Objective : Angiogenesis, the proliferation of capillary endothelial cells, is a vital component in the development, progression, and metastasis of many human tumors. Vascular endothelial growth factor(VEGF) is an endothelial cell-specific mitogen and induces angiogenesis and vascular permeability. ...
Objective : Angiogenesis, the proliferation of capillary endothelial cells, is a vital component in the development, progression, and metastasis of many human tumors. Vascular endothelial growth factor(VEGF) is an endothelial cell-specific mitogen and induces angiogenesis and vascular permeability. The features of glioblastoma, distinct from low grade astrocytomas, are the presence of necroses and vascular endothelial proliferation. In this study, we investigated VEGF expression in the different grades of astrocytomas and determined whether VEGF expression correlates with development of glioblastoma and progression of astrocytomas. Patients and Methods : Forty seven patients with astrocytic tumors(24 males and 23 females), aged 3 to 65 years, were evaluated. Immunohistochemical staining was carried out using labelled streptavidin biotin method and primary antibody was a antirabbit polyclonal Ab against N-terminus region of VEGF165(Oncogene research product, MA, USA). Immunoreactivity(IR) was classified into no IR(absent or a trace of stain), moderate IR and intense IR by level of staining amount and intensity. Results : Six pilocytic astrocytomas showed 3 no IR and 3 moderate IR, 10 astrocytomas showed 2 no IR, 6 moderate IR and 2 intense IR, 12 anaplastic astrocytomas showed I no IR, 7 moderate IR and 4 intense IR and 19 glioblastomas showed 1 no IR, 11 moderate IR and 7 intense IR. Immunoreactivity was significantly different between low and high grade of tumors but there was no significant difference between anaplastic astrocytomas and glioblastomas. Gemistocytic tumor cells represented the predominent VEGF-immunoreactive cell types, as compared with compactly-arranged small tumor cells. In glioblastomas VEGF IR was observed in both perinecrotic and vital tumor areas. Conclusion : VEGF seems to be a important angiogenic factor in anaplastic astrocytomas and glioblastomas and VEGF expression may contribute to neovascularization of human astrocytomas.
Objective : Angiogenesis, the proliferation of capillary endothelial cells, is a vital component in the development, progression, and metastasis of many human tumors. Vascular endothelial growth factor(VEGF) is an endothelial cell-specific mitogen and induces angiogenesis and vascular permeability. The features of glioblastoma, distinct from low grade astrocytomas, are the presence of necroses and vascular endothelial proliferation. In this study, we investigated VEGF expression in the different grades of astrocytomas and determined whether VEGF expression correlates with development of glioblastoma and progression of astrocytomas. Patients and Methods : Forty seven patients with astrocytic tumors(24 males and 23 females), aged 3 to 65 years, were evaluated. Immunohistochemical staining was carried out using labelled streptavidin biotin method and primary antibody was a antirabbit polyclonal Ab against N-terminus region of VEGF165(Oncogene research product, MA, USA). Immunoreactivity(IR) was classified into no IR(absent or a trace of stain), moderate IR and intense IR by level of staining amount and intensity. Results : Six pilocytic astrocytomas showed 3 no IR and 3 moderate IR, 10 astrocytomas showed 2 no IR, 6 moderate IR and 2 intense IR, 12 anaplastic astrocytomas showed I no IR, 7 moderate IR and 4 intense IR and 19 glioblastomas showed 1 no IR, 11 moderate IR and 7 intense IR. Immunoreactivity was significantly different between low and high grade of tumors but there was no significant difference between anaplastic astrocytomas and glioblastomas. Gemistocytic tumor cells represented the predominent VEGF-immunoreactive cell types, as compared with compactly-arranged small tumor cells. In glioblastomas VEGF IR was observed in both perinecrotic and vital tumor areas. Conclusion : VEGF seems to be a important angiogenic factor in anaplastic astrocytomas and glioblastomas and VEGF expression may contribute to neovascularization of human astrocytomas.
