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제안 방법
- 페트리 디쉬에 시험약물 이름 및 농도를 표시하고 배 지는 50~55。0로 식힌 후 앞서 준비한 약물을 담고 있는 각각의 페트리 디쉬에 10 m四 분주하여 잘 섞어 약물을 담고있는 평판을 만들었다. 완전히 평판이 굳으 면 flow chamber에서 1시간 정도 건조시킨 후 배양된 균액을 0.
- Polymer drug을 합성하기 위한 전단계로서 RAA의 카르복실기를 acyl halide(-COCl)로 치환시키기 위하여 thionyl chloride를 사용하여 acid chloride화 된 polyacryloyl 합성하였다.
- 디스크 확산법의 판독은 zone reader를 사용하여 디 스크 직경을 포함한 발육억제대 (clean zone) 직경을 18 시간 후에 측정하였고 발육억제대 주변에 미약한 발육 이나 작은 발육억제대안의 큰 집락이 생겼을 경우에는 계대배양(subculture)하여 발육억제대를 측정하였다.
- 본 연구에서는 기존 약물투여의 해결 가능성을 제시 하고자 chemical conjugation이라는 방법으로 sulfa제의 고유의 약리활성 구조에 영향을 미치지 않는 범위에서 대중 약물 요법으로 유용하게 사용되어지고 있는 설파 제 항균제를 이용하여 고분자인 polyacrylic acid(이하 PAA)와 반응으로 prodrug을 합성하고 배양한 그람양성 균과 음성균 등 4종의 세균을 약물의 항균력 실험에 이용되는 디스크 확산법과 평판배지 희석법을 통하여 합성한 약물의 항균활성을 측정하였다.
- 설파제 항균제를 이용하여 고분자인 polyacrylic acid(啟A)와의 반응으로 prodrug을 합성하고 배양한 그 람양성균과 음성균 등 4종의 세균을 약물의 항균력 실험에 이용되는 디스크 확산법과 평판배지 희석법을 통하여 합성한 약물의 항균활성을 측정하였다.
- 합성물의 분석과 확인은 먼저 반응물과 합성물에 대한 합성물 확인은 Bio-RAD사의 FTS형 FT-IR을 이용하여 KBr pellet법을 사용하여 측정하였다. 열중량 분석장치 (TGA)와 시차 열분석장치 (DTA)는 Shimadm사제 TG/ DTA 50을 이용하여 열적 안정성을 측정하였다.
- 페트리 디쉬에 시험약물 이름 및 농도를 표시하고 배 지는 50~55。0로 식힌 후 앞서 준비한 약물을 담고 있는 각각의 페트리 디쉬에 10 m四 분주하여 잘 섞어 약물을 담고있는 평판을 만들었다. 완전히 평판이 굳으 면 flow chamber에서 1시간 정도 건조시킨 후 배양된 균액을 0.9% saline酉로 1000배 희석하여 약물을 담고 있는 평판을 낮은 농도에서 높은 농도의 순서로 균액 을 접종하였다. 접종한 균액이 완전히 배지 내에서 흡 수될 때까지 실온에 방치한 후 완전히 건조된 평판을 37℃ 배양기에서 하루 동안 배양시켜 측정하였다.
- 9% saline酉로 1000배 희석하여 약물을 담고 있는 평판을 낮은 농도에서 높은 농도의 순서로 균액 을 접종하였다. 접종한 균액이 완전히 배지 내에서 흡 수될 때까지 실온에 방치한 후 완전히 건조된 평판을 37℃ 배양기에서 하루 동안 배양시켜 측정하였다.
- 평판배지 희석법과 동일한 방법으로 평판을 만들고 페트리 디쉬에 시험약물 이름 및 농도를 표시하고 균 배양액의 농도를 맞춘 후 15분 이내에 건조된 배지에 멸균된 면봉을 사용하여 균 배양액에 충분히 적시고 페 트리 디쉬 내벽에 돌리면서 과다한 균액을 제거하였다. 이때 처음에는 전 표면에 한 방향으로 문질러 바 르고 다시 되풀이하여 전 표면에 골고루 접종하였다.
