[학위논문]HPLC-ELSD 및 LC-MS를 이용한 시호 사포닌의 동시분석 Simultaneous determination of saikosaponins in bupleuri radix by high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detection and liquid chromatography-mass spectrometry원문보기
시호 (Bupleuri Radix)는 시호 (Bupleurum falcatum L.) 또는 그 변종의 뿌리이며, 우리나라를 비롯하여 일본, 중국의 산야에 자생 또는 재배하는 다년생 초본이다. 생약으로는 뿌리를 사용하며, 한방에서 해열, 해독, 진정, 진통 및 간염에 사용된다. 본 연구에서는 HPLC-ELSD 및 LC-MS를 이용하여 시호의 생리활성성분인 10 가지 saikosaponin (saikosaponin A, B₁, B₂, B₃, B₄, C, D, G, H, I)에 대한 신속한 동시분석법을 개발하였다. 최적의 HPLC-ELSD 분석 조건은 27.5℃에서 Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) 칼럼을 이용하여 0.1% 초산을 함유한 아세토니트릴과 물의 혼합용매를 이동상으로 기울기 ...
시호 (Bupleuri Radix)는 시호 (Bupleurum falcatum L.) 또는 그 변종의 뿌리이며, 우리나라를 비롯하여 일본, 중국의 산야에 자생 또는 재배하는 다년생 초본이다. 생약으로는 뿌리를 사용하며, 한방에서 해열, 해독, 진정, 진통 및 간염에 사용된다. 본 연구에서는 HPLC-ELSD 및 LC-MS를 이용하여 시호의 생리활성성분인 10 가지 saikosaponin (saikosaponin A, B₁, B₂, B₃, B₄, C, D, G, H, I)에 대한 신속한 동시분석법을 개발하였다. 최적의 HPLC-ELSD 분석 조건은 27.5℃에서 Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) 칼럼을 이용하여 0.1% 초산을 함유한 아세토니트릴과 물의 혼합용매를 이동상으로 기울기 용리를 사용하는 것이 가장 좋았다. 주입량은 20 μL이었고, 유속은 1 mL/min 이었으며, ELSD의 검출조건은 drift tube 온도 50℃, 질소 gas 압력 3.0 bar 이었다. LC-MS는 selected ion monitoring (SIM) 조건으로 negative ion mode를 이용하여 분석하였다. 또한 시호의 추출방법 최적화를 통해, 시호 saikosaponin이 최대로 추출되는 조건을 확립하였다. HPLC-ELSD와 LC-MS 분석법 모두, 직선성, 정확성, 정밀성이 매우 우수함을 확인할 수 있었다. 또한, HPLC-ELSD를 이용하여 3 가지 saikosaponin을 지표성분으로 하여 한국산 9 종, 중국산 11 종 시호에 대한 함량분석을 수행하였다. 함량분석 결과를 토대로 3D-plotting, 군집분석 (cluster analysis) 및 주성분분석 (principle component analysis)을 수행하였다. 본 연구에서는 시호의 생리활성성분인 10 가지 saikosaponin에 대한 신속하고 정확한 HPLC-ELSD와 LC-MS 분석법을 개발하였으며, HPLC-ELSD를 이용하여 국내산, 중국산 시호 20 종을 대상으로 한 함량분석을 수행하여 시호의 품질관리의 기준을 제시하고자 하였다.