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문제 정의
그러나 저등급 성상세포종의 악성변형에 대한 예측인자는 아직까지 확실히 밝혀져 있지 않으나 혈관신생이 성상세포종의 악성 변형 및 악성 성상세포종의 발생에 관여할 수 있다고 추정 된다. 여러 조직학적 단계의 성상세포종에서 VEGF발현을 통한 혈관내피세포증식의 정도와 VEGF 발현이 성상세포 종의 악성변형 및 예후에 영향을 미칠 수 있는지를 알아보고자 본 연구를 하였다.
제안 방법
)를 30분간 반응시키고 tris 완충액으로 세척한 후 streptovidin-peroxide를 30분간 실온에서 반응시켰다. 다시 tris 완충액으로 세척한 후 발색제인 AEC(3-amino-9-ethylcarbazole)를 이용하여 5분간 반응시킨 다음 세척하여 Mayer’ s hematoxylin으로 대조염색 후 wet mounting하여 광학 현미경으로 관찰하였다.
음성 대조군으로 정상 뇌조직을 사용하였고 immunoreactivity(IR) 정도는 염색된 세포의 비율과 염색강도에 따라 다음과 같이 3단계로 나누었다. 염색이 되지 않거나 약하게 염색되면 no IR, 중간 정도 염색되면 moderate IR(a moderate amount(10~50% of cells) of diffuse stain)로 구분하였고 강하게 염색되면 intense IR(the largest am-ount(>50% of cells) of diffuse stain)으로 구분하여 측정하였다.
음성 대조군으로 정상 뇌조직을 사용하였고 immunoreactivity(IR) 정도는 염색된 세포의 비율과 염색강도에 따라 다음과 같이 3단계로 나누었다. 염색이 되지 않거나 약하게 염색되면 no IR, 중간 정도 염색되면 moderate IR(a moderate amount(10~50% of cells) of diffuse stain)로 구분하였고 강하게 염색되면 intense IR(the largest am-ount(>50% of cells) of diffuse stain)으로 구분하여 측정하였다.
내인성 과산화 효소의 활동을 억제하기 위해서 3% H2O2가 포함된 methanol 용액에 20분간 처리하였다. 일차 항체의 비특이적 결합을 감소시키기 위하여 정상 염소혈청에 30분간 처리한 후 일차 항체인 anti-VEGF(purified rabbit polyclonal antibody against N-terminus region of VEGF165, Oncogene, Cambridge, USA)를 5% 소혈청 알부민을 함유한 희석액을 이용하여 1:20으로 희석하여 4℃에서 16시간 동안 반응시켰다. Tris 완충액으로 세척한 후 biotin이 부착된 anti-rabbit 항체(2차 항체, K684, DAKO, Carpinteria, U.
대상 데이터
1994년부터 1999년까지 5년 동안 본원 신경외과에 입원하여 조직학적으로 성상세포종으로 진단 받은 47명의 환자를 대상으로 하였다. 남자는 24명, 여자는 23명이었고 연령분포는 3세에서 65세로 평균연령은 36세였다.
47예의 성상세포종 중 저등급 성상세포종은 16예였고 악성 성상세포종은 31예였다. 모낭세포성 성상세포종 6예는 no IR 및 moderate IR가 각각 3예였고 성상세포종 10 예는 no IR 2예, moderate IR 6예 및 intense IR 2예였다(Table 1).
