추출물의 효능평가를 위한 in vitro 시험의 적정 농도범위 결정은 neutral red assay를 통해 실시하였다. 0.1~10 μg/mL의 범위에서 모든 추출물들은 세포의 증식 촉진 또는 억제에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었다. 하지만 100 μg/mL에서 각 추출물들은 대조군과 비교하여 세포 증식을 다소 억제하는 것으로 확인되었으며 따라서, 이후의 실험에는 50 μg/mL의 추출물이 사용되었다. Testosterone은 apoptosis에 의한 ...
추출물의 효능평가를 위한 in vitro 시험의 적정 농도범위 결정은 neutral red assay를 통해 실시하였다. 0.1~10 μg/mL의 범위에서 모든 추출물들은 세포의 증식 촉진 또는 억제에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었다. 하지만 100 μg/mL에서 각 추출물들은 대조군과 비교하여 세포 증식을 다소 억제하는 것으로 확인되었으며 따라서, 이후의 실험에는 50 μg/mL의 추출물이 사용되었다. Testosterone은 apoptosis에 의한 모유두세포의 사멸을 유발하는 인자로 추측된다. Neutral red assay 및 현미경적 관찰을 통해 이를 확인하였으나 testosterone이 apoptosis를 일으킨다는 명백한 결과는 관찰되지 않았다. 추출물이 성장인자의 발현에 미치는 영향을 확인하기 위해 RT-PCR을 실시하였다. 결정된 농도의 추출물과 함께 모유두세포를 48시간 배양한 결과, VEGF는 세신과 고삼 추출물, KGF는 고삼과 백자인 추출물에 의해 각각 발현이 증가되었다. 5α-Reductase는 남성형 탈모 유발의 핵심 인자로서 약재추출물이 5α-Reductase의 발현에 미치는 영향을 평가하였다. 이에 따라 western blot을 실시한 결과 네 가지 약재추출물 모두 모유두세포의 5α-Reductase 발현을 현저히 저하시킴을 확인하였다. 활성산소는 남성형탈모를 일으키는 직접적 원인은 아니나, 이를 악화시키는 역할을 한다. 추출물이 갖는 활성산소 소거율을 측정하기 위하여 DPPH assay를 실시한 결과, 네 종류의 추출물 모두 우수한 항 산화력을 보여주었다. 이중 특히, 세신과 고삼은 강력한 항산화제인 α-Tocopherol과 유사한 수준의 항 산화력을 보였다. 이와 같이, in vitro 시험을 통하여 추출물의 효능을 평가하였으며, 마우스를 이용한 in vivo 시험으로 이를 다시 확인하였다. 약물 효능을 극대화하기 위한 약물전달 시스템으로 리포좀 제형을 선택하였으며, 동물실험에 앞서, 제형의 안정성을 평가하였다. 인지질, 콜레스테롤 및 약재추출물을 에탄올에 녹인 후, 둥근 플라스크에 얇은 지질막을 형성시켰다. 이를 수화시킨 후, sonication, homogenization하여 리포좀 제형을 완성하였다. 이렇게 만들어진 제형은 약 0.1% 농도의 추출물을 포집하였을 때 160~200 nm의 크기였으며, 온도와 시간에 따라 큰 변화 없이 안정함이 관찰되었다. B6CBAF1/j 마우스를 이용한 실험으로 약재추출물이 갖는 효과를 재확인하였다. 14주 간의 testosterone 피하주사에 의해 탈모가 유발된 마우스의 탈모부에 추출물을 포함한 제형을 도포하였다. 12주 후 육안관찰 및 조직염색을 통하여 약재추출물의 효능을 평가하였다. 약재추출물은 양성대조군으로 사용된 Cyproterone acetate와 유사한 수준의 효과를 보였다. 즉, 음성대조군에 비해 모발의 손실이 방지되었으며 모낭의 수, 모낭의 깊이에 있어서 역시 우수한 예방효과를 보였다. 결론적으로, 본 연구에 사용된 약재추출물과 제형은 탈모 개선 및 방지에 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
