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문제 정의
- 본 연구는 주요 양식 대상어류인 넙치를 대상으로 구리에 대하여 직접적인 반응을 나타낼 것으로 판단되는 기관계를 대상으로 반응한계농도와 일련의 조직학적인 반응양상을 알아보고자 하였다
제안 방법
- 각 실험구의 어류는 매주 5개체씩 필요한 기관을 절취하여 파라핀 절편법에 의하여 4~6μm 두께의 연속 절편을 제작하였다. 표본은 Mayer' s hematoxylin-0.
- 실험용액은 구리(CuCl2, RdH-32284)를 이용하여 stock solution을 만든 다음 sodium citrate를 같은 비율로 첨가하여 설정 농도별로 제조하였다. 실험구는 구리를 첨가하지 않은 대조구와 예비실험 결과 영향농도를 기준으로 4개의 구리노출 농도구 (0.05, 0.08, 0.18, 0.32 mg/l)를 설정하여 각 실험구별로 넙치를 6주간 노출시켜 2회 반복 실험하였다.
- 제작하였다. 표본은 Mayer' s hematoxylin-0.5 % eosin (H-E) 비교염색, Mallory 삼중염색, AB-PAS (pH 2.5) 및 PAS 반응을 실시하였다. 조직학적 변화양상의 기재는 조사된 개체 가운데 50% 이상의 개체에서 나타나는 조직상을 기준으로 하였다.
대상 데이터
- 실험에는 외관상 질병의 증세가 나타나지 않은체장 17.5~ 19.2cm, 체중 76.2~84.3g의 건강한 개체를 사용하였다 이들은 4001 순환여과식 수조에서 10일 동안 수온, pH, 염분 및 용존 산소가 각각19.8 ~21.3 ℃, 7.8 ~8.3, 32.6 ~33.3%, 7.1~7.4mg/l인 조건에서 순치 시킨 개체들이다
- 따라 매일 교환하였다. 실험용액은 구리(CuCl2, RdH-32284)를 이용하여 stock solution을 만든 다음 sodium citrate를 같은 비율로 첨가하여 설정 농도별로 제조하였다. 실험구는 구리를 첨가하지 않은 대조구와 예비실험 결과 영향농도를 기준으로 4개의 구리노출 농도구 (0.
- 5) 및 PAS 반응을 실시하였다. 조직학적 변화양상의 기재는 조사된 개체 가운데 50% 이상의 개체에서 나타나는 조직상을 기준으로 하였다.
성능/효과
- 2, F and G). 0.05 mg/1/42d 농도구에서는 곤봉화를 나타내는 각 새판말단부가 서로 융합되어 있었으며 (Fig. 2, H), 0.18 mg/l/42d 농도구의 개체들에서는 새판의 융합, 변형 및 파괴가 관찰되어 아가미 고유의 기능이 소실된 것으로 판단되는 조직상이 나타났다 (Fig. 2,1).
- 3, A). 0.08 mg/l/7d 농도구에서는 담관 내강의 자유면이 ABPAS (pH 2.5)반응에서 청색을 나타냈으며 (Fig. 3, B), 0.08 mg/l/14d 농도구 개체들의 간조직에서는 모세혈관내의 혈구 증가와 흑색 대식세포들의 무 리가 관찰되었다 (Fig. 3,0.
- 3, E). 0.18 mg/l/21d 농도구에 서는 간조직의 모세혈관 팽창과 혈구의 증가가 나타났으며, 췌장조직에서는 효소원과립의 증가가 관찰되었다 (Fig. 3, F). 0.
- 3, F). 0.18 mg/l/35d 농도구와 0.32 mg/l/42d 농도구에서는 간세포의 활성과 전 단계에 비해 혈구의 수가 감소된 조직상이 관찰되었다 (Fig. 3,GandH).
