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Endolysin은 Bacteriophage의 lytic life cycle에서 마지막 단계에 burst가 될 때, bacteria cell wall의 peptidoglycan을 분해하는 효소이다. 본 연구에서는 Escherichia coli를 감염하는 세 가지 다른 bacteriophage인 10-24(13), PBEC30, PBEC56으로부터 endolysin 서열을 찾아냈다. Gram- negative bacteria의 경우, cell wall 외부에 outer membrane (OM)의 존재로 인해 정제한 recombinant endolysin이 외부에서 peptidoglycan으로 도달하기 어렵다. 세 가지의 endolysin은 C-terminal에 outer membrane degradation에 도움을 준다고 알려진 amphipathic helix구조를 가지고 있는 것을 확인하였다. 또한 각각의 endolysin에 세 개의 Gly-Ser 반복된 linker를 통해 antimicrobial peptide(...

Endolysin은 Bacteriophage의 lytic life cycle에서 마지막 단계에 burst가 될 때, bacteria cell wall의 peptidoglycan을 분해하는 효소이다. 본 연구에서는 Escherichia coli를 감염하는 세 가지 다른 bacteriophage인 10-24(13), PBEC30, PBEC56으로부터 endolysin 서열을 찾아냈다. Gram- negative bacteria의 경우, cell wall 외부에 outer membrane (OM)의 존재로 인해 정제한 recombinant endolysin이 외부에서 peptidoglycan으로 도달하기 어렵다. 세 가지의 endolysin은 C-terminal에 outer membrane degradation에 도움을 준다고 알려진 amphipathic helix구조를 가지고 있는 것을 확인하였다. 또한 각각의 endolysin에 세 개의 Gly-Ser 반복된 linker를 통해 antimicrobial peptide(AMP)인 cecropin-A를 N-terminal에 fusion해주어 더 나은 활성을 가진 endolysin을 제작하였다. 각 endolysin은 hexahitidine-tag fusion된 형태로 발현, 정제하였다. 정제된 endolysin은 ESKAPE pathogen인 Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, and Klebsiella pneumonia 등 다양한 그람 음성균에 효과적인 antibacterial activity를 나타내었다. Minimum inhibitory concentration(MIC) 값은 target bacteria에 따라 최소4μg/ml로 좋은 효율을 보였다. 세 가지 endolysin의 enzymatic activity는 5~10 범위의 pH에서 안정적이었다. 또한 온도 조건에서는 4℃에서 65℃까지 안정적이었다. 마지막으로 Gallaria melonella 감염 모델을 사용하여 세 가지의 endolysin의 in-vivo 효능을 입증하였다.