추출물의 효능평가를 위한 in vitro 시험의 적정 농도범위 결정은 neutral red assay를 통해 실시하였다. 0.1~10 μg/mL의 범위에서 모든 추출물들은 세포의 증식 촉진 또는 억제에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었다. 하지만 100 μg/mL에서 각 추출물들은 대조군과 비교하여 세포 증식을 다소 억제하는 것으로 확인되었으며 따라서, 이후의 실험에는 50 μg/mL의 추출물이 사용되었다. Testosterone은 apoptosis에 의한 모유두세포의 사멸을 유발하는 인자로 추측된다. Neutral red assay 및 현미경적 관찰을 통해 이를 확인하였으나 testosterone이 apoptosis를 일으킨다는 명백한 결과는 관찰되지 않았다. 추출물이 성장인자의 발현에 미치는 영향을 확인하기 위해 RT-PCR을 실시하였다. 결정된 농도의 추출물과 함께 모유두세포를 48시간 배양한 결과, VEGF는 세신과 고삼 추출물, KGF는 고삼과 백자인 추출물에 의해 각각 발현이 증가되었다. 5α-Reductase는 남성형 탈모 유발의 핵심 인자로서 약재추출물이 5α-Reductase의 발현에 미치는 영향을 평가하였다. 이에 따라 western blot을 실시한 결과 네 가지 약재추출물 모두 모유두세포의 5α-Reductase 발현을 현저히 저하시킴을 확인하였다. 활성산소는 남성형탈모를 일으키는 직접적 원인은 아니나, 이를 악화시키는 역할을 한다. 추출물이 갖는 활성산소 소거율을 측정하기 위하여 DPPH assay를 실시한 결과, 네 종류의 추출물 모두 우수한 항 산화력을 보여주었다. 이중 특히, 세신과 고삼은 강력한 항산화제인 α-Tocopherol과 유사한 수준의 항 산화력을 보였다. 이와 같이, in vitro 시험을 통하여 추출물의 효능을 평가하였으며, 마우스를 이용한 in vivo 시험으로 이를 다시 확인하였다. 약물 효능을 극대화하기 위한 약물전달 시스템으로 리포좀 제형을 선택하였으며, 동물실험에 앞서, 제형의 안정성을 평가하였다. 인지질, 콜레스테롤 및 약재추출물을 에탄올에 녹인 후, 둥근 플라스크에 얇은 지질막을 형성시켰다. 이를 수화시킨 후, sonication, homogenization하여 리포좀 제형을 완성하였다. 이렇게 만들어진 제형은 약 0.1% 농도의 추출물을 포집하였을 때 160~200 nm의 크기였으며, 온도와 시간에 따라 큰 변화 없이 안정함이 관찰되었다. B6CBAF1/j 마우스를 이용한 실험으로 약재추출물이 갖는 효과를 재확인하였다. 14주 간의 testosterone 피하주사에 의해 탈모가 유발된 마우스의 탈모부에 추출물을 포함한 제형을 도포하였다. 12주 후 육안관찰 및 조직염색을 통하여 약재추출물의 효능을 평가하였다. 약재추출물은 양성대조군으로 사용된 Cyproterone acetate와 유사한 수준의 효과를 보였다. 즉, 음성대조군에 비해 모발의 손실이 방지되었으며 모낭의 수, 모낭의 깊이에 있어서 역시 우수한 예방효과를 보였다. 결론적으로, 본 연구에 사용된 약재추출물과 제형은 탈모 개선 및 방지에 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
To determine proper range of each extracts concentration for in vitro efficacy evaluation, neutral red assay was performed. Within the test range of 0.1~10 μg/mL, all extracts did not show any significant effect on cell proliferation or cytotoxicity. However, theses extracts showed cytotoxicity at 1...
