X-ray crystallography는 거대 분자의 구조를 확인하는 일반적인 측정 방법이다. 그러나 결정화로 인해 거대 분자(macromolecules)의 복잡한 구조와 성질을 이해하는 것에 한계가 있다. 따라서 거대 분자의 움직임을 제한하지 않는 용액 내에서의 측정이 필요하다. 그러나 용액 상태에서 평균화된 거시적인 관찰은 개별적인 분자의 동적 특성과 불균일한 분자 상태에 대한 정확한 정보를 얻을 수 없다. 단일 분자 실험은, 개별적인 분자에 대한 동역학적 변화를 관측할 수 있으므로 기존의 다양한 연구에서 활용되고 있다. 본 연구에서는 Cy5를 ...
X-ray crystallography는 거대 분자의 구조를 확인하는 일반적인 측정 방법이다. 그러나 결정화로 인해 거대 분자(macromolecules)의 복잡한 구조와 성질을 이해하는 것에 한계가 있다. 따라서 거대 분자의 움직임을 제한하지 않는 용액 내에서의 측정이 필요하다. 그러나 용액 상태에서 평균화된 거시적인 관찰은 개별적인 분자의 동적 특성과 불균일한 분자 상태에 대한 정확한 정보를 얻을 수 없다. 단일 분자 실험은, 개별적인 분자에 대한 동역학적 변화를 관측할 수 있으므로 기존의 다양한 연구에서 활용되고 있다. 본 연구에서는 Cy5를 labeling 한 Streptavidin (STV)에 binding 된 Quantum dot (Q.dot) 에서의 FRET (Förster Resonance Energy Transfer)을 측정하기 위한 방법으로 시간 분해 실험 (Time-resolved experiments) 과 FRET-FCS, 용액 내에서의 fluorescence intensity 변화를 관측하였다. 또한 단일 분자 스케일에서의 실험으로, Streptavidin과 biotin의 binding을 활용하거나 supported lipid bilayer를 활용하여 슬라이드 표면에 immobilization 한 후 time-trace 분석 하였다. 특히, biotin conjugated Q.dot과 STV(Cy5)의 결합을 확인하였으며, 실험으로부터 얻은 FRET efficiency를 통해 두 형광 분자 사이의 거리를 계산할 수 있었다.
X-ray crystallography는 거대 분자의 구조를 확인하는 일반적인 측정 방법이다. 그러나 결정화로 인해 거대 분자(macromolecules)의 복잡한 구조와 성질을 이해하는 것에 한계가 있다. 따라서 거대 분자의 움직임을 제한하지 않는 용액 내에서의 측정이 필요하다. 그러나 용액 상태에서 평균화된 거시적인 관찰은 개별적인 분자의 동적 특성과 불균일한 분자 상태에 대한 정확한 정보를 얻을 수 없다. 단일 분자 실험은, 개별적인 분자에 대한 동역학적 변화를 관측할 수 있으므로 기존의 다양한 연구에서 활용되고 있다. 본 연구에서는 Cy5를 labeling 한 Streptavidin (STV)에 binding 된 Quantum dot (Q.dot) 에서의 FRET (Förster Resonance Energy Transfer)을 측정하기 위한 방법으로 시간 분해 실험 (Time-resolved experiments) 과 FRET-FCS, 용액 내에서의 fluorescence intensity 변화를 관측하였다. 또한 단일 분자 스케일에서의 실험으로, Streptavidin과 biotin의 binding을 활용하거나 supported lipid bilayer를 활용하여 슬라이드 표면에 immobilization 한 후 time-trace 분석 하였다. 특히, biotin conjugated Q.dot과 STV(Cy5)의 결합을 확인하였으며, 실험으로부터 얻은 FRET efficiency를 통해 두 형광 분자 사이의 거리를 계산할 수 있었다.
X-ray crystallography is the most common tool for identifying structure of macromolecules. However, understanding complicated structures and properties of macromolecules is limited due to crystallization. Therefore, measurement that doesn't restrict activity of macromolecules is needed in solution. ...
X-ray crystallography is the most common tool for identifying structure of macromolecules. However, understanding complicated structures and properties of macromolecules is limited due to crystallization. Therefore, measurement that doesn't restrict activity of macromolecules is needed in solution. However, typical macroscopic observations averaged in solution doesn’t provide complete information about dynamic characteristics of individual molecules and the heterogeneity of molecular state. Single-molecule experiments are being utilized in various studies as properties of individual molecules in solution can be observed. In this study, time-resolved experiments, FRET-FCS and fluorescence intensity measurement in solution have been carried out for measuring FRET (Forster Resonance Energy Transfer) between Streptavidin labeled Cy5 and Quantum dot. Time-traces of individual particles have been obtained by immobilization on the surface of the slide by using Streptavidin and biotin combination or supported lipid bilayer. Especially, coupling between biotin conjugated Q.dot and STV(Cy5) was confirmed and the distance between two fluorescent molecules was determined by FRET efficiency from experiments.
X-ray crystallography is the most common tool for identifying structure of macromolecules. However, understanding complicated structures and properties of macromolecules is limited due to crystallization. Therefore, measurement that doesn't restrict activity of macromolecules is needed in solution. However, typical macroscopic observations averaged in solution doesn’t provide complete information about dynamic characteristics of individual molecules and the heterogeneity of molecular state. Single-molecule experiments are being utilized in various studies as properties of individual molecules in solution can be observed. In this study, time-resolved experiments, FRET-FCS and fluorescence intensity measurement in solution have been carried out for measuring FRET (Forster Resonance Energy Transfer) between Streptavidin labeled Cy5 and Quantum dot. Time-traces of individual particles have been obtained by immobilization on the surface of the slide by using Streptavidin and biotin combination or supported lipid bilayer. Especially, coupling between biotin conjugated Q.dot and STV(Cy5) was confirmed and the distance between two fluorescent molecules was determined by FRET efficiency from experiments.
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