지난 50년간 간질환의 진단은 간 손상에 의해 방출되는 효소의 활성도를 측정하는 생 화학적 방법이었다. 이는 보통 LFT(liver fuction test)라고 알려져 있으며, 간 기능의 상태를 조사하기 위한 혈청 내 효소치를 측정하는 검사법을 말한다. 가장 저렴 하며, 검사에 동반되는 위험이 없으므로 간질환이 의심되는 환자에서 가장 먼저 시행되는 검사이다. 검사의 항목은 주로 ALT(...
지난 50년간 간질환의 진단은 간 손상에 의해 방출되는 효소의 활성도를 측정하는 생 화학적 방법이었다. 이는 보통 LFT(liver fuction test)라고 알려져 있으며, 간 기능의 상태를 조사하기 위한 혈청 내 효소치를 측정하는 검사법을 말한다. 가장 저렴 하며, 검사에 동반되는 위험이 없으므로 간질환이 의심되는 환자에서 가장 먼저 시행되는 검사이다. 검사의 항목은 주로 ALT(GPT), AST(GOT), alkaline phosphatase(ALP), albumin, total protein, bilirubin, gamma GTP, cholesterol등이 이에 포함된다. 이 중에서도 간세포의 손상 혹은 간세포의 괴사 유무 정도를 선별하는데 매우 유용하게 이용 되고 있는 효소는 아미노 전이 효소(aminotransferase) 이다. 이러한 효소로 대표되는 두 가지 효소는 ALT(alanine aminotransferase=glutamate pyrubic transferase: GPT)와 AST(aspartate aminotransferase=glutamate oxaloacetic transferase: GPT)이다. ALT와 AST는 병원에서 가장 빈번하게 측정되고 활용되는 효소이지만 실제 간질환의 진행 정도를 반영하지는 못한다. 이는 실제 만성 간질환이나 간질환의 진행 정도가 큰 환자의 혈액 내에는 이 효소의 활성을 잃어버린 단백질이 존재하여 효소활성 측정 방법으로는 탐지가 되지 않기 때문이라고 여겨진다. 따라서 본 연구에서는 면역학적인 방법으로 효소 활성도가 아닌 단백질 자체의 질량을 측정 함으로서 이들 효소를 측정하는 방식이 보다 정확한 간질환의 진단에 활용 될 수 있는 획기적인 새로운 시도라고 사료된다. 이를 위하여 이 연구에서는 먼저 AST와 ALT효소에 대한 유전자를 사람의 간세포주 인 HepG2 세포에서 RNA를 추출하고, 이를 주형으로 RT-PCR 방법으로 cDNA를 합성, 증폭 하여 확보하였다. 다음으로 이유전자를 재조합 단백질 발현 벡터에 클로닝 하여 박테리아 안에서 발현시켜 각각의 아미노 전이효소 대한 재조합단백질을 생산하였다. 또한 만들어진 재조합단백질을 항원으로 사용하여 마우스에 주사하여 단일클론항체를 생산하고 이들 항체의 특성을 규명하였다. 아미노전이효소 ALT, AST각가의 이 형질체에 대한 specific한 단일클론항체를 선별하고, 이를 이용하여 이들 효소들을 정량 할 수 있는 ELISA 시스템을 만들어 혈액 내에 존재하는 단백질의 농도를 측정하였다. 간질환 및 정상인 그룹에서의 측정된 아미노 효소의 결과를 보면, ALT1효소 측정의 평균값은 정상인 65.9±35.6㎍/L, 간염 바이러스 보균자는 189.4±318.3㎍/, 급성간염(AH)환자는 106.9±114.5㎍/L, 만성 간염환자(CH)는 123.4±111.1㎍/L, 간암(HCC)환자는 153±144.2㎍/L/L, 간경화(LC) 환자는 314.9±382.8㎍/L로 정상인 group에 비하여 간질환 환자 group의 mass측정치가 2배에서 5배까지 비교적 높은 수치로 관찰 되었다. ALT2 단백질 농도의 측정값은 24.9±35.2㎍/L, 간염바이러스 보균자는 67.7±45.9㎍/L, 급성간염(AH)환자는 53.3±58.3㎍/L, 만성간염환자(CH)는 71.6±71.7㎍/L, 간암(HCC)환자는 128±50.3㎍/L, 간경화(LC) 환자는 111.1±64.1㎍/L로 만성간염 환자는 정상인 평균치보다 3배가랑, 간암 환자나 간경화 환자는 5배 가량 더 높은 mass 측정값의 차이를 보였다. 