IAP(inhibitor of apoptosisprotein)는 생체 내에서 항 사멸의 기능을 하는 단백질군으로써, 그 중 c-IAP2는 그 역할이 잘 알려지지 않은 단백질이다. p53은 대표적인 종양억제 유전자로 세포내에서 여러 가지 기능을 수행한다. EJ(human ...
IAP(inhibitor of apoptosisprotein)는 생체 내에서 항 사멸의 기능을 하는 단백질군으로써, 그 중 c-IAP2는 그 역할이 잘 알려지지 않은 단백질이다. p53은 대표적인 종양억제 유전자로 세포내에서 여러 가지 기능을 수행한다. EJ(human bladder cancer cell line)라는 세포에 Tet-off 유도 방식으로 p53을 발현시키는 영속적인 세포형태인 EJ-p53 세포에서 p53이 유도 되었을 때, c-IAP2의 mRNA의 양과 단백질의 양이 증가하며, 이는 기존의 IKK(I-κB kinase)경로에 독립적으로 RSK 경로를 통한 NF-κB의 활성을 통해 그 양이 증가하게 됨을 보였다.또한, DNA 손상을 주는 물질 중 Etoposide(topo2 inhibitor)를 처리하였을 때, c-IAP2의 mRNA의 양은 증가하고 단백질의 양은 줄어드는 것으로 보아 cIAP2는 단백질 수준에서 Etoposide 처리로 분해되며, MG132를 처리하였을 때 분해가 막히는 것으로 볼 때, p53에 의해서만 합성된 c-IAP2가 유비퀴틴-프로테아좀을 통해 분해됨을 보였다.EJ-p53 세포에 sh(small-hairpin)RNA c-IAP2 바이러스로 감염시켜 c-IAP2를 거의 발현시키지 않는 영속적인 세포형태를 제조하였고, 이 두 종류의 세포를 p53이 유도된 상태에서 thymidine two block(G1기-S기 억제)기법을 이용하여 세포주기의 변화를 FACS를 통해 분석해 본 결과, 일반적인 EJ-p53의 경우는 G1기 억제가 지속되지만 sh-cIAP2 세포의 경우에서는 세포주기가 돌아가는 것으로 보아, p53유도를 통한 G1기 세포주기억제에 c-IAP2가 보조적인 역할을 함을 알 수 있다.또한, p53이 유도되었을 때 EJ-p53과 다르게 c-IAP2가 거의 발현되지 않는 세포에서는 사멸로 가는 세포의 양이 현저하게 줄고, 노화로 감을 보였고, 또한 그형태에서도 모세포인 EJ-p53과 차이가 있음을 보였다.자료를 종합하면, 기존의 항사멸의 기능을 한다고 알려져 있던 c-IAP2는 p53이 유도된 상태에서는 RSK 경로를 통해 발현되며, 항사멸이 아닌 사멸을 촉진하는 성질을 갖는 양면성이 있음을 알 수 있었고, 이는 p53을 통한 암치료에 표적분자로써 새로이 고려되어야 할 것이다.
IAP(inhibitor of apoptosis protein)는 생체 내에서 항 사멸의 기능을 하는 단백질군으로써, 그 중 c-IAP2는 그 역할이 잘 알려지지 않은 단백질이다. p53은 대표적인 종양억제 유전자로 세포내에서 여러 가지 기능을 수행한다. EJ(human bladder cancer cell line)라는 세포에 Tet-off 유도 방식으로 p53을 발현시키는 영속적인 세포형태인 EJ-p53 세포에서 p53이 유도 되었을 때, c-IAP2의 mRNA의 양과 단백질의 양이 증가하며, 이는 기존의 IKK(I-κB kinase)경로에 독립적으로 RSK 경로를 통한 NF-κB의 활성을 통해 그 양이 증가하게 됨을 보였다.또한, DNA 손상을 주는 물질 중 Etoposide(topo2 inhibitor)를 처리하였을 때, c-IAP2의 mRNA의 양은 증가하고 단백질의 양은 줄어드는 것으로 보아 cIAP2는 단백질 수준에서 Etoposide 처리로 분해되며, MG132를 처리하였을 때 분해가 막히는 것으로 볼 때, p53에 의해서만 합성된 c-IAP2가 유비퀴틴-프로테아좀을 통해 분해됨을 보였다.EJ-p53 세포에 sh(small-hairpin)RNA c-IAP2 바이러스로 감염시켜 c-IAP2를 거의 발현시키지 않는 영속적인 세포형태를 제조하였고, 이 두 종류의 세포를 p53이 유도된 상태에서 thymidine two block(G1기-S기 억제)기법을 이용하여 세포주기의 변화를 FACS를 통해 분석해 본 결과, 일반적인 EJ-p53의 경우는 G1기 억제가 지속되지만 sh-cIAP2 세포의 경우에서는 세포주기가 돌아가는 것으로 보아, p53유도를 통한 G1기 세포주기억제에 c-IAP2가 보조적인 역할을 함을 알 수 있다.또한, p53이 유도되었을 때 EJ-p53과 다르게 c-IAP2가 거의 발현되지 않는 세포에서는 사멸로 가는 세포의 양이 현저하게 줄고, 노화로 감을 보였고, 또한 그형태에서도 모세포인 EJ-p53과 차이가 있음을 보였다.자료를 종합하면, 기존의 항사멸의 기능을 한다고 알려져 있던 c-IAP2는 p53이 유도된 상태에서는 RSK 경로를 통해 발현되며, 항사멸이 아닌 사멸을 촉진하는 성질을 갖는 양면성이 있음을 알 수 있었고, 이는 p53을 통한 암치료에 표적분자로써 새로이 고려되어야 할 것이다.
The regulation of apotosis and cell cycle progression are thought to be inter-related processes. The tumor suppressor p53 is one of the most important cellular mediators of apoptosis and cell-cycle control. Many pro-apoptotic stimuli, including DNA-damaging agents, hypoxia and ionizing irradiation, ...
