in osteoblast cells via decreasing the expression of Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3(Gfra3), tyrosyl-tRNA synthetase. Thus, it is reasonable to suggest that high glucose could affect bone metabolism, indicating the close relationship between diabetes and metabolic bone diseses.
It has been suggested that disorders of bone metabolism is one of the complications of Diabetes Mellitus. However, the exact mechanisms of action of diabetes on bone metabolism are yet to be determined. In the present study, I have explored to search for high glucose regulated genes in osteoblast-like UMR-106 cells. UMR-106 cells were treated with high glucose and manitol as osmotic control and total RNA was isolated. Differential Display-PCR (DD-PCR) was carried out and followed by cloning, sequencing and searching gene bank data base to identify the high glucose induced gene(s). By the DD-PCR experiments, it has been found that expression of 2 PCR products were decreased by high glucose : the 2 PCR products was identified as "Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3(Gfra3), tyrosyl-tRNA synthetase". Furtehr RT-PCR analysis confirmed that high glucose significantly decreases mRNA expression of Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3(Gfra3), tyrosyl-tRNA synthetase. These results suggest that high glucose may play an important role in osteoblast cells via decreasing the expression of Glial cell line derived neurotrophic factor family receptor alpha 3(Gfra3), tyrosyl-tRNA synthetase. Thus, it is reasonable to suggest that high glucose could affect bone metabolism, indicating the close relationship between diabetes and metabolic bone diseses.
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