- 08 mg/l/14d 농도구 개체들의 간조직에서는 모세혈관내의 혈구 증가와 흑색 대식세포들의 무 리가 관찰되었다 (Fig. 3,0.0.18 mg/l/14d 농도구 의 개체들에서는 일부 간세포의 핵응축과 간세포 세포질의 혼탁 현상, 담관 장막 주변의 흑색 대식 세포군의 응집 그리고 췌장의 효소원과립이 거의 소실된 조직상이 나타났으며 (Fig. 3, D), 0.32 mg/l/14d 농도구에서는 간세포의 세포질에서 과립변성이 관찰되었다 (Fig. 3, E). 0.
- 2,B). O.O8mg/2/14d 농도구에서는 새엽 상피세포들의 증식과 새판 모세혈관 내에서 혈구의 증가가 관찰 되었으며 (Fig. 2, C), 0.05 mg/l/21d 농도구에서는 새판 말단부에서 미약한 곤봉화와 함께 새판 상피 층의 비후가 관찰되었다. 그리고 AB-PAS (pH 2.
- 구리 노출 실험구 가운데 가장 낮은 0.05 mg/E 의 농도에서 7일 동안 노출된 개체들의 아가미 조직상 에서는 대조구와 비교해 볼 때 새엽 상피층에서 염 세포의 증가 및 활성화가 관찰되었다 (Fig.2,A). 그 후 0.
- 구리에 대한 넙치의 조직학적 반응을 알아보기 위하여 아가미, 간췌장 및 신장 조직상의 변화를 조사하였다 대조구에서는 5주 후 아가미에서 점액 세포와 염세포의 증가가 관찰되었다. 간췌장과 신 장에서는 혈구의 증가와 일부 흑색 대식세포들이 관찰되었다.
- 05 mg/l/21d 농도구에서는 새판 말단부에서 미약한 곤봉화와 함께 새판 상피 층의 비후가 관찰되었다. 그리고 AB-PAS (pH 2.5) 반응에서 상당수 점액세포들이 점액 성상이 중성에서 산성으로 전환되었음을 의미하는 alcianblue에 양 성 반응을 보여 청색으로 나타났다 (Fig. 2, D). 0.
- 본 연구에서는 조직학적인 측면에서 처음 반응양상이 관찰된 구리 농도구는 0.05mg/ㅣ/7d로 나타났는데, 이러한 값은 다른 방법을 이용했을 때는다소 다르게 나타날 것으로 생각된다. 이와 같은 결과는 구리에 대한 넙치의 반응한계농도에 대해서는 생존이나 성장 및 기타 대사적인 측면에서 보고된 예가 없으므로 비교하기는 곤란하지만.
- 1, D). 실험 개시 5주부터 대조구의 간조직에서는 모세혈관내에 혈구가 다소 증가되었으며, 일부 흑색 대식세포들이 관찰되었으나 췌장조직내의 효소원 과립의 변화는 관찰되지 않았다. 6주 후에는 간세포의 팽창이 관찰되었을 뿐 별다른 조직상의 변화는 관찰되지 않았다
- 1, B). 실험 개시기부터 4주까지는 별다른 특이한 조직상은 관찰되지 않았으며, 사육 5주부터 실험 종료까지는 점액세포와 염세포의 증가가 관찰되었다.
- 이처럼 기존의 보고와 본 연구에서 관찰된 전체적인 구조적 변화는 비특이적이라 할 수 있다. 하지만 아가미의 경우 초기반응 양상과 일련의 반응과정은 서로 뚜렷한 차이를 관찰할 수 있는데 이러한 차이는 외부 자극원에 대한 노출 조건과 실험 종의 차이에서 유래된 것으로 생각할 수 있을 것이다.
- 덮여 있으며. 점액세포와 염세포 그리고 벽 주세포 등으로 구성되어 있었다 점액세포와 염세포는 H-E 염색과 Mallory 삼중염색에서는 모두 공포 상으로 나타났지만 (Fig. 1, A), PAS 반응에서 점액세포는 양성의 결과를 보였고 염세포는 음성의 결과를 보였다 (Fig. 1, B). 실험 개시기부터 4주까지는 별다른 특이한 조직상은 관찰되지 않았으며, 사육 5주부터 실험 종료까지는 점액세포와 염세포의 증가가 관찰되었다.
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