- 평판배지 희석법은 순수 배양된 배지에서 1~2 집락 (colony)을 따서 10.0 m/ Tryptic Soy Broth/} 담긴 유 리 튜브에 풀어 37℃ 배양기에서 하루 동안 배양하여 실험에 사용할 균을 활성화 시킨 후, 배지를 평량하여 증류수로 잘 녹인후 12FC, 1기압, 15분 동안 멸균하고 피펫 팁 , 주사기와 주사기 바늘, 완충용액 , 희석용액 (saline) 등도 미리 멸균하여 준비하고 약물은 2500 |ig/ ml 농도로 제조 후 부피비를 다르게 하여 각각의 페트 리 디쉬에 분주하였다.
대상 데이터
- 항균력 측정에 사용된 균주는 그람 양성균으로서 Staphyloccus aureus ATCC 6538P과 Streptococcus pyrogenes ATCC 21059을 사용하였으며, 그람 음성균 으로는 장내세균으로 Escherichia coli ATCC 8739과 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027을 국립보건원에서 분양 받아서 배양하여 실험에사용하였다. 배지로는 Difco사의 Mueller Hinton Agar, Tryptic Soy Broth, Biolife사의 Nutrient Agar를 사용하였고, 약물 희석용 완 충용액은 0.1M phosphate buffed DMSO를 사용하였다.
- 실험에 사용한 시약 중 poly acrylic acid(Mw:2,000), sulfacetamide는 Aldrich사 제품을 사용하였고 N, N- dimethylfonnamide(이하 DMF)는 Yakuri사 제품을 사용하였다. 그 밖의 tetrahydrofuran(이하 THF), thionyl chloride, 피리딘, 아세톤 methylene chloride 등의 용 매는 국산 시약을 일반 정제법9에 의하여 재증류하여 사용하였으며 증齐수七 Millipore사의 milliQ reagent water system을 사용하여 처리한 초순수를 사용하였다.
- 항균력 측정에 사용된 균주는 그람 양성균으로서 Staphyloccus aureus ATCC 6538P과 Streptococcus pyrogenes ATCC 21059을 사용하였으며, 그람 음성균 으로는 장내세균으로 Escherichia coli ATCC 8739과 Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027을 국립보건원에서 분양 받아서 배양하여 실험에사용하였다. 배지로는 Difco사의 Mueller Hinton Agar, Tryptic Soy Broth, Biolife사의 Nutrient Agar를 사용하였고, 약물 희석용 완 충용액은 0.
이론/모형
- 실험에 사용한 시약 중 poly acrylic acid(Mw:2,000), sulfacetamide는 Aldrich사 제품을 사용하였고 N, N- dimethylfonnamide(이하 DMF)는 Yakuri사 제품을 사용하였다. 그 밖의 tetrahydrofuran(이하 THF), thionyl chloride, 피리딘, 아세톤 methylene chloride 등의 용 매는 국산 시약을 일반 정제법9에 의하여 재증류하여 사용하였으며 증齐수七 Millipore사의 milliQ reagent water system을 사용하여 처리한 초순수를 사용하였다. 합성물의 분석과 확인은 먼저 반응물과 합성물에 대한 합성물 확인은 Bio-RAD사의 FTS형 FT-IR을 이용하여 KBr pellet법을 사용하여 측정하였다.
- 디스크 확산법에 의한 감수성 측정 결과를 일괄성 있고 믿을만한 결과를 얻기 위해서는 검사방법과 기술 이 표준화되어야 하며 엄격한 관리가 필요하다. 본 연구에서는 임상적으로 그 타당성이 인정된 Bauer-Kirby 방법 is을 응용하여 실험하였다.
- 본 연구에서는 항균제의 항균력 측정에 널리 이용되는 평판배지 희석법과 디스크 확산법을 이용하여 polymer drug의 항균력을 측정하였다.
- 그 밖의 tetrahydrofuran(이하 THF), thionyl chloride, 피리딘, 아세톤 methylene chloride 등의 용 매는 국산 시약을 일반 정제법9에 의하여 재증류하여 사용하였으며 증齐수七 Millipore사의 milliQ reagent water system을 사용하여 처리한 초순수를 사용하였다. 합성물의 분석과 확인은 먼저 반응물과 합성물에 대한 합성물 확인은 Bio-RAD사의 FTS형 FT-IR을 이용하여 KBr pellet법을 사용하여 측정하였다. 열중량 분석장치 (TGA)와 시차 열분석장치 (DTA)는 Shimadm사제 TG/ DTA 50을 이용하여 열적 안정성을 측정하였다.
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