본 연구의 목적은 혈행 개선 실험을 위한 연구방법 표준화를 제시하는 것이다. 첫째, 생체외 실험 결과를 방해하지 않는 혈소판 풍부 혈장의 최소 부피를 연구 하였다. 인간 혈소판 풍부 혈장의 생체외 응집실험을 위한 최적의 혈소판 농도는 2X10⁸ platelets/ml였다. 양성대조군으로 ASA(acetylsalicylic acid)를 사용할 때 10㎕/㎖의 농도에서 항혈전효과를 확인하였다. Hill equation으로 ASA 5㎕/㎖와 10㎕/㎖사이의 ...
본 연구의 목적은 혈행 개선 실험을 위한 연구방법 표준화를 제시하는 것이다. 첫째, 생체외 실험 결과를 방해하지 않는 혈소판 풍부 혈장의 최소 부피를 연구 하였다. 인간 혈소판 풍부 혈장의 생체외 응집실험을 위한 최적의 혈소판 농도는 2X10⁸ platelets/ml였다. 양성대조군으로 ASA(acetylsalicylic acid)를 사용할 때 10㎕/㎖의 농도에서 항혈전효과를 확인하였다. Hill equation으로 ASA 5㎕/㎖와 10㎕/㎖사이의 거대분자 리간드의 결합 농도를 계산해 본 결과 K 상수값은 8.93㎕/㎖였다.
둘째, 1% DMSO(Dimethyl Sulfoxide)는 ASA를 녹이는 용매로 적합했다. 한편, PEG400 (50 % (v / v) Polyethylene glycol 400 inwater)은 자체의 항혈전 효과가 있으므로 용매로 사용하기에는 적절하지 않았고, 또한 ASA를 제대로 녹이지 못했다.
셋째, 혈전 색전증생체내 검사는 생체 내에서 항혈전효과를 시험하는 방법이다. 그러나 마비의 정도를 정의하기가 어렵다. Rotarod 실험으로 마비의 정도를 구별할 수 있는지 실험을 진행하였고, 300초 이상의 지속성을 보인 경우를 최대 설정값으로 판단하였다. ASA는 100mg/kg의 농도에서 혈전색전증에 대한 최대의 보호 효과를 보였다. TXA2의 농도는 바이오마커로서 ASA 20㎍/㎖의 농도에서 억제되었다.
마지막으로, ASA로 유발시킨 위출혈은 다카기 등급 지수로 평가하였다. ASA 300mg /kg농도에서 통계적 유의차가 확인되었다.
결론적으로 순환 개선 시약 개발을 위해서는 생체내, 생체외 및 바이오마커 연구가 동시에 진행되어야 한다. 이 연구의 모든 결과는 데이터를 공유함으로써 실험실 간 중복실험을 줄이고,다른 연구자가 폭넓게 연구방법을 선택 할 수 있도록 한다.
본 연구의 목적은 혈행 개선 실험을 위한 연구방법 표준화를 제시하는 것이다. 첫째, 생체외 실험 결과를 방해하지 않는 혈소판 풍부 혈장의 최소 부피를 연구 하였다. 인간 혈소판 풍부 혈장의 생체외 응집실험을 위한 최적의 혈소판 농도는 2X10⁸ platelets/ml였다. 양성대조군으로 ASA(acetylsalicylic acid)를 사용할 때 10㎕/㎖의 농도에서 항혈전효과를 확인하였다. Hill equation으로 ASA 5㎕/㎖와 10㎕/㎖사이의 거대분자 리간드의 결합 농도를 계산해 본 결과 K 상수값은 8.93㎕/㎖였다.
둘째, 1% DMSO(Dimethyl Sulfoxide)는 ASA를 녹이는 용매로 적합했다. 한편, PEG400 (50 % (v / v) Polyethylene glycol 400 in water)은 자체의 항혈전 효과가 있으므로 용매로 사용하기에는 적절하지 않았고, 또한 ASA를 제대로 녹이지 못했다.
셋째, 혈전 색전증 생체내 검사는 생체 내에서 항혈전효과를 시험하는 방법이다. 그러나 마비의 정도를 정의하기가 어렵다. Rotarod 실험으로 마비의 정도를 구별할 수 있는지 실험을 진행하였고, 300초 이상의 지속성을 보인 경우를 최대 설정값으로 판단하였다. ASA는 100mg/kg의 농도에서 혈전색전증에 대한 최대의 보호 효과를 보였다. TXA2의 농도는 바이오마커로서 ASA 20㎍/㎖의 농도에서 억제되었다.