그 중 VEGF는 혈관투과성인자(vascular permeability fa-ctor)라고도 하며, 34~43kDa의 당단백으로 PDGF와 구조적으로 동종(homology)으로 4개의 isoform(VEGF 121, VE-GF 165, VEGF 189 및 VEGF 206)이 있는데 이들은 mRNA의 alternative splicing에 의해서 형성되며 7) 그 중 VEGF 165가 가장 흔하고 종양혈관신생에 중요역할을 한다8). 본 연구에서도 VEGF 165 의 N-terminus region 에 대한 항체를 사용하였다. VEGF는 혈관내피세포에 유사분열물질(mit-ogen)로 직접 작용할 뿐만 아니라 혈관의 투과성을 증가시키고 기저막과 세포외기질을 분해시켜 혈관신생에 관여하며8)VEGF와 그 수용체는 정상 뇌조직에서 소량 발견되는데 그것은 VEGF의 정상혈관 유지기능 때문으로 추정된다2).
포르말린고정 파라핀 포매 조직을 대상으로 DAKO LS-AB(labelled streptoavidin-biotin) Kit(DAKO Corporation, Carpinteria, U.S.A.)를 사용하여 면역염색을 하였다. 파라핀 블록을 4μm 두께로 박절하여 슬라이드에 부착시킨 후 xylene에 5분간 3회 처리하여 파라핀을 제거하고, 계열별 ethanol에 처리한 후 증류수로 함수시켰다.
데이터처리
통계처리는 VEGF 발현 정도와 조직학적 분류에 따른 성상세포종과의 관계를 Wilcoxon rank sum test를 이용하여 분석하였으며 p<0.05를 의의 있는 것으로 하였다.
성능/효과
1). 교모세포종에서 괴사주위 pseudopalisading cell들에서 VEGF 양성반응을 볼 수 있었으며 또한 괴사되지 않은 종양세포들에서도 VEGF 양성 반응을 관찰할 수 있었다(Fig. 2).
47예의 성상세포종 중 저등급 성상세포종은 16예였고 악성 성상세포종은 31예였다. 모낭세포성 성상세포종 6예는 no IR 및 moderate IR가 각각 3예였고 성상세포종 10 예는 no IR 2예, moderate IR 6예 및 intense IR 2예였다(Table 1). 역형성 성상세포종 12예는 no IR 1예, moderate IR 7예 및 intense IR가 4예였고 교모세포종 19예는 no IR 1예, moderate IR 11예 및 intense IR 7예였다(Table 1).
. 본 연구에서 VEGF발현정도의 차이는 있었지만 악성 성상세포종 뿐만 아니라 저등급 성상세포종에서도 VEGF는 발현되었는데 악성 신경교종에서는 저등급 신경교종보다 많은 예에서 VEGF가 중정도 이상으로 발현되었다. 이것은 악성신경교종의 병리적 특성인 혈관내피 세포의 증식 때문이라 생각된다.
Pietsch 등10)의 보고에 의하면 일부 모양세포성 성상세포종을 제외한 전성상세포종에서 VEGF에 양성면역반응을 보였으나 악성도가 높을수록 발현정도가 높다고 하여 본 연구와 유사한 결과를 보였다. 본 연구에서 저등급 성상세포종에서 악성 성상세포종으로 변형한 예들은 없었으나 악성 성상세포종의 VEGF 발현정도가 저등급 성상세포종의 그것보다 의의 있게 높은 것으로 보아 VEGF발현정도가 저등급 성상 세포종의 악성변형에 대한 예측인자로 작용할 수도 있다고 추정된다. 또한 빽빽하게 배열된 작은 종양세포보다는 세포질이 풍부하고 큰 종양세포인 gemistocyte에서 VE-GF 발현이 잘 된 것으로 보아 VEGF 발현은 gemistocyte 와 관계가 있을 것으로 추정되며 이에 대한 추가연구가 필요하다고 생각된다.
05). 악성 성상세포종 뿐만 아니라 저등급 성상세포 종에서도 빽빽하게 배열된 작은 종양세포보다는 세포질이 풍부하고 큰 종양세포인 gemistocyte에서 VEGF 양성반 응을 잘 볼 수 있었다(Fig. 1). 교모세포종에서 괴사주위 pseudopalisading cell들에서 VEGF 양성반응을 볼 수 있었으며 또한 괴사되지 않은 종양세포들에서도 VEGF 양성 반응을 관찰할 수 있었다(Fig.
