대장암 exosome의 biomarker 분석을 위한 DNA barcode 기반 측방 유동 시스템 개발 DNA barcode-based lateral flow system for biomarker analysis of colorectal cancer exosome원문보기
현장 진료를 위해 최소한의 장비를 필요로 하는 측면 유동 분석(LFA)이 많은 주목을 받고 있다. 이에 따라 LFA 제조에 소요되는 시간과 비용을 절감하고자 하는 요구가 증가하고 있다. 본 연구는 장비가 필요 없는 LFA에 대한 염 매개 핵산 고정화(SAIoN)의 방법을 소개한다. Biotin-streptavidin, UV 조사 및 열처리와 같은 일반적인 DNA 고정화 방법과 비교하여 우리의 방법은 특별한 장비(예: ...
현장 진료를 위해 최소한의 장비를 필요로 하는 측면 유동 분석(LFA)이 많은 주목을 받고 있다. 이에 따라 LFA 제조에 소요되는 시간과 비용을 절감하고자 하는 요구가 증가하고 있다. 본 연구는 장비가 필요 없는 LFA에 대한 염 매개 핵산 고정화(SAIoN)의 방법을 소개한다. Biotin-streptavidin, UV 조사 및 열처리와 같은 일반적인 DNA 고정화 방법과 비교하여 우리의 방법은 특별한 장비(예: 원심분리기, UV-가교제, 가열 장치)를 필요로 하지 않는다. 따라서 생산 비용이 절감되면서 자원이 제한된 환경에도 적용할 수 있다. SAIoNs를 통해 고정화 과정은 간소화되어 30분 이내에 완료되었다. 또한 우리는 DNA barcode 기반 측방 유동 시스템과 SAIoN을 활용하여 생물학적 유체에서 순환하는 exosome의 biomarker 분석을 기반으로 대장암(Colorectal cancer, CRC)의 정확하고 비침습적인 진단을 위한 새로운 방법을 제안한다. 우리의 기술은 DNA barcode 기반 측방 유동 시스템과 stem-loop primer를 사용한 역전사 반응을 결합했다. 표적 엑소좀 miRNA가 있을 때만 비색 신호가 생성되어 사용자 수준에서도 육안으로 쉽게 확인할 수 있다. 제안된 시스템은 CRC exosome에서 과발현되는 miR-92a 및 miR-141을 성공적으로 검출하였다. 또한 CRC 환자의 혈장 샘플에 적용했을 때, 우리 시스템은 하나의 strip에서 여러 마커를 동시에 감지했다. 이러한 biomarker를 결합함으로써 우리는 각각 95.24% 및 100.0%의 민감도 및 특이도로 높은 분석 성능을 달성하여 제안된 시스템이 exosomal miRNA 검출을 위한 간단한 진단 플랫폼이 될 수 있음을 시사한다.
현장 진료를 위해 최소한의 장비를 필요로 하는 측면 유동 분석(LFA)이 많은 주목을 받고 있다. 이에 따라 LFA 제조에 소요되는 시간과 비용을 절감하고자 하는 요구가 증가하고 있다. 본 연구는 장비가 필요 없는 LFA에 대한 염 매개 핵산 고정화(SAIoN)의 방법을 소개한다. Biotin-streptavidin, UV 조사 및 열처리와 같은 일반적인 DNA 고정화 방법과 비교하여 우리의 방법은 특별한 장비(예: 원심분리기, UV-가교제, 가열 장치)를 필요로 하지 않는다. 따라서 생산 비용이 절감되면서 자원이 제한된 환경에도 적용할 수 있다. SAIoNs를 통해 고정화 과정은 간소화되어 30분 이내에 완료되었다. 또한 우리는 DNA barcode 기반 측방 유동 시스템과 SAIoN을 활용하여 생물학적 유체에서 순환하는 exosome의 biomarker 분석을 기반으로 대장암(Colorectal cancer, CRC)의 정확하고 비침습적인 진단을 위한 새로운 방법을 제안한다. 우리의 기술은 DNA barcode 기반 측방 유동 시스템과 stem-loop primer를 사용한 역전사 반응을 결합했다. 표적 엑소좀 miRNA가 있을 때만 비색 신호가 생성되어 사용자 수준에서도 육안으로 쉽게 확인할 수 있다. 제안된 시스템은 CRC exosome에서 과발현되는 miR-92a 및 miR-141을 성공적으로 검출하였다. 또한 CRC 환자의 혈장 샘플에 적용했을 때, 우리 시스템은 하나의 strip에서 여러 마커를 동시에 감지했다. 이러한 biomarker를 결합함으로써 우리는 각각 95.24% 및 100.0%의 민감도 및 특이도로 높은 분석 성능을 달성하여 제안된 시스템이 exosomal miRNA 검출을 위한 간단한 진단 플랫폼이 될 수 있음을 시사한다.
