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문제 정의
- 한편 급성 통증에서 저빈도의 침자극이 opioid peptide를 매개로 하여 진통작용을 나타낸다는 보고翌23)와, 통증의 부위와의 관계에서 분절적 침자극은 nonopiate 매개로, 비분절적 침자극은 opiate 매개로 통증이 조절된다는 보고들이 있었다加. 따라서 본 실험 모델에서의 기계적 이질통에 대한 침효과와 급성 통증에 대한 침자극의 통증 조절의 기전들이 만성적인 기계적 이질통에 대한 침자극 효과에도 관련될 수 있는가를 살펴보기 위하여 본 연구를 하게 되었다. 본 실험은 이와 같은 목적으로, 쥐꼬리 위에 von Frey hair를 이용하여 기계적 자극을 하기에 편리한 모델 5)을 이용하여, 서로 다른 분절에 속하는 후계 (SI 3), 족삼리(ST 36), 방광수(BL 28)에 저빈도의 동일한 자극조건으로 전침자극하여 기계적 이질 통에 대한 효과를 관찰하여 유의한 결과를 얻었으므로 보고하는 바이다.
- 따라서 본 실험 모델에서의 기계적 이질통에 대한 침효과와 급성 통증에 대한 침자극의 통증 조절의 기전들이 만성적인 기계적 이질통에 대한 침자극 효과에도 관련될 수 있는가를 살펴보기 위하여 본 연구를 하게 되었다. 본 실험은 이와 같은 목적으로, 쥐꼬리 위에 von Frey hair를 이용하여 기계적 자극을 하기에 편리한 모델 5)을 이용하여, 서로 다른 분절에 속하는 후계 (SI 3), 족삼리(ST 36), 방광수(BL 28)에 저빈도의 동일한 자극조건으로 전침자극하여 기계적 이질 통에 대한 효과를 관찰하여 유의한 결과를 얻었으므로 보고하는 바이다.
가설 설정
- 2), 또한 M- alan 등细의 연구에서 보여 준 것처럼 다른 분절인 쥐의 뒷발에도 von Frey hair에 반응이 있었다. 본연구에서는 미도피의 빈도수가 높고 실험과정 중 .처음 표시한 부위의 변화가 수술 후 3주 이후부터 적어지는 양상을 보였으므로, .
제안 방법
- 수술 후 1, 4, 7, 14 및 21일에 쥐꼬리 피부 위에 von Frey hair(2g)3. 10~20초 간격으로 10회 자극하여 기계적 이질통의 발전 양상을 확인하였다. 이후 3~6주가 된 쥐들 중에서 미도피 빈도가 9- 10회 되는 쥐들(n=24)을 이용하여, 경혈부인 후계 (SI 3), 족삼리(ST 36) 및 방광수(BL 28)를 전침자극하였다.
-
(1) 대조군
대조군(control, n=6)은 수술 후 3~6주가 된 쥐들 중에서, von Frey hair(2g)로 꼬리 위에 1 0~20초 간격으로 10회 자극하여 미도피 빈도가 9~10회가 되는 쥐를 이용하였다
. 침자극을 하지 않고 홀더에 쥐가 넣어져 있는 상태로 전침군과 동일한 시간에 따라 미도피의 회수를 측정하였다. - 방광수 전침자극군(P-EA, n=6)은 위의 쥐들을 이용하여 편측 방광수 부위에 7~10mm 정도 직자하고, 다른 전침자극군과 동일한 방법으로 실험을 진행하였다.
- 방광수 전침자극군(P-EA, n=6)은 편측 방광 수부 위에 2Hz, 0.07mA, 3ms, 구형파 자극을 30분간 실시하였다. 전침자극 전의 평균 96.
- 수술 후 3~6주가 된 쥐들 중에서, von Frey hair(2g)로 꼬리 위에 10~20초 간격으로 10회 자극하여 미도피 빈도가 9~10회 되는 쥐를 이용하여 3개의 군으로 나누었다.
