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문제 정의
- p data-page="1">벼 (Oryaz sativa L)는 벼 과(Gramineae)에 속하는 1년생 초본으로 주요식랑자원에 속하는 작물이다.') 벼에 대한 연구는 많은 농업적 연구가 되어 있으나 벼 전초의 활성성분에 대한 연구는 거의 전무한 수준이므로2)이에 식물 화학적 성분의 연구와 생리활성연구의 필요성을 인식하고 항산화 성분을 추적한 결과 벼의 MeOH 추출물의 EtOAc층에서 3종의 항산화 성분을 분리하였고, 이들의 이화학적 성상 및 spectral data로부터 그 구조를 확인, 동정하였기에 보고하고자 한다.
제안 방법
- EtOAc분획을 Si column chromatography(cc), sephadex LH-20 및 RP cc둥을 반복 실시하여 화합물을 단리하였다. EtOAc분획 3.5 g을 CHC13 : MeOH = (9:1 - 8:2) 비율의 gradient solvent system으로 silica gel column chromatography# 실시하여 4개의 sub- ftactig으로 분획하였다.
- 6 g을 얻었으며 , 각 용매층을 미리 DPPH법3) 으로 항산화 screening를 행한 결과, EtOAc층에서 항산화 활성이 나타나 성분분리를 행하였다. EtOAc분획을 Si column chromatography(cc), sephadex LH-20 및 RP cc둥을 반복 실시하여 화합물을 단리하였다. EtOAc분획 3.
- 18은 H-3', H-4'와 H-K로 추정할 수 있었다. 또한 Positive EAB-Mass spectrum 에서 [M+l]+의 peak가 m/z 284로 확인되었고, 이상의 결과를 기존 문헌 data4-6)와 비교하여 5, 7-dihydroxy-8-methoxy- flavone 즉 wogonin으로 그 구조를 결정하였다. 화합물 2는 미황색의 부정형 고체물질로 mp.
- (Merck)을 사용하였다. 발색시약으로는 10% H2SO4(in EtOH)과 anisaldehyde H2SO4 시약을 사용하였으며, UV로 254, 365nm detection을 병행하였다. 사용한 기기는 mp (Gallenkamp melting point apparatus), FT-IR(Nicolet model 205), UV Spectrophotometer(Shimadzu UV 240), 'H-NMR(Varian Inova(500MHz)), FAB-MS, EI-MS (Jeol JMS-AX505WA), LPLC(DURAMAT 80pump)이다.
- 또한 Positive FAB-Mass spectrum에서 의 peak가 m/z 606으로확인되었고, TLC를 이용한 산가수분해 실험에 의해서aglycone0] glucose와 rhamnose임을 확인하였다. 이상의 결과와 기존 문헌 data7, 10'13)# 교하여 pectolinarigenin-7- O-P-rutinoside 즉 pectolinarki으로 그 구조를 결정하였다. DPPH radical 소거효과에 의한 항산화 활성 검색에서는 Table 1에서 보는 바와 같이 항산화 활성을 나타낸 EtOAc 분획(IC5o=63.
- 또한 TLC를 이용한 산가수분해 실험에 의해서 aglycone이 glucose와 rhamnose임을 확인하였다. 이상의 결과와 기존 문헌 data7-9)를 비교하여 acacetin- 7-O-P-rutinoside 즉 linaria으로 그 구조를 결정하였다. 화합물 3은 미황색의 부정형 고체물질로 mp.
- 추출 및 분리 - 신선한 벼잎을 음건세절하여 건조 중량 약 5 kg을 MeOH로 추출한 추출물 175.3 g을 물에 다시 녹인 후 Hexane층을 제거한 CHC13, EtOAC, BuOH층을 각각 3.5 g, 4.2 g, 2.6 g을 얻었으며 , 각 용매층을 미리 DPPH법3) 으로 항산화 screening를 행한 결과, EtOAc층에서 항산화 활성이 나타나 성분분리를 행하였다. EtOAc분획을 Si column chromatography(cc), sephadex LH-20 및 RP cc둥을 반복 실시하여 화합물을 단리하였다.
- 항산화 활성 검색 - 각 분획 및 단일 성분 3mg을 취해 MeOH로 25 ml로 정용한 후 각각의 농도를 480㎍/4ml,320㎍/4 ml, 160 ㎍/4 ml, 80 ㎍/4 ml, 40㎍/4 ml, 20 ㎍/ 4ml, 10㎍/4ml로 희석한 용액 4ml와 1.5×10-4 M/ml농도의 DPPH(l, l-dipheDyl-2-picrylhydrazyl)용액 1ml씩을vortex로 균일하게 혼합한 다음 실온에서 30분간 방치한 후 520nm에서 optical density(O.D)를 측정하였다. 항산화 효과는 대조군에 대한 50% 흡광도의 감소를 나타내는 검체의 농도(EC50)로 표시하였다.
