본 연구에서는 단백질의 검사 방법 중 Biuret 용액을 이용한 검사를 분광학적 방법으로 정량 분석 하였으며, 물질의 자외선 및 가시광선의 전자기파의 흡수 농도와 흡광값의 선형을 나타내는 Beer-Lambert 법칙(A = -log T = log (P0/P) = abc = εbc)을 이용한 UV/Vis Spectrometor로 실험 하였다. 분석에 사용 된 시료는 Biuret solution(CuSO4, NaOH, C4H6O6, DW),1% Albumine bovine, 1 % Beef Extract Powder(BEP), 1 % Tryptic Soy Broth(...
본 연구에서는 단백질의 검사 방법 중 Biuret 용액을 이용한 검사를 분광학적 방법으로 정량 분석 하였으며, 물질의 자외선 및 가시광선의 전자기파의 흡수 농도와 흡광값의 선형을 나타내는 Beer-Lambert 법칙(A = -log T = log (P0/P) = abc = εbc)을 이용한 UV/Vis Spectrometor로 실험 하였다. 분석에 사용 된 시료는 Biuret solution(CuSO4, NaOH, C4H6O6, DW),1% Albumine bovine, 1 % Beef Extract Powder(BEP), 1 % Tryptic Soy Broth(TSB), 1 % Yeast Extract를 사용 하여 순차적으로 용량을 증가시켜 실험을 진행 하였다. NaOH 와 CuSO4 결합 시 나타나는 침전 현상을 해결하기 위해 Tartaric acid(C4H6O6) 을 사용 하여 침전을 막아주고 비교 실험을 하기 위하여 Albumin bovine 뿐만 아니라 Beef Extract Powder, Tryptic Soy Broth, Yeast Extract를 비교로 사용하였다. 분광학적 정량 분석을 하기 위해 10% NaOH 100 ml 와 1.5 % 혼합액(0.3 g CuSO4 + 1.2 g C4H6O6 )100 ml를 mixed 하여 Biuret solution 200 ml 를 만들고 1 % Protein(Albumin bovine, Beef Extract Powder, Tryptic Soy Broth, Yeast Extract)를 희석, 조제 하였으며 실험을 위해 Biuret solution 3 ml + 1 % Protein(200 ul, 400 ul, 600 ul, 800 ul, 1000 ul)+ DW = 11 ml 를 mixed 하고 50분간 안정화를 하였다. 안정화를 진행 한 뒤 UV/Vis spectrometer(Agilent Technologies사의 Agilent8453)를 사용하여 DW blank를 잡고 단계적 농도 별 분광 분석을 진행 하였다. 희석한 protein 1 % 용액을 단계적으로 첨가하였을 때는 Wavelength(파장) 농도가 낮은 경우는 575 nm ~ 623 nm 에서 나왔으며 농도가 점차 증가 할수록 548 nm ~ 580 nm에서 나왔다. Absorbance(흡광도)는 농도가 증가할수록 점차 적으로 증가 하였으며 Graph를 그려 보았을 때 점차 우 상향 하는 경향을 보였으나 대상 별 protein 함량에 따라 Graph의 각도가 Albumin bovine = 2.2, Beef Extract Powder = 7.8, Tryptic Soy Broth = 4.9, Yeast Extract = 5.5 로 다르게 나왔다.
결과를 토대로 1.5 % CuSO4 + C4H6O6 를 함유한 Biuret solution 3 ml 의 이상적인 한계치는 1 % Albumin bovine 1 ml 라는 것을 알게 되었으며 Albumin bovine 보다 protein 함량이 적은 Beef Extract Powder, Tryptic Soy Broth, Yeast Extract 는 한계치가 더욱 낮을 것으로 결과 알 수 있었다. 또한, Biuret test의 분광학적 정량분석을 통해 용량 및 대상 별 한계치를 알 수 있게 되었다.
본 연구에서는 단백질의 검사 방법 중 Biuret 용액을 이용한 검사를 분광학적 방법으로 정량 분석 하였으며, 물질의 자외선 및 가시광선의 전자기파의 흡수 농도와 흡광값의 선형을 나타내는 Beer-Lambert 법칙(A = -log T = log (P0/P) = abc = εbc)을 이용한 UV/Vis Spectrometor로 실험 하였다. 분석에 사용 된 시료는 Biuret solution(CuSO4, NaOH, C4H6O6, DW),1% Albumine bovine, 1 % Beef Extract Powder(BEP), 1 % Tryptic Soy Broth(TSB), 1 % Yeast Extract를 사용 하여 순차적으로 용량을 증가시켜 실험을 진행 하였다. NaOH 와 CuSO4 결합 시 나타나는 침전 현상을 해결하기 위해 Tartaric acid(C4H6O6) 을 사용 하여 침전을 막아주고 비교 실험을 하기 위하여 Albumin bovine 뿐만 아니라 Beef Extract Powder, Tryptic Soy Broth, Yeast Extract를 비교로 사용하였다. 분광학적 정량 분석을 하기 위해 10% NaOH 100 ml 와 1.5 % 혼합액(0.3 g CuSO4 + 1.2 g C4H6O6 )100 ml를 mixed 하여 Biuret solution 200 ml 를 만들고 1 % Protein(Albumin bovine, Beef Extract Powder, Tryptic Soy Broth, Yeast Extract)를 희석, 조제 하였으며 실험을 위해 Biuret solution 3 ml + 1 % Protein(200 ul, 400 ul, 600 ul, 800 ul, 1000 ul)+ DW = 11 ml 를 mixed 하고 50분간 안정화를 하였다. 안정화를 진행 한 뒤 UV/Vis spectrometer(Agilent Technologies사의 Agilent8453)를 사용하여 DW blank를 잡고 단계적 농도 별 분광 분석을 진행 하였다. 희석한 protein 1 % 용액을 단계적으로 첨가하였을 때는 Wavelength(파장) 농도가 낮은 경우는 575 nm ~ 623 nm 에서 나왔으며 농도가 점차 증가 할수록 548 nm ~ 580 nm에서 나왔다. Absorbance(흡광도)는 농도가 증가할수록 점차 적으로 증가 하였으며 Graph를 그려 보았을 때 점차 우 상향 하는 경향을 보였으나 대상 별 protein 함량에 따라 Graph의 각도가 Albumin bovine = 2.2, Beef Extract Powder = 7.8, Tryptic Soy Broth = 4.9, Yeast Extract = 5.5 로 다르게 나왔다.
결과를 토대로 1.5 % CuSO4 + C4H6O6 를 함유한 Biuret solution 3 ml 의 이상적인 한계치는 1 % Albumin bovine 1 ml 라는 것을 알게 되었으며 Albumin bovine 보다 protein 함량이 적은 Beef Extract Powder, Tryptic Soy Broth, Yeast Extract 는 한계치가 더욱 낮을 것으로 결과 알 수 있었다. 또한, Biuret test의 분광학적 정량분석을 통해 용량 및 대상 별 한계치를 알 수 있게 되었다.
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