Turnip yellow mosaic virus (TYMV) 는 6.3 kb의 positive strand RNA 바이러스로서 구형의 모양을 가지고 있다. 주로 배추를 비롯한 십자화과 식물을 기주로 삼으며, Nicotiana benthamiana 에서도 증식할 수 있다. 이전 연구에서, TYMV coat ...
Turnip yellow mosaic virus (TYMV) 는 6.3 kb의 positive strand RNA 바이러스로서 구형의 모양을 가지고 있다. 주로 배추를 비롯한 십자화과 식물을 기주로 삼으며, Nicotiana benthamiana 에서도 증식할 수 있다. 이전 연구에서, TYMV coat protein (CP)의 N-말단 혹은 C-말단에 c-Myc epitope를 넣어 virion assembly가 잘 일어나는지에 대하여 연구한 결과 N-말단에 삽입한 경우 virion assembly가 제대로 일어남을 확인하였다. 본 연구에서는 T7 epitope, Tat peptide, HSV epitope, (Arg)9, (RxR)4 등의 peptide들을 CP의 N-말단에 삽입하여 virion assembly가 제대로 일어나는지 알아보았다. 이들 CP를 변형시킨 TYMV construct는 N. benthamiana에 agroinfiltration 방법을 이용하여 도입했으며 7일 경과 후 접종한 잎에서 얻은 leaf extract에 대해 agarose gel electrophoresis와 Western blot 방법의 실험을 이용해 분석하였다. 그 결과, T7-CP과 Tat-CP의 경우 전기영동 시 wild-type virion과 비슷한 속도로 움직이는 band를 확인할 수 있었다. 이는 virion 조립이 제대로 되었음을 시사하는 것이다. (Arg)9 이나 (RxR)4 sequence를 삽입한 경우 거의 복제가 되지 않아 virion assembly 여부를 조사하지 못 하였다. 하지만 CP만을 발현시켜 본 결과 (Arg)9 이나 (RxR)4 의 경우에도 wild-type virion과 비슷하게 움직이는 band를 관찰할 수 있었다. HSV sequence를 삽입한 경우 CP는 만들어지지만 assembly는 제대로 일어나지 않는 것으로 나타났다. 전체적으로, TYMV 복제와 virion assembly는 CP 앞에 삽입한 sequence에 따라 크게 영향을 받음을 알 수 있었다.
Turnip yellow mosaic virus (TYMV) 는 6.3 kb의 positive strand RNA 바이러스로서 구형의 모양을 가지고 있다. 주로 배추를 비롯한 십자화과 식물을 기주로 삼으며, Nicotiana benthamiana 에서도 증식할 수 있다. 이전 연구에서, TYMV coat protein (CP)의 N-말단 혹은 C-말단에 c-Myc epitope를 넣어 virion assembly가 잘 일어나는지에 대하여 연구한 결과 N-말단에 삽입한 경우 virion assembly가 제대로 일어남을 확인하였다. 본 연구에서는 T7 epitope, Tat peptide, HSV epitope, (Arg)9, (RxR)4 등의 peptide들을 CP의 N-말단에 삽입하여 virion assembly가 제대로 일어나는지 알아보았다. 이들 CP를 변형시킨 TYMV construct는 N. benthamiana에 agroinfiltration 방법을 이용하여 도입했으며 7일 경과 후 접종한 잎에서 얻은 leaf extract에 대해 agarose gel electrophoresis와 Western blot 방법의 실험을 이용해 분석하였다. 그 결과, T7-CP과 Tat-CP의 경우 전기영동 시 wild-type virion과 비슷한 속도로 움직이는 band를 확인할 수 있었다. 이는 virion 조립이 제대로 되었음을 시사하는 것이다. (Arg)9 이나 (RxR)4 sequence를 삽입한 경우 거의 복제가 되지 않아 virion assembly 여부를 조사하지 못 하였다. 하지만 CP만을 발현시켜 본 결과 (Arg)9 이나 (RxR)4 의 경우에도 wild-type virion과 비슷하게 움직이는 band를 관찰할 수 있었다. HSV sequence를 삽입한 경우 CP는 만들어지지만 assembly는 제대로 일어나지 않는 것으로 나타났다. 전체적으로, TYMV 복제와 virion assembly는 CP 앞에 삽입한 sequence에 따라 크게 영향을 받음을 알 수 있었다.
Turnip yellow mosaic virus (TYMV) is a non-enveloped icosahedron composed of 20 kDa single coat protein. In this study, we have modified TYMV coat protein (CP) by inserting T7, HSV, Tat, (Arg)9, or (RxR)4 peptide at the N-terminus of the CP and examined its effect on virion assembly. The TYMV constr...
Turnip yellow mosaic virus (TYMV) is a non-enveloped icosahedron composed of 20 kDa single coat protein. In this study, we have modified TYMV coat protein (CP) by inserting T7, HSV, Tat, (Arg)9, or (RxR)4 peptide at the N-terminus of the CP and examined its effect on virion assembly. The TYMV constructs containing modified CP genes were introduced into N. benthamiana by agroinfiltration. Seven days after the agroinfiltration, leaf extract was prepared and virion assembly was examined by agarose gel electrophoresis and Western blot analysis. The results showed that the TYMV construct containing T7 or Tat peptide produced a band that was co-migrating with wild-type virions, suggesting that the CPs modified with T7 or Tat peptide assembled properly into virions. The constructs containing (Arg)9 and (RxR)4 sequences barely replicated, hence no CP was produced. When only the CP gene was expressed, CPs with (Arg)9 or (RxR)4 were successfully produced, yielding virions whose mobility was comparable to that of wild type. In the case of the CP having HSV tag, virion band was not detected, although sufficient amount of CP was produced. This indicates that the CP with HSV tag failed to assemble into virions. Overall, the results suggest that TYMV replication and virion assembly are strongly influenced by the sequence of the inserted peptide.
Turnip yellow mosaic virus (TYMV) is a non-enveloped icosahedron composed of 20 kDa single coat protein. In this study, we have modified TYMV coat protein (CP) by inserting T7, HSV, Tat, (Arg)9, or (RxR)4 peptide at the N-terminus of the CP and examined its effect on virion assembly. The TYMV constructs containing modified CP genes were introduced into N. benthamiana by agroinfiltration. Seven days after the agroinfiltration, leaf extract was prepared and virion assembly was examined by agarose gel electrophoresis and Western blot analysis. The results showed that the TYMV construct containing T7 or Tat peptide produced a band that was co-migrating with wild-type virions, suggesting that the CPs modified with T7 or Tat peptide assembled properly into virions. The constructs containing (Arg)9 and (RxR)4 sequences barely replicated, hence no CP was produced. When only the CP gene was expressed, CPs with (Arg)9 or (RxR)4 were successfully produced, yielding virions whose mobility was comparable to that of wild type. In the case of the CP having HSV tag, virion band was not detected, although sufficient amount of CP was produced. This indicates that the CP with HSV tag failed to assemble into virions. Overall, the results suggest that TYMV replication and virion assembly are strongly influenced by the sequence of the inserted peptide.
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