정상인 보다 환자 그룹의 아미노 효소의 농도의 평균치가 높은 결과는 cAST효소의 측정결과에서도 마찬가지로 관찰되었다(정상인 112.1±89.8ng/㎖, 급성간염(AH)환자 234.9±115.1ng/㎖, 만성간염환자(CH) 180.7±106.6ng/㎖, 간암(HCC)환자 235.3±111.4ng/㎖, 간경화(LC) 환자 212.2±92.3ng/㎖). 이러한 결과는 간 질환의 진행 정도가 심한 환자 그룹의 혈액 내에 효소활성은 지니지 않은 많은 양의 단백질이 존재할 것이라는 가설을 뒷받침해주는 증거라고 할 수 있다. 본 연구에서 개발한 면역학적인 진단 키트는 간질환 환자의 혈액 내에서 아미노 전이 효소(ALT, AST)의 이형질 체 단백질 양을 선택적으로 측정하여 다른 질환의 과의 연계성 연구 및 좀 더 정밀하고 세부적인 진단과 더불어 새로운 임상적 의의를 가질 것으로기대 된다.
지난 50년간 간질환의 진단은 간 손상에 의해 방출되는 효소의 활성도를 측정하는 생 화학적 방법이었다. 이는 보통 LFT(liver fuction test)라고 알려져 있으며, 간 기능의 상태를 조사하기 위한 혈청 내 효소치를 측정하는 검사법을 말한다. 가장 저렴 하며, 검사에 동반되는 위험이 없으므로 간질환이 의심되는 환자에서 가장 먼저 시행되는 검사이다. 검사의 항목은 주로 ALT(GPT), AST(GOT), alkaline phosphatase(ALP), albumin, total protein, bilirubin, gamma GTP, cholesterol등이 이에 포함된다. 이 중에서도 간세포의 손상 혹은 간세포의 괴사 유무 정도를 선별하는데 매우 유용하게 이용 되고 있는 효소는 아미노 전이 효소(aminotransferase) 이다. 이러한 효소로 대표되는 두 가지 효소는 ALT(alanine aminotransferase=glutamate pyrubic transferase: GPT)와 AST(aspartate aminotransferase=glutamate oxaloacetic transferase: GPT)이다. ALT와 AST는 병원에서 가장 빈번하게 측정되고 활용되는 효소이지만 실제 간질환의 진행 정도를 반영하지는 못한다. 이는 실제 만성 간질환이나 간질환의 진행 정도가 큰 환자의 혈액 내에는 이 효소의 활성을 잃어버린 단백질이 존재하여 효소활성 측정 방법으로는 탐지가 되지 않기 때문이라고 여겨진다. 따라서 본 연구에서는 면역학적인 방법으로 효소 활성도가 아닌 단백질 자체의 질량을 측정 함으로서 이들 효소를 측정하는 방식이 보다 정확한 간질환의 진단에 활용 될 수 있는 획기적인 새로운 시도라고 사료된다. 이를 위하여 이 연구에서는 먼저 AST와 ALT효소에 대한 유전자를 사람의 간세포주 인 HepG2 세포에서 RNA를 추출하고, 이를 주형으로 RT-PCR 방법으로 cDNA를 합성, 증폭 하여 확보하였다. 다음으로 이유전자를 재조합 단백질 발현 벡터에 클로닝 하여 박테리아 안에서 발현시켜 각각의 아미노 전이효소 대한 재조합단백질을 생산하였다. 또한 만들어진 재조합단백질을 항원으로 사용하여 마우스에 주사하여 단일클론항체를 생산하고 이들 항체의 특성을 규명하였다. 아미노전이효소 ALT, AST각가의 이 형질체에 대한 specific한 단일클론항체를 선별하고, 이를 이용하여 이들 효소들을 정량 할 수 있는 ELISA 시스템을 만들어 혈액 내에 존재하는 단백질의 농도를 측정하였다. 간질환 및 정상인 그룹에서의 측정된 아미노 효소의 결과를 보면, ALT1효소 측정의 평균값은 정상인 65.9±35.6㎍/L, 간염 바이러스 보균자는 189.4±318.3㎍/, 급성간염(AH)환자는 106.9±114.5㎍/L, 만성 간염환자(CH)는 123.4±111.1㎍/L, 간암(HCC)환자는 153±144.2㎍/L/L, 간경화(LC) 환자는 314.9±382.8㎍/L로 정상인 group에 비하여 간질환 환자 group의 mass측정치가 2배에서 5배까지 비교적 높은 수치로 관찰 되었다. ALT2 단백질 농도의 측정값은 24.9±35.2㎍/L, 간염바이러스 보균자는 67.7±45.9㎍/L, 급성간염(AH)환자는 53.3±58.3㎍/L, 만성간염환자(CH)는 71.6±71.7㎍/L, 간암(HCC)환자는 128±50.3㎍/L, 간경화(LC) 환자는 111.1±64.1㎍/L로 만성간염 환자는 정상인 평균치보다 3배가랑, 간암 환자나 간경화 환자는 5배 가량 더 높은 mass 측정값의 차이를 보였다. 