연구목적 : 본 연구는 엑소좀 단백질 분리 기술을 확립하고, CEACAM6와 CD56과 같은 엑소좀 단백질을 폐암의 바이오 마커로 활용할 수 있는 가능성을 확인하고자 하였다.
대상 및 방법 : 실험에는 비소세포폐암 세포주인 A549와 H23, 소세포폐암 세포주인 NCI-H209와 NCI-H417을 사용하였고 대조군으로 L-132 세포를 사용하였다. 각각의 세포주에서 폐암 단백질 마커인 CEACAM6, CD56, TTF-1과 엑소좀 마커 CD81, CD63 그리고 calnexin을 ...
연구목적 : 본 연구는 엑소좀 단백질 분리 기술을 확립하고, CEACAM6와 CD56과 같은 엑소좀 단백질을 폐암의 바이오 마커로 활용할 수 있는 가능성을 확인하고자 하였다.
대상 및 방법 : 실험에는 비소세포폐암 세포주인 A549와 H23, 소세포폐암 세포주인 NCI-H209와 NCI-H417을 사용하였고 대조군으로 L-132 세포를 사용하였다. 각각의 세포주에서 폐암 단백질 마커인 CEACAM6, CD56, TTF-1과 엑소좀 마커 CD81, CD63 그리고 calnexin을 웨스턴블롯, 유세포분석, 면역화학염색으로 분석하였다. 비소세포폐암과 소세포폐암 세포주로부터 분리된 엑소좀은 Exoquick-TC를 사용하여 분리하였고 엑소좀의 형태를 확인하기 위해 전자현미경으로 확인하였다. 엑소좀의 농도와 크기는 나노입자추적분석으로 측정했으며, bicinchoninic acid assay로 정량화하였다. 엑소좀 함량에 폐암 마커(CEACAM6, CD56, TTF-1)와 엑소좀 마커(CD81, CD63), 그리고 소포체 마커 calnexin 단백 발현을 웨스턴블롯으로 확인하였다.
결과 : CEACAM6는 비소세포폐암 세포주 A549에서 발현되었고, H23에서는 발현되지 않았다. 소세포폐암 세포주에서는 CD56이 NCI-H209와 NCI-H417 세포에서 모두 발현되었다. TTF-1은 H23과 NCI-H209 세포에서만 발현되었다. 엑소좀 마커인 CD81과 CD63, 그리고 calnexin은 대조군을 포함한 모든 폐암 세포주에서 발현되었다. 각 세포주로부터 분리된 엑소좀의 형태와 크기를 전자현미경으로 확인했을 때 약 30-50 nm의 크기로 지질 이중층이 관찰되었다. 나노입자추적분석에서 엑소좀의 농도는 5.88 x 109/mL로 측정되었고, 크기는 약 40-200 nm로 측정되었다. 각 세포주로부터 분리된 엑소좀에서 CD81과 CD63의 발현을 확인하였고 calnexin은 발현하지 않았다. CEACAM6와 CD56의 발현 패턴은 부모세포와 일치하였다.
결론 : 폐암 세포주로부터 엑소좀을 분리하고, 폐암으로부터 유래된 CEACAM6와 CD56과 같은 표적 단백질을 엑소좀에서 확인하였다. 따라서 엑소좀 단백질은 폐암 환자에서 유용한 바이오 마커가 될 수 있다.
연구목적 : 본 연구는 엑소좀 단백질 분리 기술을 확립하고, CEACAM6와 CD56과 같은 엑소좀 단백질을 폐암의 바이오 마커로 활용할 수 있는 가능성을 확인하고자 하였다.
대상 및 방법 : 실험에는 비소세포폐암 세포주인 A549와 H23, 소세포폐암 세포주인 NCI-H209와 NCI-H417을 사용하였고 대조군으로 L-132 세포를 사용하였다. 각각의 세포주에서 폐암 단백질 마커인 CEACAM6, CD56, TTF-1과 엑소좀 마커 CD81, CD63 그리고 calnexin을 웨스턴블롯, 유세포분석, 면역화학염색으로 분석하였다. 비소세포폐암과 소세포폐암 세포주로부터 분리된 엑소좀은 Exoquick-TC를 사용하여 분리하였고 엑소좀의 형태를 확인하기 위해 전자현미경으로 확인하였다. 엑소좀의 농도와 크기는 나노입자추적분석으로 측정했으며, bicinchoninic acid assay로 정량화하였다. 엑소좀 함량에 폐암 마커(CEACAM6, CD56, TTF-1)와 엑소좀 마커(CD81, CD63), 그리고 소포체 마커 calnexin 단백 발현을 웨스턴블롯으로 확인하였다.
결과 : CEACAM6는 비소세포폐암 세포주 A549에서 발현되었고, H23에서는 발현되지 않았다. 소세포폐암 세포주에서는 CD56이 NCI-H209와 NCI-H417 세포에서 모두 발현되었다. TTF-1은 H23과 NCI-H209 세포에서만 발현되었다. 엑소좀 마커인 CD81과 CD63, 그리고 calnexin은 대조군을 포함한 모든 폐암 세포주에서 발현되었다. 각 세포주로부터 분리된 엑소좀의 형태와 크기를 전자현미경으로 확인했을 때 약 30-50 nm의 크기로 지질 이중층이 관찰되었다. 나노입자추적분석에서 엑소좀의 농도는 5.88 x 109/mL로 측정되었고, 크기는 약 40-200 nm로 측정되었다. 각 세포주로부터 분리된 엑소좀에서 CD81과 CD63의 발현을 확인하였고 calnexin은 발현하지 않았다. CEACAM6와 CD56의 발현 패턴은 부모세포와 일치하였다.
