본 연구에서는 蠶蛹子(잠용자)라 불리는 누에 성충의 조정제물에 대한 에스트로겐화 작용을 in vitro 실험을 통하여 규명하였다. 누에번데기 미세 파쇄물 100 g 을 상온에서 1L 의 살균 증류수로 6 시간 추출한 추출물을 시료1로 하고, 시료1의 5g 을 25 ml 의 살균 증류수에 용해시켜 Dowex 50w-8X(H+) 컬럼 크로마토그래프를 수행하였다. Flow-through로 분획한 용출물을 동결 건조하여 시료2로 하고, 컬럼에 흡착된 물질을 20mM NaCl을 이용하여 용출시켰다. 용출된 시료2를 UF(Ultra Filtration)를 이용하여 MWCO 10,000 이상과 이하의 물질로 분획 후, 각각을 시료Ⅰ, 시료Ⅱ로 하였다. 분획한 모든 시료는 0.45mm 필터에 여과 시킨 후 동결 건조하여 실험에 사용하였다. 누에번데기 수용성 추출물에 의한 에스트로겐 활성 증진 작용을 평가하기 위하여 인간 유방암세포 유래인 ...
본 연구에서는 蠶蛹子(잠용자)라 불리는 누에 성충의 조정제물에 대한 에스트로겐화 작용을 in vitro 실험을 통하여 규명하였다. 누에번데기 미세 파쇄물 100 g 을 상온에서 1L 의 살균 증류수로 6 시간 추출한 추출물을 시료1로 하고, 시료1의 5g 을 25 ml 의 살균 증류수에 용해시켜 Dowex 50w-8X(H+) 컬럼 크로마토그래프를 수행하였다. Flow-through로 분획한 용출물을 동결 건조하여 시료2로 하고, 컬럼에 흡착된 물질을 20mM NaCl을 이용하여 용출시켰다. 용출된 시료2를 UF(Ultra Filtration)를 이용하여 MWCO 10,000 이상과 이하의 물질로 분획 후, 각각을 시료Ⅰ, 시료Ⅱ로 하였다. 분획한 모든 시료는 0.45mm 필터에 여과 시킨 후 동결 건조하여 실험에 사용하였다. 누에번데기 수용성 추출물에 의한 에스트로겐 활성 증진 작용을 평가하기 위하여 인간 유방암세포 유래인 MCF-7 세포에 시료1과 시료Ⅰ,Ⅱ를 처치 후, MCF-7의 증식률을 측정하였다. 시료2 및 시료 Ⅰ,Ⅱ를 농도 별(250, 62.5, 15.6, 3.9 mg/ml)로 MCF-7세포에 24 시간마다 4 일간 처치하였고, 유의적인 차이를 나타내며 시료2(250 mg/ml, 48시간)처치군이 아무것도 처치하지 않은 대조군과 비교하여 MCF-7 증식률이 약 2.5 배 증가하였으나(대조군; 100%; 처치군; 251.4%) 시료Ⅰ,Ⅱ는 시료2와 비교하여 MCF-7의 증식률에 유의적인 차이가 없었다. 따라서 시료2를 시료Ⅰ,Ⅱ로 정제하는 과정에서 탈락되었을 가능성이 있는 이온성분(칼슘, 마그네슘, 철, 아연)을 시료 Ⅰ,Ⅱ에 농도별(0.5, 1, 2, 4, 8 uM)로 첨가 후 MCF-7에 처치한 결과 시료Ⅱ(250 mg/ml, 마그네슘 1uM, 48시간)처치군의 MCF-7 증식률은 아무것도 처치하지 않은 대조군과 비교하여 약 3.8배 증가하였고(대조군; 100%; 처치군; 386.9%), 시료2를 처치한 대조군과 비교하여 약 1.3배 증가하였다(대조군; 100%; 처치군; 136.2%). 또한 누에번데기 조추출물에 대하여 원소분석 및 western blot 분석을 실시한 결과 시료2 및 Ⅰ과 비교하여 시료Ⅱ가 아미노산 함유율이 약 2.3 배 높았으며(시료2; 2.93umol/L; 시료Ⅰ; 2.91umol/L; 시료Ⅱ; 6.848umol/L), 세린, 아르기닌 및 발린의 함량이 높고, 3kDa 분자량의 단백질이 다량 검출 되었다. 본 연구에서는 상온에서 제조된 누에번데기 조정제물이 가지는 에스트로겐화 작용을 처음으로 증명하였다. 이러한 연구결과는 병적인 에스트로겐 결핍이나 폐경기 이후 난소의 기능 쇠퇴에 의한 에스트로겐 결핍으로 인하여 일어나는 골다공증을 비롯한 여성의 성호르몬 대사 장애 관련 질환을 예방 또는 치유하는데 적용할 수 있는 과학적 근거를 제시하는 것이다.