정상인 보다 환자 그룹의 아미노 효소의 농도의 평균치가 높은 결과는 cAST효소의 측정결과에서도 마찬가지로 관찰되었다(정상인 112.1±89.8ng/㎖, 급성간염(AH)환자 234.9±115.1ng/㎖, 만성간염환자(CH) 180.7±106.6ng/㎖, 간암(HCC)환자 235.3±111.4ng/㎖, 간경화(LC) 환자 212.2±92.3ng/㎖). 이러한 결과는 간 질환의 진행 정도가 심한 환자 그룹의 혈액 내에 효소활성은 지니지 않은 많은 양의 단백질이 존재할 것이라는 가설을 뒷받침해주는 증거라고 할 수 있다. 본 연구에서 개발한 면역학적인 진단 키트는 간질환 환자의 혈액 내에서 아미노 전이 효소(ALT, AST)의 이형질 체 단백질 양을 선택적으로 측정하여 다른 질환의 과의 연계성 연구 및 좀 더 정밀하고 세부적인 진단과 더불어 새로운 임상적 의의를 가질 것으로기대 된다.
For the assessment of hepatocellular integrity and function, aminotranferase (ALT, AST formerly GPT, GOT) has been regarded as the most sensitive indicators. Aminotransferase mediates the reversible transamination between amino acid and alphaketoglutarate to form pyruvate/oxalacetate and glutamate, ...
For the assessment of hepatocellular integrity and function, aminotranferase (ALT, AST formerly GPT, GOT) has been regarded as the most sensitive indicators. Aminotransferase mediates the reversible transamination between amino acid and alphaketoglutarate to form pyruvate/oxalacetate and glutamate, and it has been using clinically as an indicator of liver function test. However, the catalytic activity of this enzyme is not corresponded well to a degree of hepatocelluar damage. To resolve this issue, we developed an immunoassay procedure for measurement of Aminotransferase mass.
For the assessment of hepatocellular integrity and function, aminotranferase (ALT, AST formerly GPT, GOT) has been regarded as the most sensitive indicators. Aminotransferase mediates the reversible transamination between amino acid and alphaketoglutarate to form pyruvate/oxalacetate and glutamate, and it has been using clinically as an indicator of liver function test. However, the catalytic activity of this enzyme is not corresponded well to a degree of hepatocelluar damage. To resolve this issue, we developed an immunoassay procedure for measurement of Aminotransferase mass.
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