Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV)는 무지개송어를 비롯한 담수 연어과 어류에 감염되어 심각한 바이러스 질병을 야기하는 병원체이다. IPNV는 유럽을 비롯한 다른 국가로부터 국내에 유입이 될 가능성이 높은 바이러스로 국내에 서식하는 어류와 양식산 어류의 피해를 줄이기 위하여 바이러스 검출방법 최적화가 필요하다. IPNV를 검출하는 방법으로 면역항체법, 항혈청법, 분자생물학적 방법 등 많은 진단법을 개발하기 위한 노력과 기술적 진보가 있어 왔지만 잠복성 및 감염초기의 바이러스 질병을 신속히 진단하는 데에는 어려움이 있고, polyclonal antibody는 같은 성질의 항체를 계속적으로 얻을 수 없어 실험범위가 제한되어 있다는 문제를 가지고 있다. 최근에 바이러스의 검출을 위한 시험법으로 민감도와 ...
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV)는 무지개송어를 비롯한 담수 연어과 어류에 감염되어 심각한 바이러스 질병을 야기하는 병원체이다. IPNV는 유럽을 비롯한 다른 국가로부터 국내에 유입이 될 가능성이 높은 바이러스로 국내에 서식하는 어류와 양식산 어류의 피해를 줄이기 위하여 바이러스 검출방법 최적화가 필요하다. IPNV를 검출하는 방법으로 면역항체법, 항혈청법, 분자생물학적 방법 등 많은 진단법을 개발하기 위한 노력과 기술적 진보가 있어 왔지만 잠복성 및 감염초기의 바이러스 질병을 신속히 진단하는 데에는 어려움이 있고, polyclonal antibody는 같은 성질의 항체를 계속적으로 얻을 수 없어 실험범위가 제한되어 있다는 문제를 가지고 있다. 최근에 바이러스의 검출을 위한 시험법으로 민감도와 특이도가 우수한 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction; PCR)을 활용한 유전자 증폭기술이 널리 활용되고 있다. 이 PCR법은 빠른 시간 내에 병원체의 검출이 가능하고 검출감도가 높으며, 또한 짧은 시간에 많은 시료를 분석할 수 있어 생물학적 시험법에 비해 시간과 경비를 절약 할 수 있다. 또한 바이러스 특이적 primer를 사용하여 바이러스 존재 유무를 검출하기 때문에 특이도가 매우 높다. 본 연구에서는 IPNV를 신속하게 정량적으로 검출 할 수 있는 TaqMan probereal-time PCR 시험법을 확립하였다. IPNV 핵산 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며, TaqMan probe를 이용한 정량 분석법을 최적화 하였다. IPNV 분석법의 민감도는 7.84 × 10-3 TCID50/mL로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 IPNV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. IPNV의 TaqMan probe real-time PCR을 이용한 정량 분석법은 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출을 위한 기존의 시험법을 대체할 수 있는 우수한 방법으로 사료된다.
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV)는 무지개송어를 비롯한 담수 연어과 어류에 감염되어 심각한 바이러스 질병을 야기하는 병원체이다. IPNV는 유럽을 비롯한 다른 국가로부터 국내에 유입이 될 가능성이 높은 바이러스로 국내에 서식하는 어류와 양식산 어류의 피해를 줄이기 위하여 바이러스 검출방법 최적화가 필요하다. IPNV를 검출하는 방법으로 면역항체법, 항혈청법, 분자생물학적 방법 등 많은 진단법을 개발하기 위한 노력과 기술적 진보가 있어 왔지만 잠복성 및 감염초기의 바이러스 질병을 신속히 진단하는 데에는 어려움이 있고, polyclonal antibody는 같은 성질의 항체를 계속적으로 얻을 수 없어 실험범위가 제한되어 있다는 문제를 가지고 있다. 최근에 바이러스의 검출을 위한 시험법으로 민감도와 특이도가 우수한 중합효소 연쇄반응 (polymerase chain reaction; PCR)을 활용한 유전자 증폭기술이 널리 활용되고 있다. 이 PCR법은 빠른 시간 내에 병원체의 검출이 가능하고 검출감도가 높으며, 또한 짧은 시간에 많은 시료를 분석할 수 있어 생물학적 시험법에 비해 시간과 경비를 절약 할 수 있다. 또한 바이러스 특이적 primer를 사용하여 바이러스 존재 유무를 검출하기 때문에 특이도가 매우 높다. 본 연구에서는 IPNV를 신속하게 정량적으로 검출 할 수 있는 TaqMan probe real-time PCR 시험법을 확립하였다. IPNV 핵산 증폭을 위한 특이적인 primer를 선별하였으며, TaqMan probe를 이용한 정량 분석법을 최적화 하였다. IPNV 분석법의 민감도는 7.84 × 10-3 TCID50/mL로 계산되었다. 확립된 시험법의 신뢰성 검증결과 이 real-time PCR 방법은 IPNV에 매우 특이성이 높았으며 재현성이 우수하였다. IPNV의 TaqMan probe real-time PCR을 이용한 정량 분석법은 양식산 어류와 자연산 어류에서의 바이러스 검출을 위한 기존의 시험법을 대체할 수 있는 우수한 방법으로 사료된다.
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) is a nonenveloped, bisegmented, double-stranded RNA virus that highly contagious disease of young salmonids. IPNV initially reported to affect salmonid first-feeding fry, but in recent report, IPNV can also occur in numerous other species of fresh water an...
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) is a nonenveloped, bisegmented, double-stranded RNA virus that highly contagious disease of young salmonids. IPNV initially reported to affect salmonid first-feeding fry, but in recent report, IPNV can also occur in numerous other species of fresh water and marine fish. Because of its spread and effect, IPNV has been considered as one of the most important disease problems in fish farming industry. Therefore, development of IPNV detection method is required. For the detection of IPNV, enzyme immunoassay using polyclonal antibodies, western blotting, and electron microscopy are mainly used. However these methods have limitation to detect latent infection and an initial viral disease. Recently nucleotide amplification test using polymerase chain reaction (PCR) has been used widely for rapid and specific detection of viruses. In this study, TaqMan probe real-time quantitative PCR assays to detect IPNV was developed and validated. Specific primers for amplification of IPNV was selected, and IPNV was quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity for IPNV real-time PCR was calculated to be 7.84× 10-3 TCID50/mL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to IPNV. Therefore, it was concluded that these rapid, specific, and robust assays could replace the conventional assay for detection of these viruses.
Infectious pancreatic necrosis virus (IPNV) is a nonenveloped, bisegmented, double-stranded RNA virus that highly contagious disease of young salmonids. IPNV initially reported to affect salmonid first-feeding fry, but in recent report, IPNV can also occur in numerous other species of fresh water and marine fish. Because of its spread and effect, IPNV has been considered as one of the most important disease problems in fish farming industry. Therefore, development of IPNV detection method is required. For the detection of IPNV, enzyme immunoassay using polyclonal antibodies, western blotting, and electron microscopy are mainly used. However these methods have limitation to detect latent infection and an initial viral disease. Recently nucleotide amplification test using polymerase chain reaction (PCR) has been used widely for rapid and specific detection of viruses. In this study, TaqMan probe real-time quantitative PCR assays to detect IPNV was developed and validated. Specific primers for amplification of IPNV was selected, and IPNV was quantified by use of TaqMan probe. The sensitivity for IPNV real-time PCR was calculated to be 7.84× 10-3 TCID50/mL. The TaqMan probe real-time PCR assay was proven to be reproducible and very specific to IPNV. Therefore, it was concluded that these rapid, specific, and robust assays could replace the conventional assay for detection of these viruses.
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