색인어 : 누에번데기, 에스트로겐 , 폐경기, 여성 성호르몬 , MCF-7
본 연구에서는 蠶蛹子(잠용자)라 불리는 누에 성충의 조정제물에 대한 에스트로겐화 작용을 in vitro 실험을 통하여 규명하였다. 누에번데기 미세 파쇄물 100 g 을 상온에서 1L 의 살균 증류수로 6 시간 추출한 추출물을 시료1로 하고, 시료1의 5g 을 25 ml 의 살균 증류수에 용해시켜 Dowex 50w-8X(H+) 컬럼 크로마토그래프를 수행하였다. Flow-through로 분획한 용출물을 동결 건조하여 시료2로 하고, 컬럼에 흡착된 물질을 20mM NaCl을 이용하여 용출시켰다. 용출된 시료2를 UF(Ultra Filtration)를 이용하여 MWCO 10,000 이상과 이하의 물질로 분획 후, 각각을 시료Ⅰ, 시료Ⅱ로 하였다. 분획한 모든 시료는 0.45mm 필터에 여과 시킨 후 동결 건조하여 실험에 사용하였다. 누에번데기 수용성 추출물에 의한 에스트로겐 활성 증진 작용을 평가하기 위하여 인간 유방암세포 유래인 MCF-7 세포에 시료1과 시료Ⅰ,Ⅱ를 처치 후, MCF-7의 증식률을 측정하였다. 시료2 및 시료 Ⅰ,Ⅱ를 농도 별(250, 62.5, 15.6, 3.9 mg/ml)로 MCF-7세포에 24 시간마다 4 일간 처치하였고, 유의적인 차이를 나타내며 시료2(250 mg/ml, 48시간)처치군이 아무것도 처치하지 않은 대조군과 비교하여 MCF-7 증식률이 약 2.5 배 증가하였으나(대조군; 100%; 처치군; 251.4%) 시료Ⅰ,Ⅱ는 시료2와 비교하여 MCF-7의 증식률에 유의적인 차이가 없었다. 따라서 시료2를 시료Ⅰ,Ⅱ로 정제하는 과정에서 탈락되었을 가능성이 있는 이온성분(칼슘, 마그네슘, 철, 아연)을 시료 Ⅰ,Ⅱ에 농도별(0.5, 1, 2, 4, 8 uM)로 첨가 후 MCF-7에 처치한 결과 시료Ⅱ(250 mg/ml, 마그네슘 1uM, 48시간)처치군의 MCF-7 증식률은 아무것도 처치하지 않은 대조군과 비교하여 약 3.8배 증가하였고(대조군; 100%; 처치군; 386.9%), 시료2를 처치한 대조군과 비교하여 약 1.3배 증가하였다(대조군; 100%; 처치군; 136.2%). 또한 누에번데기 조추출물에 대하여 원소분석 및 western blot 분석을 실시한 결과 시료2 및 Ⅰ과 비교하여 시료Ⅱ가 아미노산 함유율이 약 2.3 배 높았으며(시료2; 2.93umol/L; 시료Ⅰ; 2.91umol/L; 시료Ⅱ; 6.848umol/L), 세린, 아르기닌 및 발린의 함량이 높고, 3kDa 분자량의 단백질이 다량 검출 되었다. 본 연구에서는 상온에서 제조된 누에번데기 조정제물이 가지는 에스트로겐화 작용을 처음으로 증명하였다. 이러한 연구결과는 병적인 에스트로겐 결핍이나 폐경기 이후 난소의 기능 쇠퇴에 의한 에스트로겐 결핍으로 인하여 일어나는 골다공증을 비롯한 여성의 성호르몬 대사 장애 관련 질환을 예방 또는 치유하는데 적용할 수 있는 과학적 근거를 제시하는 것이다.
색인어 : 누에번데기, 에스트로겐 , 폐경기, 여성 성호르몬 , MCF-7
This study was designed to investigate whether silkworm pupa extract may activate to estrogen receptor in MCF-7 cells, a human breast cancer cell line. Freeze-dried silkworm pupa extract was extracted with distilled water(D.W). these resources was heated to room temperature (RT), 40℃, 60℃, 80℃ and ...
This study was designed to investigate whether silkworm pupa extract may activate to estrogen receptor in MCF-7 cells, a human breast cancer cell line. Freeze-dried silkworm pupa extract was extracted with distilled water(D.W). these resources was heated to room temperature (RT), 40℃, 60℃, 80℃ and 100℃ for 6h and filtered(0.45um). These samples were further performed for bioactivity based on their ability to regulated cell growth rate in MCF-7 cells though MTT assay. viability of MCF-7 cells was not difference with each concentration. However, growth rate of MCF-7 cells were difference with extract temperatures 60℃ extract showed the highest growth that increased 5-fold, compared with control. These result suggest that silkworm pupa water extract may be useful as potential phytoestrogens.
Key word : Silkworm pupa, Estrogen, Menopause, Female hormone, MCF-7
This study was designed to investigate whether silkworm pupa extract may activate to estrogen receptor in MCF-7 cells, a human breast cancer cell line. Freeze-dried silkworm pupa extract was extracted with distilled water(D.W). these resources was heated to room temperature (RT), 40℃, 60℃, 80℃ and 100℃ for 6h and filtered(0.45um). These samples were further performed for bioactivity based on their ability to regulated cell growth rate in MCF-7 cells though MTT assay. viability of MCF-7 cells was not difference with each concentration. However, growth rate of MCF-7 cells were difference with extract temperatures 60℃ extract showed the highest growth that increased 5-fold, compared with control. These result suggest that silkworm pupa water extract may be useful as potential phytoestrogens.
Key word : Silkworm pupa, Estrogen, Menopause, Female hormone, MCF-7
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