계류대장을 통하여 고능력 암소를 선별한 후 도축장에서 도축된 고능력 암소의 난소를 개별적으로 채취하여 항생제가 함유된 생리식염수가 들어 있는 보온병에 담아 3~4시간 내에 실험실로 운반하였다. 18 gauge 바늘이 부착된 10 ㎖ 주사기를 이용하여 2~7 ㎖ 의 가시난포에서 세포질이 충실하고 최소한 3층 이상의 난구세포를 가진 난포란을 채란하여 실험에 공시하였다. 체외성숙용 배양액은 TCM-199 8.6 ㎖에 ...
계류대장을 통하여 고능력 암소를 선별한 후 도축장에서 도축된 고능력 암소의 난소를 개별적으로 채취하여 항생제가 함유된 생리식염수가 들어 있는 보온병에 담아 3~4시간 내에 실험실로 운반하였다. 18 gauge 바늘이 부착된 10 ㎖ 주사기를 이용하여 2~7 ㎖ 의 가시난포에서 세포질이 충실하고 최소한 3층 이상의 난구세포를 가진 난포란을 채란하여 실험에 공시하였다. 체외성숙용 배양액은 TCM-199 8.6 ㎖에 FBS 1 ㎖, E2 (1 ㎍/㎖, Sigma E-2758) 100 ㎕, FSH (35 ㎍/㎖, Sigma F-2293) 70 ㎕, LH (10 ㎍/㎖, Sigma L-9510) 100 ㎕, EGF (10 ng/㎖, Sigma E-4127) 100 ㎕, Gentamycine (25 ㎍/㎖, G-1264) 10 ㎕를 첨가하여 20~22시간 동안 체외성숙을 유도하였다. 성숙된 난포란은 TL-FERT 배양액에서 Heparin으로 수정능을 획득한 정자와 수정시킨 후 CR1aa 배양액으로 배 발달을 유도하였다. 총 120개의 난소에서 1411개의 난자를 채취하였고 50.3%의 수정율과 29.1%의 발달율을 나타내었다. 난소 1개당 11.7개의 난자를 채취하였고, 5.9개의 수정된 난자를 얻었고, 1.7개가 배반포기까지 발달하였다. 배반포기까지 발달한 수정란은 그에 해당되는 난소와 DNA를 추출하고 Multiplex-PCR을 통해 분석한 다음 ABI Prism® 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA)를 이용하여 전기영동하고, GeneScan software version 2.1 (Applied Biosystems, USA)을 이용하여 Microsatellitemarker set와 비교하여 친자확인 및 성감별을 실시하였다. 총 30개의 개체 중 6개의 개체에서 11개의 Marker중 5개의 Marker에서 수치가 일치함을 확인하여 친자확인에 성공하였다. 성감별 결과 6개 개체 모두 암소로 나타났다. 혈통 및 도체성적을 추적하여 도축장에서 도축되는 고능력 암소의 난소를 채취하여 체외수정란을 생산해내고 생산한 수정란이 채란에 사용된 난소 및 수정에 사용된 정자와 친자임을 확인하였고 성감별을 실시하였다. 본 연구결과 고능력우의 체외수정란 생산체계를 확립하고 한우 암소의 개량량을 극대화 시키는 동시에 산업화 구축의 기초를 마련하는 연구로 사료된다.
계류대장을 통하여 고능력 암소를 선별한 후 도축장에서 도축된 고능력 암소의 난소를 개별적으로 채취하여 항생제가 함유된 생리식염수가 들어 있는 보온병에 담아 3~4시간 내에 실험실로 운반하였다. 18 gauge 바늘이 부착된 10 ㎖ 주사기를 이용하여 2~7 ㎖ 의 가시난포에서 세포질이 충실하고 최소한 3층 이상의 난구세포를 가진 난포란을 채란하여 실험에 공시하였다. 체외성숙용 배양액은 TCM-199 8.6 ㎖에 FBS 1 ㎖, E2 (1 ㎍/㎖, Sigma E-2758) 100 ㎕, FSH (35 ㎍/㎖, Sigma F-2293) 70 ㎕, LH (10 ㎍/㎖, Sigma L-9510) 100 ㎕, EGF (10 ng/㎖, Sigma E-4127) 100 ㎕, Gentamycine (25 ㎍/㎖, G-1264) 10 ㎕를 첨가하여 20~22시간 동안 체외성숙을 유도하였다. 성숙된 난포란은 TL-FERT 배양액에서 Heparin으로 수정능을 획득한 정자와 수정시킨 후 CR1aa 배양액으로 배 발달을 유도하였다. 총 120개의 난소에서 1411개의 난자를 채취하였고 50.3%의 수정율과 29.1%의 발달율을 나타내었다. 난소 1개당 11.7개의 난자를 채취하였고, 5.9개의 수정된 난자를 얻었고, 1.7개가 배반포기까지 발달하였다. 배반포기까지 발달한 수정란은 그에 해당되는 난소와 DNA를 추출하고 Multiplex-PCR을 통해 분석한 다음 ABI Prism® 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA)를 이용하여 전기영동하고, GeneScan software version 2.1 (Applied Biosystems, USA)을 이용하여 Microsatellite marker set와 비교하여 친자확인 및 성감별을 실시하였다. 총 30개의 개체 중 6개의 개체에서 11개의 Marker중 5개의 Marker에서 수치가 일치함을 확인하여 친자확인에 성공하였다. 성감별 결과 6개 개체 모두 암소로 나타났다. 혈통 및 도체성적을 추적하여 도축장에서 도축되는 고능력 암소의 난소를 채취하여 체외수정란을 생산해내고 생산한 수정란이 채란에 사용된 난소 및 수정에 사용된 정자와 친자임을 확인하였고 성감별을 실시하였다. 본 연구결과 고능력우의 체외수정란 생산체계를 확립하고 한우 암소의 개량량을 극대화 시키는 동시에 산업화 구축의 기초를 마련하는 연구로 사료된다.