마지막으로, ASA로 유발시킨 위출혈은 다카기 등급 지수로 평가하였다. ASA 300mg /kg농도에서 통계적 유의차가 확인되었다.
결론적으로 순환 개선 시약 개발을 위해서는 생체내, 생체외 및 바이오마커 연구가 동시에 진행되어야 한다. 이 연구의 모든 결과는 데이터를 공유함으로써 실험실 간 중복실험을 줄이고,다른 연구자가 폭넓게 연구방법을 선택 할 수 있도록 한다.
The aim of present study was to present method standardization for experiment of blood circulation improvement, such as antiplatelet aggregation test of ex-vivo experiment, thromboembolism and potential antigastroduodenal ulcer drug development gastric injury model of in-vivo experiment and biomarke...
The aim of present study was to present method standardization for experiment of blood circulation improvement, such as antiplatelet aggregation test of ex-vivo experiment, thromboembolism and potential antigastroduodenal ulcer drug development gastric injury model of in-vivo experiment and biomarker study. First, minimum volume of platelet rich plasma volume that does not interfere ex-vivo experiment was studied. The optimal platelet concentration for ex-vivo aggregation experiment of human platelet-rich plasma was 2X108 platelets/ml. Also, the concentration of 10㎕/㎖ ASA(acetylsalicylic acid) was the best volume that meddlesresults in ex-vivo test. The constant K fitting value for the possible concentration to binding of macromolecule ligands between 5 and 10㎕/㎖, the value was 8.93㎕/㎖. Second, 1% DMSO was suitable for vehicle and solvent for ASA. Meanwhile PEG400 (50% (v/v) Polyethylene glycol 400 in water) was inappropriate because of anti-platelet effect. It could not dissolve ASA properly. Third, thromboembolism(TE) in-vivo test is a reasonable method to test the anti-platelet effect in vivo. However, the extent of paralysis was hard to define. Latency to fall in the Rotarod was tested as if it can distinguish the extent of paralysis. The fall down latency longer than 300sec was considered the maximum performance. ASA showed the best protective effect for TE at 100mg/kg. TXA2 levels was biomarker, levels were inhibited by 20㎍/㎖ ASA treatment.
Finally, Gastric bleeding was evaluated by the Takagi rating index after ASA. 300mg/kg ASA treatment showed a significant increase of the ulcer index.
In conclusion, in order to screen blood circulation improving reagents, in-vivo, ex-vivo, and biomarker study should be explored simultaneously. All results in this research can help other researchers to identify the suitable methods, thereby allowing a better or wider choice of the methods for pre-clinical level researches. By sharing these data will avoid potential repetition of the experiment among laboratories.
The aim of present study was to present method standardization for experiment of blood circulation improvement, such as antiplatelet aggregation test of ex-vivo experiment, thromboembolism and potential antigastroduodenal ulcer drug development gastric injury model of in-vivo experiment and biomarker study. First, minimum volume of platelet rich plasma volume that does not interfere ex-vivo experiment was studied. The optimal platelet concentration for ex-vivo aggregation experiment of human platelet-rich plasma was 2X108 platelets/ml. Also, the concentration of 10㎕/㎖ ASA(acetylsalicylic acid) was the best volume that meddlesresults in ex-vivo test. The constant K fitting value for the possible concentration to binding of macromolecule ligands between 5 and 10㎕/㎖, the value was 8.93㎕/㎖. Second, 1% DMSO was suitable for vehicle and solvent for ASA. Meanwhile PEG400 (50% (v/v) Polyethylene glycol 400 in water) was inappropriate because of anti-platelet effect. It could not dissolve ASA properly. Third, thromboembolism(TE) in-vivo test is a reasonable method to test the anti-platelet effect in vivo. However, the extent of paralysis was hard to define. Latency to fall in the Rotarod was tested as if it can distinguish the extent of paralysis. The fall down latency longer than 300sec was considered the maximum performance. ASA showed the best protective effect for TE at 100mg/kg. TXA2 levels was biomarker, levels were inhibited by 20㎍/㎖ ASA treatment.
Finally, Gastric bleeding was evaluated by the Takagi rating index after ASA. 300mg/kg ASA treatment showed a significant increase of the ulcer index.
In conclusion, in order to screen blood circulation improving reagents, in-vivo, ex-vivo, and biomarker study should be explored simultaneously. All results in this research can help other researchers to identify the suitable methods, thereby allowing a better or wider choice of the methods for pre-clinical level researches. By sharing these data will avoid potential repetition of the experiment among laboratories.
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