돼지 유래 물질을 원료로 사용하여 생물학제제을 만드는 제조공정에서는 바이러스 오염의 위험요소가 존재한다. 그러므로, 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. Porcine pseudorbies virus (PRV)는 돼지 유래 혈액, 세포, 조직 및 기관에서 발견될 수 있는 가장 흔한 병원체 중의 하나이다. 본 연구에서는 돼지유래물질을 원료로 제조되는 생물학적제제 제조공정에서 PRV를 정량적으로 검출할 수 있는 real-rime PCR 시험법을 확립하고자 하였다. PRV DNA의 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며 TaqMan probe를 이용한 정량분석시험법을 최적화하였다. 이 ...
돼지 유래 물질을 원료로 사용하여 생물학제제을 만드는 제조공정에서는 바이러스 오염의 위험요소가 존재한다. 그러므로, 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. Porcine pseudorbies virus (PRV)는 돼지 유래 혈액, 세포, 조직 및 기관에서 발견될 수 있는 가장 흔한 병원체 중의 하나이다. 본 연구에서는 돼지유래물질을 원료로 제조되는 생물학적제제 제조공정에서 PRV를 정량적으로 검출할 수 있는 real-rime PCR 시험법을 확립하고자 하였다. PRV DNA의 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며 TaqMan probe를 이용한 정량분석시험법을 최적화하였다. 이 분석법의 민감도는 5.12×100 TCID50 equivalent/ml로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 시험법은 PRV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. 확립된 시험법을 인위적으로 오염시킨 쥐에 적용하였을 때 PRV를 정량적으로 검출할 수 있었다.
돼지 유래 물질을 원료로 사용하여 생물학제제을 만드는 제조공정에서는 바이러스 오염의 위험요소가 존재한다. 그러므로, 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. Porcine pseudorbies virus (PRV)는 돼지 유래 혈액, 세포, 조직 및 기관에서 발견될 수 있는 가장 흔한 병원체 중의 하나이다. 본 연구에서는 돼지유래물질을 원료로 제조되는 생물학적제제 제조공정에서 PRV를 정량적으로 검출할 수 있는 real-rime PCR 시험법을 확립하고자 하였다. PRV DNA의 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며 TaqMan probe를 이용한 정량분석시험법을 최적화하였다. 이 분석법의 민감도는 5.12×100 TCID50 equivalent/ml로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 시험법은 PRV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. 확립된 시험법을 인위적으로 오염시킨 쥐에 적용하였을 때 PRV를 정량적으로 검출할 수 있었다.
Manufacturing processes for the biologicals using porcine materials have the risk of viral contamination. Therefore viral validation is essential in ensuring the safety of the products. Porcine pseudorabies virus (PRV) is the most common porcine pathogen found in porcine blood, cell, tissue, and org...
Manufacturing processes for the biologicals using porcine materials have the risk of viral contamination. Therefore viral validation is essential in ensuring the safety of the products. Porcine pseudorabies virus (PRV) is the most common porcine pathogen found in porcine blood, cell, tissue, and organ. In order to establish the validation system for the PRV safety of the products, a real-time PCR method was developed for quantitative detection of PRV in raw materials, manufacturing processes, and final products as well as PRV clearance validation. Specific primers for amplification of PRV DNA was selected, and PRV DNA was quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity of the assay was calculated to be 5 x 100 TCID50 equivalent/ml. The real-time PCR method was validated to be reproducible and very specific to PRV. The real-time PCR method could be applied for the quantitative detection of PRV from the artificialy infected rats.
Manufacturing processes for the biologicals using porcine materials have the risk of viral contamination. Therefore viral validation is essential in ensuring the safety of the products. Porcine pseudorabies virus (PRV) is the most common porcine pathogen found in porcine blood, cell, tissue, and organ. In order to establish the validation system for the PRV safety of the products, a real-time PCR method was developed for quantitative detection of PRV in raw materials, manufacturing processes, and final products as well as PRV clearance validation. Specific primers for amplification of PRV DNA was selected, and PRV DNA was quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity of the assay was calculated to be 5 x 100 TCID50 equivalent/ml. The real-time PCR method was validated to be reproducible and very specific to PRV. The real-time PCR method could be applied for the quantitative detection of PRV from the artificialy infected rats.
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