To determine proper range of each extracts concentration for in vitro efficacy evaluation, neutral red assay was performed. Within the test range of 0.1~10 μg/mL, all extracts did not show any significant effect on cell proliferation or cytotoxicity. However, theses extracts showed cytotoxicity at 100 μg/mL. Testosterone has been considered as a factor which induces apoptosis of dermal papilla cell. It was evaluated through neutral red assay and microscopic observation. However, apparent evidences how testosterone induces apoptosis were not found. RT-PCR was performed to determine the effects of each herbal extracts on growth factor expression. When dermal papilla cells were cultured with predetermined concentration of extracts for 48 h, the expression of VEGF was up-regulated by A. radix and S. flavescens, KGF was up-regulated by S. flavescens and T. occidentalis, respectively. As type Ⅱ 5α-Reductase is crucial factor which induces androgenic alopecia, the effects of each herbal extracts on type Ⅱ 5α-Reductase expression was evaluated through western blot analysis. All herbal extracts significantly down regulated the expression of type Ⅱ 5α-Reductase. Espite reactive oxygen species (ROS) is not the direct reason of androgenic alopecia, ROS deteriorates it. DPPH assay was performed to evaluate free radical scavenging effect of each extracts. All herbal extracts showed significant antioxidative capacity and among this A. radix and S. flavescens showed almost the same level of antioxidative capacity of positive control, α-Tochopherol. The efficacy of herbal extracts was reconfirmed through in vivo experiment using B6CBAF1/j mice. Liposomal formulation was selected as a drug delivery system to maximize the medicinal treatment and the stability of the formulation was evaluated before the in vivo experiment was performed. Liposomal formulation was prepared by thin-film hydration method. Phosphatidylcholine, cholesterol, and other constituents were dissolved in 100% ethanol, then thin-film was obtained by dehydrating in a round flask. The film was rehydrated in distilled water and sonicated or/and homogenized by high pressure homogenizer. The diameter of liposome prepared by this protocol was in range of 160~200 nm. The stability evaluated by time and temperature was not much changed. Mice were subcutaneously injected with testosterone, which was suspended in an aqueous solution. Injections were given daily for 14 weeks, then hair loss was induced. Each formulations were applied on the upper dorsum once a day for 12 weeks. At the end of the study, the mice were sacrificed by ether inhalation. Upper and lower dorsum samples of mouse were taken and stained for microscopic analysis. The herbal extracts showed similar degree of hair loss inhibition effects compared with positive control, cyproterone acetate, in the aspects of number and depth of hair follicles. Consequently, the herbal extracts and the liposomal formulation used in this study could be useful for treating hair loss.
To determine proper range of each extracts concentration for in vitro efficacy evaluation, neutral red assay was performed. Within the test range of 0.1~10 μg/mL, all extracts did not show any significant effect on cell proliferation or cytotoxicity. However, theses extracts showed cytotoxicity at 100 μg/mL. Testosterone has been considered as a factor which induces apoptosis of dermal papilla cell. It was evaluated through neutral red assay and microscopic observation. However, apparent evidences how testosterone induces apoptosis were not found. RT-PCR was performed to determine the effects of each herbal extracts on growth factor expression. When dermal papilla cells were cultured with predetermined concentration of extracts for 48 h, the expression of VEGF was up-regulated by A. radix and S. flavescens, KGF was up-regulated by S. flavescens and T. occidentalis, respectively. As type Ⅱ 5α-Reductase is crucial factor which induces androgenic alopecia, the effects of each herbal extracts on type Ⅱ 5α-Reductase expression was evaluated through western blot analysis. All herbal extracts significantly down regulated the expression of type Ⅱ 5α-Reductase. Espite reactive oxygen species (ROS) is not the direct reason of androgenic alopecia, ROS deteriorates it. DPPH assay was performed to evaluate free radical scavenging effect of each extracts. All herbal extracts showed significant antioxidative capacity and among this A. radix and S. flavescens showed almost the same level of antioxidative capacity of positive control, α-Tochopherol. The efficacy of herbal extracts was reconfirmed through in vivo experiment using B6CBAF1/j mice. Liposomal formulation was selected as a drug delivery system to maximize the medicinal treatment and the stability of the formulation was evaluated before the in vivo experiment was performed. Liposomal formulation was prepared by thin-film hydration method. Phosphatidylcholine, cholesterol, and other constituents were dissolved in 100% ethanol, then thin-film was obtained by dehydrating in a round flask. The film was rehydrated in distilled water and sonicated or/and homogenized by high pressure homogenizer. The diameter of liposome prepared by this protocol was in range of 160~200 nm. The stability evaluated by time and temperature was not much changed. Mice were subcutaneously injected with testosterone, which was suspended in an aqueous solution. Injections were given daily for 14 weeks, then hair loss was induced. Each formulations were applied on the upper dorsum once a day for 12 weeks. At the end of the study, the mice were sacrificed by ether inhalation. Upper and lower dorsum samples of mouse were taken and stained for microscopic analysis. The herbal extracts showed similar degree of hair loss inhibition effects compared with positive control, cyproterone acetate, in the aspects of number and depth of hair follicles. Consequently, the herbal extracts and the liposomal formulation used in this study could be useful for treating hair loss.
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