선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- ,1993), 임신 중에 섭취된 불소에 의한 태내 치아발육에 관한 연구는 전무한 상태이다. 이에 본 저자는 임신한 어미흰쥐에 투여된 불소가 흰쥐 태아의 법랑질 형성에 미치는 영향을 알아보고자 하였다.
제안 방법
- , 따라서, 생후 11일 되는 어린 흰쥐 (20~25g)의 하악 절치를 대상으로 전자현미경을 이용하여 법랑 모세포의 생활주기로 알려진 (zone of presecretion), 분비대 (zone of secretion) 및 성숙대 (zone of maturation)에서 법랑질의 표면구조의 변화를 관찰하였고, 분비대와 성숙대의 법랑질에서 법랑 단백질을 추출한 후 전기영동하여 법랑질 형성시 분비되는 단백질인 amelogenin과 enamelin의 양적인 변화를 확인하였다
- 이후 출생 11일째 되는 어린 흰쥐를 대조군과 세 그룹의 실험군으로 나누어 형태학적분석에 사용하였다. 그리고 단백질분석에는 대조군과 두 그룹의 실험군으로 나누어 실험하였다. 대조군 어미흰쥐에게 임신 직후부터 출생 11일째 되는 어린 흰쥐를 희생하는 날까지 증류수를 공급하였고, 실험군은 어미흰쥐에 100 ppm, 200 ppm 및 300 ppm의 각기 다른 농도의 불소용액을 식수로 제공한 후, 출생 후부터 11일 되는 날까지는 증류수를 공급하여 체중 20~25 g 내외의 어린 흰쥐를 희생하여 실험에 사용하였다.
- 하악 절치를 발치하여 법랑기와 치수를 기계적으로 제거하고 법랑질 표면을 노출시킨 뒤, 식염수로 적신 거즈로 조심스럽게 세포 잔여물과 혈액을 깨끗이 제거하였다. 그리고 면도칼을 이용하여 경도가 아직 높지 않은 분비기법랑질과 경도가 충분히 높은 성숙기 법랑질을 구분하여 각각을 모은 후 냉동건조 시켰다. 이후 건조된 법랑질을 막자사발에서 액체질소를 넣으면서 미세한 분말로 만들어 -3(TC에 보관하여 실험에 사용하였다.
- 그리고 단백질분석에는 대조군과 두 그룹의 실험군으로 나누어 실험하였다. 대조군 어미흰쥐에게 임신 직후부터 출생 11일째 되는 어린 흰쥐를 희생하는 날까지 증류수를 공급하였고, 실험군은 어미흰쥐에 100 ppm, 200 ppm 및 300 ppm의 각기 다른 농도의 불소용액을 식수로 제공한 후, 출생 후부터 11일 되는 날까지는 증류수를 공급하여 체중 20~25 g 내외의 어린 흰쥐를 희생하여 실험에 사용하였다.
- 불소 투여에 따른 법랑질 표면구조의 변화를 관찰하기 위하여 각 그룹의 어린 흰쥐를 ether로 마취시킨 후, 2.5% glutaraldehyde 용액 (0.1 M cacodylate buffer, pH 7.4)으로 좌심실을 통하여 관류 고정한 후, 하악을 절취하여 동일 용액에 1시간 30분 동안 전 고정하였다. 치아를 발치 한 후, 치 아에 붙어 있는 유기물들을 제거하기 위하여 3% sodium hypochloride에 넣고 초음파세척기에서 10분간 세척하였다.
- 임신시켰다. 이후 출생 11일째 되는 어린 흰쥐를 대조군과 세 그룹의 실험군으로 나누어 형태학적분석에 사용하였다. 그리고 단백질분석에는 대조군과 두 그룹의 실험군으로 나누어 실험하였다.
- 3)에서 15% polyacrylamide gel을 사용하여 15 mA의 constant current 로 약 4시간 동안 전기영동하였다. 전기영동후, Coo-massie Briliant Blue(CBB)로 염색하였고, 3.5% acetic acid를 포함하는 30% methanol을 사용하여 탈색 하였다.
- 이후 증류수로 수세하고 100% acetone에서 탈수하였다. 탈수가 끝난 시료를 임계점 건조기 (Bio-Rad, Microscience Division, England)로 건조하고 copper stub에 부착하여 Ion-Sputter Coater (Bio-Rad, Polaron Division, England)에서 gold-palladium루 20nm 두께로 피복한 후, 주사전자현미경 (JEOL 840A, Japan)으로 관찰하였다.
- 마취시킨 후 희생하였다. 하악 절치를 발치하여 법랑기와 치수를 기계적으로 제거하고 법랑질 표면을 노출시킨 뒤, 식염수로 적신 거즈로 조심스럽게 세포 잔여물과 혈액을 깨끗이 제거하였다. 그리고 면도칼을 이용하여 경도가 아직 높지 않은 분비기법랑질과 경도가 충분히 높은 성숙기 법랑질을 구분하여 각각을 모은 후 냉동건조 시켰다.
대상 데이터
- 동물실에서 사육한 체중 150~200g 내외의 Spra-gue-Dawley계 흰쥐 52마리를 선별하여 임신시켰다. 이후 출생 11일째 되는 어린 흰쥐를 대조군과 세 그룹의 실험군으로 나누어 형태학적분석에 사용하였다.
이론/모형
- Laemmli (1970)의 방법에 따라 0.1% SDS를 포함하는 0.1 M Tris-glycine buffer (pH 8.3)에서 15% polyacrylamide gel을 사용하여 15 mA의 constant current 로 약 4시간 동안 전기영동하였다. 전기영동후, Coo-massie Briliant Blue(CBB)로 염색하였고, 3.