This study was carried out to identification parentage test on individual in vitro embryo production in elite Hanwoo. By using the Hanwoo traceability system, select the elite cow that have been slaughtered in slaughter houses. The ovaries of elite Hanwoo ware obtained from a Kimhae slaughter ho...
This study was carried out to identification parentage test on individual in vitro embryo production in elite Hanwoo. By using the Hanwoo traceability system, select the elite cow that have been slaughtered in slaughter houses. The ovaries of elite Hanwoo ware obtained from a Kimhae slaughter house and kept on 26 to 36℃ in physiological saline containing antibiotics and trasported to laboratory within 3 to 4 hours. The oocytes were aspirated from visible follicles of 2∼7 ㎜ in diameter using a 18 gauge needle attached to a 10 ㎖ disposable sterile syringe. The recoverd oocytes were completely surrounded by at least 3 layers of cumulus cells in combination with a homogeneous cytoplasmic pigmentation. Aspirated oocytes were induced in vitro maturation in TCM-199 supplemented with FBS, E2 (1 ㎍/㎖), FSH (35 ㎍/㎖), LH (10 ㎍/㎖), EGF (10 ng/㎖), Gentamycine (25 ㎍/㎖) at 36.5℃ under 5% CO2 in air for 20 to 22 hours. Capacitation Sperm and previously matured cumulus-oocytes complexes were cultured for 18 to 20 houres in 100 ㎕ droplets of fertilization media under paraffin oil. The zygotes were cultured with CR1aa for 7 to 9 days. Collected 1411 oocytes from the 120 ovaries, the cleavage rate was 50.3%. The percentage of in vitro development blastocysts among cleaved embryos was 29.1%. DNA was extracted from the blastocyst and the ovaries Multiplex-PCR analysis, it was determined using ABI 3130 (Applied Biosystems) and GeneScan software version 2.1 (Applied Biosystems). Microsatellite marker set by comparison with the paternity test was carried out and sexing. In six individual, five marker were consistent with microsatellite marker set. Succeeded in identification of paternity test and results of the sexing was female of six individual. By track pedigree and carcass trait, the ovaries of elite Hanwoo that have been slaughtered in slaughter housesware obtained and production in vitro embryos, among embryo and ovary and sperm, succeeded in identification of paternity test and results of the sexing. These results suggest that establishment of in vitro embryo production systems elite Hanwoo, maximize the amount of genetic gains of Hanwoo, fundamental study of industrialization system.
This study was carried out to identification parentage test on individual in vitro embryo production in elite Hanwoo. By using the Hanwoo traceability system, select the elite cow that have been slaughtered in slaughter houses. The ovaries of elite Hanwoo ware obtained from a Kimhae slaughter house and kept on 26 to 36℃ in physiological saline containing antibiotics and trasported to laboratory within 3 to 4 hours. The oocytes were aspirated from visible follicles of 2∼7 ㎜ in diameter using a 18 gauge needle attached to a 10 ㎖ disposable sterile syringe. The recoverd oocytes were completely surrounded by at least 3 layers of cumulus cells in combination with a homogeneous cytoplasmic pigmentation. Aspirated oocytes were induced in vitro maturation in TCM-199 supplemented with FBS, E2 (1 ㎍/㎖), FSH (35 ㎍/㎖), LH (10 ㎍/㎖), EGF (10 ng/㎖), Gentamycine (25 ㎍/㎖) at 36.5℃ under 5% CO2 in air for 20 to 22 hours. Capacitation Sperm and previously matured cumulus-oocytes complexes were cultured for 18 to 20 houres in 100 ㎕ droplets of fertilization media under paraffin oil. The zygotes were cultured with CR1aa for 7 to 9 days. Collected 1411 oocytes from the 120 ovaries, the cleavage rate was 50.3%. The percentage of in vitro development blastocysts among cleaved embryos was 29.1%. DNA was extracted from the blastocyst and the ovaries Multiplex-PCR analysis, it was determined using ABI 3130 (Applied Biosystems) and GeneScan software version 2.1 (Applied Biosystems). Microsatellite marker set by comparison with the paternity test was carried out and sexing. In six individual, five marker were consistent with microsatellite marker set. Succeeded in identification of paternity test and results of the sexing was female of six individual. By track pedigree and carcass trait, the ovaries of elite Hanwoo that have been slaughtered in slaughter housesware obtained and production in vitro embryos, among embryo and ovary and sperm, succeeded in identification of paternity test and results of the sexing. These results suggest that establishment of in vitro embryo production systems elite Hanwoo, maximize the amount of genetic gains of Hanwoo, fundamental study of industrialization system.
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