시호 (Bupleuri Radix)는 시호 (Bupleurum falcatum L.) 또는 그 변종의 뿌리이며, 우리나라를 비롯하여 일본, 중국의 산야에 자생 또는 재배하는 다년생 초본이다. 생약으로는 뿌리를 사용하며, 한방에서 해열, 해독, 진정, 진통 및 간염에 사용된다. 본 연구에서는 HPLC-ELSD 및 LC-MS를 이용하여 시호의 생리활성성분인 10 가지 saikosaponin (saikosaponin A, B₁, B₂, B₃, B₄, C, D, G, H, I)에 대한 신속한 동시분석법을 개발하였다. 최적의 HPLC-ELSD 분석 조건은 27.5℃에서 Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) 칼럼을 이용하여 0.1% 초산을 함유한 아세토니트릴과 물의 혼합용매를 이동상으로 기울기 용리를 사용하는 것이 가장 좋았다. 주입량은 20 μL이었고, 유속은 1 mL/min 이었으며, ELSD의 검출조건은 drift tube 온도 50℃, 질소 gas 압력 3.0 bar 이었다. LC-MS는 selected ion monitoring (SIM) 조건으로 negative ion mode를 이용하여 분석하였다. 또한 시호의 추출방법 최적화를 통해, 시호 saikosaponin이 최대로 추출되는 조건을 확립하였다. HPLC-ELSD와 LC-MS 분석법 모두, 직선성, 정확성, 정밀성이 매우 우수함을 확인할 수 있었다. 또한, HPLC-ELSD를 이용하여 3 가지 saikosaponin을 지표성분으로 하여 한국산 9 종, 중국산 11 종 시호에 대한 함량분석을 수행하였다. 함량분석 결과를 토대로 3D-plotting, 군집분석 (cluster analysis) 및 주성분분석 (principle component analysis)을 수행하였다. 본 연구에서는 시호의 생리활성성분인 10 가지 saikosaponin에 대한 신속하고 정확한 HPLC-ELSD와 LC-MS 분석법을 개발하였으며, HPLC-ELSD를 이용하여 국내산, 중국산 시호 20 종을 대상으로 한 함량분석을 수행하여 시호의 품질관리의 기준을 제시하고자 하였다.
Bupleuri Radix is a root of Buplerum falcatum L. which is growing in Korea, China, and Japan. It is known that Bupleuri Radix has been used to Korean traditional medicine for fever, inflammation and liver disease. A rapid and reliable HPLC-ELSD and LC-MS method for the simultaneous determination...
Bupleuri Radix is a root of Buplerum falcatum L. which is growing in Korea, China, and Japan. It is known that Bupleuri Radix has been used to Korean traditional medicine for fever, inflammation and liver disease. A rapid and reliable HPLC-ELSD and LC-MS method for the simultaneous determination of ten major saikosaponins, saikosaponin A, B₁, B₂, B₃, B₄, C, D, G, H and I from Bupleuri Radix was developed and validated. The analytes were injected into a Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) column with gradient elution composed of acetonitrile and 0.1% acetic acid at a flow rate of 1.0 mL/min and the injection volume was 20 μL. The column temperature was maintained at 27.5°C. The evaporative light scattering detector was operated at an evaporating temperature of 50°C and the optimum flow pressure of the nebulizing gas (nitrogen, 99.99%) at 3.0 bar. LC-MS analysis was performed using negative ion mode with the selected ion monitoring (SIM) condition. These methods were fully validated with respect to the linearity, accuracy, precision. In addition to, optimum conditions of sample extraction were determined. A content assay was performed with the optimized sample extraction method and analytical method. After the assay, 3D-plotting, cluster analysis, principle component analysis were carried out. The results indicated that the established HPLC-ELSD and LC-MS methods are suitable for the quantitative analysis and quality control of saikosaponins in Bupleuri Radix.
Bupleuri Radix is a root of Buplerum falcatum L. which is growing in Korea, China, and Japan. It is known that Bupleuri Radix has been used to Korean traditional medicine for fever, inflammation and liver disease. A rapid and reliable HPLC-ELSD and LC-MS method for the simultaneous determination of ten major saikosaponins, saikosaponin A, B₁, B₂, B₃, B₄, C, D, G, H and I from Bupleuri Radix was developed and validated. The analytes were injected into a Ascentis Express C18 (4.6 × 100 mm, 2.7 μm) column with gradient elution composed of acetonitrile and 0.1% acetic acid at a flow rate of 1.0 mL/min and the injection volume was 20 μL. The column temperature was maintained at 27.5°C. The evaporative light scattering detector was operated at an evaporating temperature of 50°C and the optimum flow pressure of the nebulizing gas (nitrogen, 99.99%) at 3.0 bar. LC-MS analysis was performed using negative ion mode with the selected ion monitoring (SIM) condition. These methods were fully validated with respect to the linearity, accuracy, precision. In addition to, optimum conditions of sample extraction were determined. A content assay was performed with the optimized sample extraction method and analytical method. After the assay, 3D-plotting, cluster analysis, principle component analysis were carried out. The results indicated that the established HPLC-ELSD and LC-MS methods are suitable for the quantitative analysis and quality control of saikosaponins in Bupleuri Radix.
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