결론 : 폐암 세포주로부터 엑소좀을 분리하고, 폐암으로부터 유래된 CEACAM6와 CD56과 같은 표적 단백질을 엑소좀에서 확인하였다. 따라서 엑소좀 단백질은 폐암 환자에서 유용한 바이오 마커가 될 수 있다.
PURPOSE : This study aimed to establish a technique for the separation of exosomal proteins and confirm the possibility of using the exosomal proteins, including CEACAM6 and CD56 as biomarkers in lung cancer.
MATERIALS AND METHODS : Non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines, A549 and H2...
PURPOSE : This study aimed to establish a technique for the separation of exosomal proteins and confirm the possibility of using the exosomal proteins, including CEACAM6 and CD56 as biomarkers in lung cancer.
MATERIALS AND METHODS : Non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines, A549 and H23, and small cell lung cancer (SCLC) cell lines, NCI-H209 and NCI-H417, were used in this study. L-132 was used as normal lung cell line control. The expression of the lung cancer markers (CEACAM6, CD56, and TTF-1), exosomal markers (CD81 and CD63), and calnexin was analyzed in each of the cell line using western blotting, flow cytometry, and immunocytochemistry. Exosomes were extracted from the NSCLC and SCLC cell lines using Exoquick-TC. They were then processed and their morphology was assessed using transmission electron microscopy (TEM). The concentration and size of the exosomes were measured using nanoparticle tracking analysis (NTA). The exosomes were then quantified using the bicinchoninic acid assay (BCA). The expression of the lung cancer markers (CEACAM6, CD56, and TTF-1), exosomal markers (CD81 and CD63), and calnexin were confirmed in the exosomal content using western blotting.
RESULTS : Among the NSCLC cell lines, CEACAM6 was expressed in A549, but not in H23. In the SCLC cell lines, CD56 protein was expressed in both NCI-H209 and NCI-H417. TTF-1 was expressed in H23 and NCI-H209 cell lines. The exosomal markers (CD81 and CD63) and calnexin were expressed in all four lung cancer cell lines. Exosomes were isolated from each cell line and morphologically confirmed by TEM. The exosomes appeared to be 30-50 nm in size and were enclosed in a lipid bilayer. Using NTA, the concentration of the exosomes was determined to be 5.88 x 109/mL, and the size was approximately 40-200 nm. The expression of CD81 and CD63 was confirmed in the exosomes isolated from each cell line, however, expression of calnexin was not detected. The expression patterns of CEACAM6 and CD56 were consistent with that of the parental cell lines.
CONCLUSION : Exosomes were isolated from lung cancer cell lines and protein markers of lung cancer such as CEACAM6 and CD56 were detected in the exosomes. Therefore, exosomal proteins could be valuable biomarkers in lung cancer patients.
PURPOSE : This study aimed to establish a technique for the separation of exosomal proteins and confirm the possibility of using the exosomal proteins, including CEACAM6 and CD56 as biomarkers in lung cancer.
MATERIALS AND METHODS : Non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines, A549 and H23, and small cell lung cancer (SCLC) cell lines, NCI-H209 and NCI-H417, were used in this study. L-132 was used as normal lung cell line control. The expression of the lung cancer markers (CEACAM6, CD56, and TTF-1), exosomal markers (CD81 and CD63), and calnexin was analyzed in each of the cell line using western blotting, flow cytometry, and immunocytochemistry. Exosomes were extracted from the NSCLC and SCLC cell lines using Exoquick-TC. They were then processed and their morphology was assessed using transmission electron microscopy (TEM). The concentration and size of the exosomes were measured using nanoparticle tracking analysis (NTA). The exosomes were then quantified using the bicinchoninic acid assay (BCA). The expression of the lung cancer markers (CEACAM6, CD56, and TTF-1), exosomal markers (CD81 and CD63), and calnexin were confirmed in the exosomal content using western blotting.
RESULTS : Among the NSCLC cell lines, CEACAM6 was expressed in A549, but not in H23. In the SCLC cell lines, CD56 protein was expressed in both NCI-H209 and NCI-H417. TTF-1 was expressed in H23 and NCI-H209 cell lines. The exosomal markers (CD81 and CD63) and calnexin were expressed in all four lung cancer cell lines. Exosomes were isolated from each cell line and morphologically confirmed by TEM. The exosomes appeared to be 30-50 nm in size and were enclosed in a lipid bilayer. Using NTA, the concentration of the exosomes was determined to be 5.88 x 109/mL, and the size was approximately 40-200 nm. The expression of CD81 and CD63 was confirmed in the exosomes isolated from each cell line, however, expression of calnexin was not detected. The expression patterns of CEACAM6 and CD56 were consistent with that of the parental cell lines.
CONCLUSION : Exosomes were isolated from lung cancer cell lines and protein markers of lung cancer such as CEACAM6 and CD56 were detected in the exosomes. Therefore, exosomal proteins could be valuable biomarkers in lung cancer patients.
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