대상 데이터
- 시약 및 기기 - 추출, 분획및 TLC용매는 EP급 용매를 재증류하여 사용하였다. Column packing용 silica gel은 Kiesel gel 60 (Art 9385 and 7734, Merck)를 사용하였고, mole cular sieve column chromatography용 packing material은 sephadex LH 20(Pharmacia) 을 사용하였다. TLC plate는 Kiesel gel 60 F254 precoated plate (Art.
- 발색시약으로는 10% H2SO4(in EtOH)과 anisaldehyde H2SO4 시약을 사용하였으며, UV로 254, 365nm detection을 병행하였다. 사용한 기기는 mp (Gallenkamp melting point apparatus), FT-IR(Nicolet model 205), UV Spectrophotometer(Shimadzu UV 240), 'H-NMR(Varian Inova(500MHz)), FAB-MS, EI-MS (Jeol JMS-AX505WA), LPLC(DURAMAT 80pump)이다.
- 시약 및 기기 - 추출, 분획및 TLC용매는 EP급 용매를 재증류하여 사용하였다. Column packing용 silica gel은 Kiesel gel 60 (Art 9385 and 7734, Merck)를 사용하였고, mole cular sieve column chromatography용 packing material은 sephadex LH 20(Pharmacia) 을 사용하였다.
- 실험재료 - 본 실험에 사용한 벼잎(추청벼)은 2000년 8 월에 농촌진흥청 작물시험장 포장에서 농약의 잔류성이 없는 것을 대상으로 하여 채취하였으며, 정확한 감정을 거친 후에 음건하여 분말화한 후 실험에 사용하였으며, 식물표본은 성균관대학교 약학대학 표본실(OR-SA-20-08-14)에 보관되어 있다.
성능/효과
- 따라서 이 화합물을 flavone계 화합물로 추정하였다.12)이 화합물의 *H-NMR spectrum data에서 δ 3.95에서 methoxy peak가 관찰되었으며, δ6.81 과 δ6.31 에 나타나는 두 개의 singlet peak는 A ring의 proton으로, 6 6.81은 H-3으로 8 6.31 은 H-6으로 추정할 수 있었으며,δ 8.06와 7.60에 나타나는 multiplet peak는 ortho, meta coupling을 하는 B ring 의 proton으로 δ 8.06은 H-2와 H-6로 6 7.18은 H-3', H-4'와 H-K로 추정할 수 있었다. 또한 Positive EAB-Mass spectrum 에서 [M+l]+의 peak가 m/z 284로 확인되었고, 이상의 결과를 기존 문헌 data4-6)와 비교하여 5, 7-dihydroxy-8-methoxy- flavone 즉 wogonin으로 그 구조를 결정하였다.
- 18은 H3와 H-5'로 추정할 수 있었다. 또한 Positive FAB-Mass spectrum에서 의 peak가 m/z 606으로확인되었고, TLC를 이용한 산가수분해 실험에 의해서aglycone0] glucose와 rhamnose임을 확인하였다. 이상의 결과와 기존 문헌 data7, 10'13)# 교하여 pectolinarigenin-7- O-P-rutinoside 즉 pectolinarki으로 그 구조를 결정하였다.
- 또한 Positive FAB-Mass spectrum에서 [* M+CH] 의 peak가 m/z 605로 확인되었다. 또한 TLC를 이용한 산가수분해 실험에 의해서 aglycone이 glucose와 rhamnose임을 확인하였다. 이상의 결과와 기존 문헌 data7-9)를 비교하여 acacetin- 7-O-P-rutinoside 즉 linaria으로 그 구조를 결정하였다.
- 벼잎의 MeOH 추출물로부터 얻은 EtOAc분획을 Si cc, Sephadex LH-20 및 RP-18 cc 등을 반복 실시하여 3종의 화합물들을 단리하였고, 이화학적 성상과 spectral data를 기초로 하여 그 화학구조를 동정한 결과, 화합물 1 은 5, 7-dihy-droxy-8-methoxyflavone, 화합물 2는 acacetm-7-O-β-rutino- side, 화합물 3은 pectolinarigenin-7-O-β-rutinoside으로 확인, 동정하였으며, DPPH radical 소거기작에 의한 항산화 활성을 검색한 결과 화합물 1, 2에서 항산화 작용이 나타났다.
- 화합물 2, 3의 산가수분해 - 화합물 2, 3를 TLC에 점적하여 c-HCl chamberfl 하루간 방치하여 가수분해 시킨 후 표품당(Aldrich co.)과 Co-TLC를 행하여 CHCl3:MeOH: water(9:3:l)로 전개시킨 후 anilline phthalate시약으로 발색시켰으며 그 결과 조성당이 glucose와 rhamnose임을 확인하였다.
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