Lateral flow assays (LFAs), which require minimal equipment for point-of-care, are garnering much attention. Accordingly, there is an increasing demand to reduce the time and cost required for manufacturing LFAs. The current study introduces an equipment-free method of salt-mediated immobilization o...
Lateral flow assays (LFAs), which require minimal equipment for point-of-care, are garnering much attention. Accordingly, there is an increasing demand to reduce the time and cost required for manufacturing LFAs. The current study introduces an equipment-free method of salt-mediated immobilization of nucleic acids (SAIoNs) for LFAs. Compared to general DNA immobilization methods such as streptavidin–biotin, UV-irradiation, and heat treatment, our method does not require special equipment (e.g., centrifuge, UV-crosslinker, heating device); therefore, it can be applied in a resource-limited environment with reduced production costs. The immobilization process was streamlined and completed within 30 min. Herein, we propose a novel method for the accurate and non-invasive diagnosis of CRC based on the analysis of exosomes that are circulating in biological fluids utilizing DNA barcode-based nucleic acid lateral flow assays (NALFA) with SAIoNs. Our technology combines reverse transcription using a stem-loop primer with DNA barcode-based NALFA. A colorimetric signal is generated only in the presence of the target exosomal miRNA, which can be determined even with the naked eye. The proposed system successfully detected miR-92a and miR-141, which are overexpressed in CRC exosomes. Moreover, when applied to plasma samples from CRC patients, our system simultaneously detected multiple markers in one strip. By combining these markers, we achieved high analytical performance with a sensitivity and specificity of 95.24% and 100.0%, respectively, demonstrating that the proposed assay can be a simple diagnostic platform for the detection of exosomal miRNA.
Lateral flow assays (LFAs), which require minimal equipment for point-of-care, are garnering much attention. Accordingly, there is an increasing demand to reduce the time and cost required for manufacturing LFAs. The current study introduces an equipment-free method of salt-mediated immobilization of nucleic acids (SAIoNs) for LFAs. Compared to general DNA immobilization methods such as streptavidin–biotin, UV-irradiation, and heat treatment, our method does not require special equipment (e.g., centrifuge, UV-crosslinker, heating device); therefore, it can be applied in a resource-limited environment with reduced production costs. The immobilization process was streamlined and completed within 30 min. Herein, we propose a novel method for the accurate and non-invasive diagnosis of CRC based on the analysis of exosomes that are circulating in biological fluids utilizing DNA barcode-based nucleic acid lateral flow assays (NALFA) with SAIoNs. Our technology combines reverse transcription using a stem-loop primer with DNA barcode-based NALFA. A colorimetric signal is generated only in the presence of the target exosomal miRNA, which can be determined even with the naked eye. The proposed system successfully detected miR-92a and miR-141, which are overexpressed in CRC exosomes. Moreover, when applied to plasma samples from CRC patients, our system simultaneously detected multiple markers in one strip. By combining these markers, we achieved high analytical performance with a sensitivity and specificity of 95.24% and 100.0%, respectively, demonstrating that the proposed assay can be a simple diagnostic platform for the detection of exosomal miRNA.
주제어
#DNA immobilization Lateral flow assay Exosome Colorectal cancer miRNA Protein
학위논문 정보
저자
박정수
학위수여기관
건국대학교 대학원
학위구분
국내석사
학과
생물공학과
지도교수
박기수
발행연도
2022
총페이지
54
키워드
DNA immobilization Lateral flow assay Exosome Colorectal cancer miRNA Protein
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.