- 수술 후, 기계적 이질통의 징후가 나타나는지를 확인하기 위하여, von Frey hair(2.0 gm ; 19.6 mN)를 사용하여, 정상적으로는 통증을 유발시키지않는 비유해한 기계적 자극을 쥐꼬리 위에 실시하였다. 침자극이나 von Frey hair로 자극하기 쉽게 하기 위하여 둥근 아크릴통(5.
- 쥐를 이홀더에 몸의 크기에 맞게 넣고 꼬리만 밖으로 빼넨후, 판 위에 올려놓았다. 이 상태로 10~20분 정도이 환경에 적응시킨 후, von Frey hair로 쥐의 꼬리 위를 가볍게 자극하여 꼬리 위에 기계적으로 민감한 부위를 찾아 표시를 하였다. 표시된 한 점 위에 Won Frey hair를 이용하여 쥐꼬리의 피부를 1 0~20초 간격으로 10회 반복하여 자극하였으며, 회수 반응이 많을수록 통증 반응이 큰 것으로 간주하였다.
- 10~20초 간격으로 10회 자극하여 기계적 이질통의 발전 양상을 확인하였다. 이후 3~6주가 된 쥐들 중에서 미도피 빈도가 9- 10회 되는 쥐들(n=24)을 이용하여, 경혈부인 후계 (SI 3), 족삼리(ST 36) 및 방광수(BL 28)를 전침자극하였다. 전침자극 조건은 빈도 2Hz, 강도 0.
- 07mA, 3ms, 구형파)을 30분간 실시하였다. 전침자극 전의 회수는 쥐를 선택할 때의 회수를 적용하였고, 이후 전침자극 시점으로부터 각각 15, 30, 45, 75분에 von Frey hair(2g) 로 회수검사를 시행하였다.
- 이후 3~6주가 된 쥐들 중에서 미도피 빈도가 9- 10회 되는 쥐들(n=24)을 이용하여, 경혈부인 후계 (SI 3), 족삼리(ST 36) 및 방광수(BL 28)를 전침자극하였다. 전침자극 조건은 빈도 2Hz, 강도 0.07mA로 주어졌으며, 기계적 이질통에 대한 전침자극 효과를 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 족삼리 전침자극군(Z-EA, n=6) 은 편측 족삼리부위에 2Hz, 0.07mA, 3ms, 구형파 자극을 30분간 실시하였다. 전침자극 전의 평균 95.
- 족삼리 전침자극군(Z-EA, n=6)은 위의 쥐들을 이용하여 편측 족삼리 부위에 7~ 10mm 정도 직자하고, 후계 전침자극군과 동일한 방법으로 실험을 진행하였다.
- 이 쥐들.중 9~10회의 미도피 빈도를 보이는 쥐를 이용하여 침 자극을 하였다. 본 실험의 자극조건에서는 방광수 전침자극과 기존에 급 .
- 쥐꼬리를 이용하는 신경병증성 모델을 만들기 위해 흰쥐의 복강 내로 pentobarbital sodium(40 ㎎/㎏)을 투여하여 마취시켰다. 마취된 쥐에서, 쥐의 꼬리에 분포하는 오른쪽 상미간 (superior caudal trunk)의, 제 3, 4천수신경 사이를 l~2mm 절단한 후에 봉합하여 모델을 완성하였다° (Fig 1).
- 되는 쥐를 이용하였다. 침자극을 하지 않고 홀더에 쥐가 넣어져 있는 상태로 전침군과 동일한 시간에 따라 미도피의 회수를 측정하였다.
- 이 상태로 10~20분 정도이 환경에 적응시킨 후, von Frey hair로 쥐의 꼬리 위를 가볍게 자극하여 꼬리 위에 기계적으로 민감한 부위를 찾아 표시를 하였다. 표시된 한 점 위에 Won Frey hair를 이용하여 쥐꼬리의 피부를 1 0~20초 간격으로 10회 반복하여 자극하였으며, 회수 반응이 많을수록 통증 반응이 큰 것으로 간주하였다. 0.
