중합효소 연쇄반응(PCR)은 진단과 분자생물학에서 가장 일반적으로 사용되는 방법 중 하나이다. 그러나 DNA 오염은 잘못된 결과를 초래할 수 있다. 이것은 특히 유전자 변형 유기체(GMO) 모니터링에서 주요한 문제를 제기한다. 우리는 시판 중인 16개의 Taq DNA 중합효소 시약에서 DNA 오염을 조사했습니다. 많은 Taq DNA 중합효소 시약들이 16S rRNA 유전자와 ...
중합효소 연쇄반응(PCR)은 진단과 분자생물학에서 가장 일반적으로 사용되는 방법 중 하나이다. 그러나 DNA 오염은 잘못된 결과를 초래할 수 있다. 이것은 특히 유전자 변형 유기체(GMO) 모니터링에서 주요한 문제를 제기한다. 우리는 시판 중인 16개의 Taq DNA 중합효소 시약에서 DNA 오염을 조사했습니다. 많은 Taq DNA 중합효소 시약들이 16S rRNA 유전자와 암피실린 내성 유전자(Bla)로 오염되었다. 우리는 UV, γ선, 전자선 조사뿐만 아니라 나일론 막, gel/PCR 청소 컬럼, FTA card 처리를 사용하여 Taq DNA 중합효소 시약의 오염 제거를 시도했습니다. gel/PCR 클린업 컬럼과 UV 조사는 Taq DNA 중합효소의 활성을 감소시켰다. 다양한 파장의 γ-선과 전자선 조사는 오염 제거 효과가 없었다. 그러나 3개의 나일론 막 디스크로 24시간 동안 처리한 결과 DNA 오염이 제거되었다. 막과 같은 기능을 가진 FTA card 처리도 오염을 제거했지만 효소 활성이 감소했다. 그 후, 우리는 나일론 막 처리 Taq DNA 중합효소 시약이 유전자 변형 대장균에서 블라와 NPTI 유전자를 검출하는 데 사용될 수 있다는 것을 확인했다. 이 결과는 향후 GMO 모니터링에 유용할 것이다.
중합효소 연쇄반응(PCR)은 진단과 분자생물학에서 가장 일반적으로 사용되는 방법 중 하나이다. 그러나 DNA 오염은 잘못된 결과를 초래할 수 있다. 이것은 특히 유전자 변형 유기체(GMO) 모니터링에서 주요한 문제를 제기한다. 우리는 시판 중인 16개의 Taq DNA 중합효소 시약에서 DNA 오염을 조사했습니다. 많은 Taq DNA 중합효소 시약들이 16S rRNA 유전자와 암피실린 내성 유전자(Bla)로 오염되었다. 우리는 UV, γ선, 전자선 조사뿐만 아니라 나일론 막, gel/PCR 청소 컬럼, FTA card 처리를 사용하여 Taq DNA 중합효소 시약의 오염 제거를 시도했습니다. gel/PCR 클린업 컬럼과 UV 조사는 Taq DNA 중합효소의 활성을 감소시켰다. 다양한 파장의 γ-선과 전자선 조사는 오염 제거 효과가 없었다. 그러나 3개의 나일론 막 디스크로 24시간 동안 처리한 결과 DNA 오염이 제거되었다. 막과 같은 기능을 가진 FTA card 처리도 오염을 제거했지만 효소 활성이 감소했다. 그 후, 우리는 나일론 막 처리 Taq DNA 중합효소 시약이 유전자 변형 대장균에서 블라와 NPTI 유전자를 검출하는 데 사용될 수 있다는 것을 확인했다. 이 결과는 향후 GMO 모니터링에 유용할 것이다.
Polymerase chain reaction (PCR) is one of the most commonly used diagnostic and molecular biology methods. However, PCR is known to be subject to potential DNA contamination, which can lead to incorrect results. This poses a major problem, especially in genetically modified organisms (GMOs) monitori...
Polymerase chain reaction (PCR) is one of the most commonly used diagnostic and molecular biology methods. However, PCR is known to be subject to potential DNA contamination, which can lead to incorrect results. This poses a major problem, especially in genetically modified organisms (GMOs) monitoring. We investigated DNA contamination in 16 commercial Taq DNA polymerase reagents and found that most reagents were contaminated with the 16S rRNA gene and an ampicillin resistance gene (bla). We attempted to decontaminate Taq DNA polymerase reagents using UV, γ-ray, and electron-ray irradiation as well as nylon membrane, gel/PCR clean up column, and FTA card treatments. gel/PCR clean up column and UV irradiation reduced Taq DNA polymerase activity. Various wavelengths of γ-ray and electron-ray irradiation had no decontamination effect. A treatment protocol using three nylon membrane disks for 24 h removed DNA contamination. FTA card treatment, which has membrane-like functions, also removed contamination but decreased enzyme activity. Then, we confirmed that nylon membrane–treated Taq DNA polymerase reagent could be used to detect bla and NPTII genes in genetically modified E. coli. These results will be useful for monitoring GMOs in the future.
Polymerase chain reaction (PCR) is one of the most commonly used diagnostic and molecular biology methods. However, PCR is known to be subject to potential DNA contamination, which can lead to incorrect results. This poses a major problem, especially in genetically modified organisms (GMOs) monitoring. We investigated DNA contamination in 16 commercial Taq DNA polymerase reagents and found that most reagents were contaminated with the 16S rRNA gene and an ampicillin resistance gene (bla). We attempted to decontaminate Taq DNA polymerase reagents using UV, γ-ray, and electron-ray irradiation as well as nylon membrane, gel/PCR clean up column, and FTA card treatments. gel/PCR clean up column and UV irradiation reduced Taq DNA polymerase activity. Various wavelengths of γ-ray and electron-ray irradiation had no decontamination effect. A treatment protocol using three nylon membrane disks for 24 h removed DNA contamination. FTA card treatment, which has membrane-like functions, also removed contamination but decreased enzyme activity. Then, we confirmed that nylon membrane–treated Taq DNA polymerase reagent could be used to detect bla and NPTII genes in genetically modified E. coli. These results will be useful for monitoring GMOs in the future.
주제어
#화학공학 화학공학, 생명공학 Taq DNA 중합효소 나일론 막 감마선 전자 조사 nylon membrane gamma ray electron irradiation
학위논문 정보
저자
조사영
학위수여기관
전주대학교 일반대학원
학위구분
국내박사
학과
환경생명과학과
지도교수
이범규
발행연도
2022
총페이지
xi, 117 p
키워드
화학공학 화학공학, 생명공학 Taq DNA 중합효소 나일론 막 감마선 전자 조사 nylon membrane gamma ray electron irradiation
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