Genetically modified organism(GMO)의 분석 시스템을 구성하는 주요한 물질인 marker 단백질과 그것에 대한 항체는 재조합 방법에 의해서 생산되었고, 대조 물질을 사용하여서 비교, 분석을 실시하였다. 본 연구에서는, neomycin phosphotransferase II (NPTII) 와 cucumber mosaic virus coat ...
Genetically modified organism(GMO)의 분석 시스템을 구성하는 주요한 물질인 marker 단백질과 그것에 대한 항체는 재조합 방법에 의해서 생산되었고, 대조 물질을 사용하여서 비교, 분석을 실시하였다. 본 연구에서는, neomycin phosphotransferase II (NPTII) 와 cucumber mosaic virus coat protein (CMVCP)인 두 개의 GMO marker 단백질은 재조합 방법을 이용하여 E. coli 로 부터 대량 생산하였다. 생산된 단백질은 affinity chromatography에 의해서 정제를 거친 후, 그들의 구조적인 형태와 반응 친화도를 각각의 대조 항체를 사용하여 비교, 분석하였다. 그 결과, 재조합 단백질은 통상적으로 얻을 수 있는 대조 단백질과 동일한 크기로 존재하고 면역 반응성도 유사하였다. 검증을 거친 재조합 단백질을 면역원으로 이용하여 복합클론과 단일클론 항체를 생산하였고, 면역분석 방법을 이용하여 직접 GMO를 분석하였다. 그 결과, 생산된 항체는 non-GMO로부터 GMO를 특이적으로 검증하였고, 정확한 크기의 marker 단백질을 분석하였다. 또한, marker 단백질의 검증 한계는 한국의 GMO 규제 상한에 해당되는 1% 이상을 검증할 수 있었다. CMV CP의 경우 0.01% 까지도 검증이 가능하였다. 이와 같은 결과들을 통하여 증명된 marker 단백질과 항체는 biosensor나 biochip과 같은 정량적인 측정이 가능한 GMO 분석 시스템을 개발하기 위한 면역 물질로 사용할 수 있는 가능성이 있음을 확인하였다.
Genetically modified organism(GMO)의 분석 시스템을 구성하는 주요한 물질인 marker 단백질과 그것에 대한 항체는 재조합 방법에 의해서 생산되었고, 대조 물질을 사용하여서 비교, 분석을 실시하였다. 본 연구에서는, neomycin phosphotransferase II (NPTII) 와 cucumber mosaic virus coat protein (CMV CP)인 두 개의 GMO marker 단백질은 재조합 방법을 이용하여 E. coli 로 부터 대량 생산하였다. 생산된 단백질은 affinity chromatography에 의해서 정제를 거친 후, 그들의 구조적인 형태와 반응 친화도를 각각의 대조 항체를 사용하여 비교, 분석하였다. 그 결과, 재조합 단백질은 통상적으로 얻을 수 있는 대조 단백질과 동일한 크기로 존재하고 면역 반응성도 유사하였다. 검증을 거친 재조합 단백질을 면역원으로 이용하여 복합클론과 단일클론 항체를 생산하였고, 면역분석 방법을 이용하여 직접 GMO를 분석하였다. 그 결과, 생산된 항체는 non-GMO로부터 GMO를 특이적으로 검증하였고, 정확한 크기의 marker 단백질을 분석하였다. 또한, marker 단백질의 검증 한계는 한국의 GMO 규제 상한에 해당되는 1% 이상을 검증할 수 있었다. CMV CP의 경우 0.01% 까지도 검증이 가능하였다. 이와 같은 결과들을 통하여 증명된 marker 단백질과 항체는 biosensor나 biochip과 같은 정량적인 측정이 가능한 GMO 분석 시스템을 개발하기 위한 면역 물질로 사용할 수 있는 가능성이 있음을 확인하였다.
Recombinant proteins of two GMO markers, neomycin phosphotransferase II (NPTII) and cucumber mosaic virus coat protein (CMV CP), were produced in E. coli. After purification by affinity chromatography, their structural conformation and binding affinities to the respective reference antibodies were c...
Recombinant proteins of two GMO markers, neomycin phosphotransferase II (NPTII) and cucumber mosaic virus coat protein (CMV CP), were produced in E. coli. After purification by affinity chromatography, their structural conformation and binding affinities to the respective reference antibodies were characterized. The results revealed that the recombinant proteins produced in this experiment were identical with commercially available reference proteins. These recombinant proteins were used to raise polyclonal and monoclonal antibodies for detecting GMOs harboring either markers. For this purpose, the purified antibodies were applied to sandwich ELISA system to detect and quantify GMO marker proteins, identifying that these antibodies readily discriminate between GMOs and non-GMOs. Moreover, detection capacity of marker proteins were defined to 1%, exceeding over the upper limit of standard in Korean provisions. Those well-characterized marker proteins and antibodies can be used as valuable immuno-reagents in developing analytical systems, such as biosensors and biochips, to measure quantities of GMOs.
Recombinant proteins of two GMO markers, neomycin phosphotransferase II (NPTII) and cucumber mosaic virus coat protein (CMV CP), were produced in E. coli. After purification by affinity chromatography, their structural conformation and binding affinities to the respective reference antibodies were characterized. The results revealed that the recombinant proteins produced in this experiment were identical with commercially available reference proteins. These recombinant proteins were used to raise polyclonal and monoclonal antibodies for detecting GMOs harboring either markers. For this purpose, the purified antibodies were applied to sandwich ELISA system to detect and quantify GMO marker proteins, identifying that these antibodies readily discriminate between GMOs and non-GMOs. Moreover, detection capacity of marker proteins were defined to 1%, exceeding over the upper limit of standard in Korean provisions. Those well-characterized marker proteins and antibodies can be used as valuable immuno-reagents in developing analytical systems, such as biosensors and biochips, to measure quantities of GMOs.
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