- 후계 전침자극군(H-EA, n=6)은 위의 쥐들을 이용하여 편측 후계 부위에 3~5mm 정도 직자하고 전침자극기 (Nihon Kohden) 를 이용하여 전기자극(2Hz, 0.07mA, 3ms, 구형파)을 30분간 실시하였다. 전침자극 전의 회수는 쥐를 선택할 때의 회수를 적용하였고, 이후 전침자극 시점으로부터 각각 15, 30, 45, 75분에 von Frey hair(2g) 로 회수검사를 시행하였다.
- 후계 전침자극군(H-EA, n=6)은 편측 후계 부위에 2Hz, 0.07mA, 3ms, 구형파 자극을 30분간 실시하였다. 전침자극 전의 평균 96.
대상 데이터
- 체중 200~300g의 Sprague-Dawley계 수컷 흰쥐를 이용하여, 고형사료(삼양유지, 소동물용)와 물을 충분히 공급하면서, 실험실 환경에 2주간 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 또한 실험실 온도는 2 4~26℃로 유지되었다.
- 침자극은 stainless steel 호침직경 0.25mm, 길이 30mm, 동방침구)을 사용하였고, 쥐를. 가두기위한 홀더 (holder) 와 쥐꼬리를 자극하기 위하여 von Frey hair(2.
- 6 mN)를 사용하여, 정상적으로는 통증을 유발시키지않는 비유해한 기계적 자극을 쥐꼬리 위에 실시하였다. 침자극이나 von Frey hair로 자극하기 쉽게 하기 위하여 둥근 아크릴통(5.3X15 혹은 6.0x18 cm)으로 만든 홀더 (holder)를 사용하였다. 쥐를 이홀더에 몸의 크기에 맞게 넣고 꼬리만 밖으로 빼넨후, 판 위에 올려놓았다.
데이터처리
- 4개의 군에서 시간에 따른 유의성을 검증하기 위해 반복측정분산(repeated ANOVA test)을 실시하였다. 전침자극 전은 각각의 군들에서 유의성이 없었으며, 전침자극 시점으로부터 15분, 30분, 45 분은 각각의 군들 사이에 유의성이 있었다 (P<0.
- 통계적 처리는 T-test와 repeated ANOVA test & LSD 를 실시하였다. 자료분석을 위한 통계프로그램은 SAS (version 6.10)을 이용하였으며, p-value 가 0.05 미만인 경우 의미 있는 것으로 판정하였다.
- 로 표시하였다. 통계적 처리는 T-test와 repeated ANOVA test & LSD 를 실시하였다. 자료분석을 위한 통계프로그램은 SAS (version 6.
이론/모형
- 기계적 이질통에 대한 전침자극의 효과를 연구하기 위하여 쥐꼬리를 지배하는 상미간의 중간을 손상시켜 제작된 신경병중성 통증 모델을 이용하였다. 수술 후 1, 4, 7, 14 및 21일에 쥐꼬리 피부 위에 von Frey hair(2g)3.
- 인체의 부위와 상응하는 후계 (SI 3), 족삼리 (ST 36), 방광수(BL 28)를 골도분촌법에 준하여 취혈하였다25.26).
성능/효과
- 1. 총 47마리의 본 모델에서 기계적 이질통이 유발되는 쥐는 45마리(95.7%)이고, 비유발 쥐는 2마리(4.3%)로 나타났다.
- 2. 기계적 이질통의 유발율은 수술 후 1일에 38.0±38.9%, 4일에 37.2±36.9%, 7일에 62.2± 35.9%, 14일에 67.8±34.8% 및 21일에 67.4± 34.2%로 2주까지는 시간의 경과에 따라 증가하였으나 이후는 큰 변화가 없었다.
- 3. 30분간의 후계 자극(2Hz, 0.07mA, 3ms, 구형파)에 의하여 미도피 반응률은 자극 시점으로부터 15분에 55.0±12.2%, 30분에 45.0±8.4%, 45 분에 75.0±12.2% 및 75분에 83.3±8.2%로 되어, 30분간의 자극 직후에 억제 효과가 높았다. 그러나족삼리와 방광수의 자극(2Hz, 0.