The regulation of apotosis and cell cycle progression are thought to be inter-related processes. The tumor suppressor p53 is one of the most important cellular mediators of apoptosis and cell-cycle control. Many pro-apoptotic stimuli, including DNA-damaging agents, hypoxia and ionizing irradiation, activate both p53 and NF-κB. cIAP2 is a gene target of NF-κB transcriptional activity and plays an important role in the inhibition of apoptosis. Upon induction of p53 in EJ-P53 cells, we observed specific induction of cIAP2 promoter activity, correlating with an increase in cIAP2 protein and mRNA levels. This induction by p53 does not occur through classical activation of the IκB kinases. Rather, p53 expression stimulates the RSK1 which leads to the activation of NF-κB to increase cIAP2 transcription. Next, we show that cIAP2 plays an essental role in cell cycle arrest and apoptosis induced by p53. Knockdown of cIAP2 protein level impared p53 induced G1 phage arrest and apoptosis. This result suggests that cIAP2 can be a major mediator of the effects of p53 on growth arrest and apoptosis. Furthermore, cIAP2 knockdown cells are susceptible to cellular senescence and morphologically changed than normal EJ-P53 cells in p53 induced circumstance.Collectively, our results suggest that the effect of cIAP2 on gene expression and cell cycle progression may give us that cIAP2 is a new considerable molecule of p53 cancer therapy.
The regulation of apotosis and cell cycle progression are thought to be inter-related processes. The tumor suppressor p53 is one of the most important cellular mediators of apoptosis and cell-cycle control. Many pro-apoptotic stimuli, including DNA-damaging agents, hypoxia and ionizing irradiation, activate both p53 and NF-κB. cIAP2 is a gene target of NF-κB transcriptional activity and plays an important role in the inhibition of apoptosis. Upon induction of p53 in EJ-P53 cells, we observed specific induction of cIAP2 promoter activity, correlating with an increase in cIAP2 protein and mRNA levels. This induction by p53 does not occur through classical activation of the IκB kinases. Rather, p53 expression stimulates the RSK1 which leads to the activation of NF-κB to increase cIAP2 transcription. Next, we show that cIAP2 plays an essental role in cell cycle arrest and apoptosis induced by p53. Knockdown of cIAP2 protein level impared p53 induced G1 phage arrest and apoptosis. This result suggests that cIAP2 can be a major mediator of the effects of p53 on growth arrest and apoptosis. Furthermore, cIAP2 knockdown cells are susceptible to cellular senescence and morphologically changed than normal EJ-P53 cells in p53 induced circumstance.Collectively, our results suggest that the effect of cIAP2 on gene expression and cell cycle progression may give us that cIAP2 is a new considerable molecule of p53 cancer therapy.
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