모낭세포성 성상세포종 6예는 no IR 및 moderate IR가 각각 3예였고 성상세포종 10 예는 no IR 2예, moderate IR 6예 및 intense IR 2예였다(Table 1). 역형성 성상세포종 12예는 no IR 1예, moderate IR 7예 및 intense IR가 4예였고 교모세포종 19예는 no IR 1예, moderate IR 11예 및 intense IR 7예였다(Table 1).교모세포종 중 no IR 1예는 거구세포성 교모세포종(giant cell glioblastoma)이었다.
교모세포종 중 no IR 1예는 거구세포성 교모세포종(giant cell glioblastoma)이었다. 저등급 성상세포종 16예 중 11 예(69%)가 moderate IR 이상의 염색반응을 보였고 악성 성상세포종 31예 중 29예(94%)가 moderate IR 이상의 염색반응을 보여 조직학적 분류에 따른 성상세포종의 종류와 VEGF 염색정도의 차이는 통계학적 유의성이 있었다(p<0.05). 악성 성상세포종 뿐만 아니라 저등급 성상세포 종에서도 빽빽하게 배열된 작은 종양세포보다는 세포질이 풍부하고 큰 종양세포인 gemistocyte에서 VEGF 양성반 응을 잘 볼 수 있었다(Fig.
남자는 24명, 여자는 23명이었고 연령분포는 3세에서 65세로 평균연령은 36세였다. 조직학적으로 모낭세포성 성상세포종 6예, 성상세포종 10예, 역형성 성상세포종 12예 및 교모세포종 19예였다.
후속연구
또한 성상세포종에서 VEGF발현은 환자, 특히 저등급 성상세포종 환자의 예후를 예측할 수 있는 인자가 될 수도 있다고 생각된다. 그러나 환자들의 장기추적 에 의한 생존결과와 악성변형을 일으킨 저등급 성상세포종의 분석 뿐만 아니라 분자생물학적 분석이 앞으로 필요하다고 생각된다.
본 연구에서 저등급 성상세포종에서 악성 성상세포종으로 변형한 예들은 없었으나 악성 성상세포종의 VEGF 발현정도가 저등급 성상세포종의 그것보다 의의 있게 높은 것으로 보아 VEGF발현정도가 저등급 성상 세포종의 악성변형에 대한 예측인자로 작용할 수도 있다고 추정된다. 또한 빽빽하게 배열된 작은 종양세포보다는 세포질이 풍부하고 큰 종양세포인 gemistocyte에서 VE-GF 발현이 잘 된 것으로 보아 VEGF 발현은 gemistocyte 와 관계가 있을 것으로 추정되며 이에 대한 추가연구가 필요하다고 생각된다. Takekawa 등14)은 VEGF labelling index가 악성 성상세포종에서 저등급 성상세포종보다 의의 있게 높은 것으로 보아 VEGF발현이 성상세포종의 악성변형에 관여 할 수도 있다 하였고 Pietsch 등10)도 VEGF양성 저등급 성상세포종에서 gemistocytic differ-entiation이 발견되는 것으로 보아 이런 종양에서 악성변 형의 위험도가 높다 하였다.
VEGF는 성상세포종, 특히 악성 성상세포종에서 발현되며 이들 종양에서 VEGF는 혈관신생의 주요 인자로 관여 한다고 생각된다. 또한 성상세포종에서 VEGF발현은 환자, 특히 저등급 성상세포종 환자의 예후를 예측할 수 있는 인자가 될 수도 있다고 생각된다. 그러나 환자들의 장기추적 에 의한 생존결과와 악성변형을 일으킨 저등급 성상세포종의 분석 뿐만 아니라 분자생물학적 분석이 앞으로 필요하다고 생각된다.
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