- 동결건조된 분말형태의 법랑단백질에 20mM의 acetic acid 500 [1]를 넣 어 녹인 다음, bovine serum a]b-umin을 표준단백질로 하여 Bradford (1976)의 방법에 의해 측정하였다.
성능/효과
- 따라서 이러한 결과는 Susheela & Bhatnagar (1993) 이 보고한 결과와 유사하며 , Nordland & Lendskog(1986)의 보고와도 일치한다. 그러므로 본 실험 결과로 불소투여시 치아의 발육은 어미흰쥐 뿐만 아니라 흰쥐태아에게도 치아형성에 영향을 미치는 것으로 확인되었다.
- 4a, b). 그리고 300ppm 불소투여군의 경우는 다른 실험군에 비해 전체적으로 많은 구조적 변화를 보여주었는데, 심한 구조적 손상을 나타내는 소와가 관찰되었고, 산재된 crystal로 덮여있는 부위에서는 법랑질 형성부전이 나타났다. 또한 법랑질 형성부전 부위에서는 간상의 결정 (rodlike crystal) 들이관찰되 었다(Figs.
- 분비법랑질에서는 대조군, 100ppm 및 200ppm 불소투여군 모두에서 분자량 22~ 24kDa의 amelogenin band가 분리되었다. 그리고 성숙법랑질에서는 세 그룹 모두에서 분자량 68kDa의 enamelin band가 , 분리됨을 확인할 수 있었다(Fig. 1).
- 대조군과 100 ppm 및 200 ppm 불소투여군으로 나누고 이를 다시 분비법랑질과 성숙법랑질로 구분하여 실험한 결과, 2개의 주요 단백질 band가 분리되었다. 분비법랑질에서는 대조군, 100ppm 및 200ppm 불소투여군 모두에서 분자량 22~ 24kDa의 amelogenin band가 분리되었다.
- 본 실험에서 성숙기 법랑질에서는 불소를 투여하였을 때 대조군과 비교하여 많은 양의 enamelin 이 확인되 었고, 농도가 높아짐 에 따라 enamelin도 증가하는 것으로 나타났다. 따라서, 불소 농도가 증가함에 따라 법랑모세포의 amelogenin 제거능력 이 저하됨으로써, enamelin의 양이 증가 한 것으로 보여진다.
- 또한, DenBesten & Crenshaw (1984) 는 고농도의 불소를 투여한 흰쥐의 분비기 법랑질에서는 법랑단백질이 대조군에 비해 적은 양이 관찰되었다고 보고하였다. 본 실험에서 단백질을 정량 분석한 결과 분비기의 주요 단백질은 amelogenin으로 확인되었으며, , 분비기 법랑질에서는 대조군에서 법랑단백질(amelogenin)의 양이 가장 많았고, 불소 농도가 높아질수록 그 양은 점차로 감소되는 것으로 확인되었다. 이 결과는 임신중에 불소를 섭취한 어미흰쥐로부터 태아의 법랑 모세포에 병적 현상을 초래하여 법랑모세포가 법랑단백질 형성에 장애를 받았기 때문으로 생각된다.
- Angmar -Mansson & Whitford (1984)는 후기 보다 초기 성숙법랑질에서 다량의 amelogenin이 존재한다고 하였으며, 후기 성숙법랑질에 농도별로 불소를 투여했을 때 100 ppm에서만 amelogenin 이 존재하는 것으로 보고하였다. 본 실험에서 성숙기 법랑질에서는 불소를 투여하였을 때 대조군과 비교하여 많은 양의 enamelin 이 확인되 었고, 농도가 높아짐 에 따라 enamelin도 증가하는 것으로 나타났다. 따라서, 불소 농도가 증가함에 따라 법랑모세포의 amelogenin 제거능력 이 저하됨으로써, enamelin의 양이 증가 한 것으로 보여진다.
- 본 연구에서 임신한 어미흰쥐에 100ppm, 200 ppm 및 300ppm의 불소를 음용시킨 후 절치의 표면을 주사전자현미경으로 관찰한 결과, 대조군에서는 매우 평탄하고 매끄러운 표면 이 관찰되 었고, 불소 투여군에서는 과립 침적물로 덮여있는 불규칙하고 매우 거친 표면구조가 관찰되었으며, 불소 농도가 높을수록 더 심한 거친 표면구조들이 증가하였다. 그리고 일부 균열과 열구된 표면에서 낭종상의 결절이 확인되었는데,이러한 낭종상은 치배발생에서 형성될 수 있으며, 일부의 경우 법랑기질 형성을 억제할 수 있다고 보고되었다(Susheela & Bhatnagar, 1993).
- 즉 대조군에 비해 불소투여 농도가 높아질수록 단백질의 양이 감소하였다. 성숙법랑질에서 추출된 단백질의 양은 대조군에서 2.723 mg, 100 ppm 불소투여군에서 5.391 mg, 200 ppm 불소투여군에서 6.201 mg으로 나타났는데 , 대조군에서 단백질 양이 가장 적었고, 100 ppm 및 200 ppm 불소투여군으로 불소농도가 높아질수록 단백질 양이 증가한 것으로 확인되었다(Table 1).
- 698 mg이었다. 즉 대조군에 비해 불소투여 농도가 높아질수록 단백질의 양이 감소하였다. 성숙법랑질에서 추출된 단백질의 양은 대조군에서 2.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.