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제안 방법
- 고치 의 산가수분해는 Chen 등(5)의 방법에 준하였다. 100배량의 2 N HC1 용액에서 100℃, 48시간 가수분해 한후 물방울이 떨어지지 않을 정도로 짠 다음, 산에 의한 누에고치 의 가수분해 반응을 강력 신속하게 하기 위하여 고압 솥에 넣어 125℃에서 1시간씩 3회 습열처리를 반복하였다. 산 및 습열 처리한 누에고치는 강산성을 띄고 있어 생물체에 나쁜 영향을 주기 때문에 5% NaOH 용액으로 누에고치가 담긴 용액이 pH 7.
- GOT 및 GPT의 활성도 측정은 혈청 transaminase 측정용 kit시약(아산제약, 한국)을 이용하였고 혈장 알부민과 총단백질 함량은 혈 액자동분석기 (Spotchem, Daiichi Co., Japan) 로 분석하였다.
- 15분간 원심 분리 하여 혈장을 얻었다. 간을 적출하여 간에 붙어있는 지방을 제거하고 여과지로 표면의 수분을 제거한 뒤 간의 무게를 측정하였다.
- 미 량의 유해 이온을 제거하기 위하여 5%식염수 용액에서 끓인 후, 식염을 제거하기 위하여 수돗물로 1일간 수세한 후, 감압 건조 시 켰다. 건조된 누에고치 산가수분해물은 강도가 낮아 쉽 게 절단, 분말화되어 분쇄기를 이용하여 가루로 만들었다.
- 누에고치 산가수분해물의 아미노산 분석은 HPLC 시스템을 사용하였다(Waters 600S, controller, Waters 626 pump, Waters 486 tunable absorbance detector, HP 3395 inter- grator, Waters CO, USA).
- 누에고치 산가수분해물이 고콜레스테롤, 고중성지질, 고설탕식이를 섭취한 흰쥐의 혈장지질에 미치는 영향을 알아보기 위한 실험군은 정상사료에 각각 1%콜레스테롤, 20%라아드, 70%설탕 첨가식 이를 만들고 이들 세군에 각각 5% 누에고치 산가수분해물을 섭취시켜 비교하였다. 본 실험에서 사용한 70%설탕 첨가식이는 고설탕식이와 간 구성지질(19), 간의 당신생반응(20) 및 고중성지질혈증(21)에 대한 연구에서 식이 총 열량의 63~70%를 설탕으로 한 선행연구들에 근거하였다.
- 본 실험에 사용한 실험재료는 누에고치를 산가수분해 시켜 만든 것으로 단백질급원 식 품재료로서의 유용성을 알아보기 위하여 아미노산 조성과 실험동물을 이용하여 간략한 단백질의 질적 평가를 하였고, 고콜레스테롤, 고중성지질, 고설탕식이를 섭취한 휜쥐의 혈장지질에 대한 효과를 알아보았다.
- 실험동물의 사료섭 취 량과 체중은 하루에 한번씩 일정 시 간에 측정하고 식이효율은 실험기간동안의 체중증가량을 실험일수로 나누어 1일 체중증가량을 구한 다음 1일 사료섭 취 량으로 나孑.어 계산하였다.
- 아미노산의 검출은 254 nm에서 홉광도를 측정하고 아미노산 표준물칠은 Pierce사의 free amino acid standard H를 사용하였으며 조성비는 각 peak의 면적을 표쭌 피크에 대한먼적비로서 상대적 몰(mole) 농도로 계산하였고, 전체 아미노산의 몰수에 대한 각 아미노산의 백분율값으로 계산하였다.
- 전처리(정련) : 원료 누에고치는 기름류, 다당류 또는 불순물 등이 부착되어 있어 이를 제거하기 위하여 4~5 cm 크기로 자른 후 0.5% NazCOs용액 에서 98℃, 30분간 2회 정 련하였다.
- 나누었다. 정상사료군을 control군으로 하고, 정상사료에 5% 카제인 첨가하여 비교단백군(정상사료+5% 카제인)으로 하고(18), 정상사료에 5%를 누에고치 산가수분해물을 가한 군(정상사료+ 5% 누에고치 산가수분해물군), 그리고 누에 고치 산가수분해물의 식용으로의 부적 합성 등을 고려 하여 낮은 농도인 1% 누에고치 산가수분해 물을 정 상사료에 첨기- 한 군(정상사료+ 1% 누에고치 산가수분해물군)으로 하여 비교하였다.
- 흰쥐를 실험 사료로 4주동안 사육한 후 12시간 절식 시 키고 ethyl ether로 약하게 마취 하여 개봉한 후 EDTA를 항응고제로 하여 심장천자로 채혈하였디L 채혈한 혈액은 3000 rpm에서 15분간 원심 분리 하여 혈장을 얻었다. 간을 적출하여 간에 붙어있는 지방을 제거하고 여과지로 표면의 수분을 제거한 뒤 간의 무게를 측정하였다.
대상 데이터
- 실험 동물은 생후 4주된 Sprague-Dawley종 횐쥐 (SD-rat) 를 대 한실험 동물센터 로부터 구입 하여 정 상사료(삼양배 합사료)로 1주일간 적응시킨 뒤 체중을 고르게 7마리씩 8군으로 나누었다. 정상사료군을 control군으로 하고, 정상사료에 5% 카제인 첨가하여 비교단백군(정상사료+5% 카제인)으로 하고(18), 정상사료에 5%를 누에고치 산가수분해물을 가한 군(정상사료+ 5% 누에고치 산가수분해물군), 그리고 누에 고치 산가수분해물의 식용으로의 부적 합성 등을 고려 하여 낮은 농도인 1% 누에고치 산가수분해 물을 정 상사료에 첨기- 한 군(정상사료+ 1% 누에고치 산가수분해물군)으로 하여 비교하였다.
데이터처리
- 실험 결과는 SAS Program을 이용하여 평균값과 표준오차를 구하였고 Duncan's multiple range test로 p<0.05 수준에서 유의성 검정을 하였다.
이론/모형
- 련한 누에.고치 의 산가수분해는 Chen 등(5)의 방법에 준하였다. 100배량의 2 N HC1 용액에서 100℃, 48시간 가수분해 한후 물방울이 떨어지지 않을 정도로 짠 다음, 산에 의한 누에고치 의 가수분해 반응을 강력 신속하게 하기 위하여 고압 솥에 넣어 125℃에서 1시간씩 3회 습열처리를 반복하였다.
- 흰쥐 혈청의 중성지질, 인지질, 고밀도 지단백질(high density lipoprotein, HDL), 저 밀도 지 단백질 (low density lipoprotein, LDL), 총콜레스테롤농도는 효소법에 의한kit시약(Eiken Chemical Co., Japan)을 사용하여 분석하였다.
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