- 05). 또한 전침자극 시점으로부터 75분에도 유의성(P<0.05)이 있었으나, 최소유의차에 의한 다중비교(LSD)를 시행한 결과 유의수준 5%에서 후계 전침자극군(H-EA, n=6) 이 15분, 30분, 45분에 의미 있는 군으로 분류되었다(Fig. 6).
- 본 실험의 자극조건에서는 방광수 전침자극과 기존에 급 . 만성통증에 다용된 족삼리 전침자극이 본 실험 모델의 기계적 이질통에 대한 억제 효과를 나타내지 않았으나, 후계의 전침자극에서는 억제 효과가 있었다. 이런 결과는 첫째 후계혈이 신경통이나 신경학적 이상에 적용될 수 있는 독맥(GV) 과 연결되어 있다는 것26)과, 둘째로 저빈도의 침 자극은 opioid peptide를 매개로 하여 진통작용에 관여한다는 보고들222324, 29)과 유사하다.
- 본 연구은 쥐꼬리를 지배하는 상미간(superior caudal trunk) 의 중간을 손상시켜 제작된 모델에서 쥐꼬리 위에 비유해한 자극인 von Frey hair(2g)을 이용한 자극으로 기계적 이질통을 유발시켰으며, 이러한 기계적 이질통(allodynia)의 반응이 후계의 전침자극(2Hz, 0.07mA, 3ms, 사각파) 으로 감소된 것을 보여주었다. 또한 이러한 결과는 타 모델에서, 신경병증성 통증에 대한 침효과의 연구 결과들耳27)과 같은 선 상에 있는 것으로 볼 수 있다.
- 위와 같이 본 연구에서 쥐꼬리를 이용한 모델의 기계적 이질통에 후계의 전침자극이 억제 '효과가 있다는 결과를 보여 주었다. 이런 결과는 임상적으로 만성병과 관련된 기계적 이질통의 조절에도 전침치료가 유효하게 적용될 수 있을 것으로 사료된다.
- 2%에 비하여 유의성이 없었다. 전침자극 시점으로 부터 15분, 30분, 45분에 검사한 미도피 회수의 평균은 각각 55, 0+12.2%, 45.0±8.4%, 75.0±12.2%의 변화를 나타내어 대조군의 평균 ・98.3±4.1%, 96.7 + 5.2%, 91.7± 9.8%에 비하여 모두 유의성이 인정되었다 (p<0.05). 그러나 전침자극 시점으로부터 75분에 검사한 미도피 회수의 평균은 83.
- 전침자극 전은 각각의 군들에서 유의성이 없었으며, 전침자극 시점으로부터 15분, 30분, 45 분은 각각의 군들 사이에 유의성이 있었다 (P<0.05). 또한 전침자극 시점으로부터 75분에도 유의성(P<0.
후속연구
- 이런 결과는 임상적으로 만성병과 관련된 기계적 이질통의 조절에도 전침치료가 유효하게 적용될 수 있을 것으로 사료된다. 또한 최근에도 급성 통증에 대한 침효과의 연구에 흔히 활용되고 있는 유해자극에 대한 통증의 역치를 평가하는 tail flick latency (TFL) 방법을 이용한 실험처럼狗, 이 모델을 이용하여 신경병증성 통증에 대하여 전침자극의 효과에 대한 연구가 지속적으로 이루어질 수 있을 것으로 기대된다.
- 결과를 보여 주었다. 이런 결과는 임상적으로 만성병과 관련된 기계적 이질통의 조절에도 전침치료가 유효하게 적용될 수 있을 것으로 사료된다. 또한 최근에도 급성 통증에 대한 침효과의 연구에 흔히 활용되고 있는 유해자극에 대한 통증의 역치를 평가하는 tail flick latency (TFL) 방법을 이용한 실험처럼狗, 이 모델을 이용하여 신경병증성 통증에 대하여 전침자극의 효과에 대한 연구가 지속적으로 이루어질 수 있을 것으로 기대된다.
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