선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구는 길경으로부터 platycodin D를 보다 신속, 정확하게 분리하여 정량 분석하기 위한 방법으로 증기화광산란검줄기(Evaporative Light Scattering Detector : ELSD)를 이용한 HPLC 분석법을 제시하고 지표성분 분석을 위한 적절한 건조방법에 대한 기초자료를 얻고자 하였다.
제안 방법
- 2). Platycondin D의 HPLC-ELSD 정량분석조건을 설정한 후 길경 분말시료로부터 이 성분의 회수율을 최대화할 수 있는 추출조건을 재검토하였다. 추출 용매별로 platycondin D의 회수량을 정량하였으며 이를 위해 platcondin D의 표준곡선을 구하였다(Fig.
- Platycondin D의 정량 분석법을 확립하기 위해 HPLC 분석을 실시하였으며 이때 검출기는 자외선에 대한 특이파장 발색단이 없는 물질의 검출에 용이한 증기 화광 산란 검출기 (Evaporative Light Scattering Detector, ELSD)를 사용하였다. ELSD는 최근 인삼의 사포닌 분석에 유용하게 이용되고 있어 길경의 사포닌 분석에도 유용할 것으로 예측이 되었다(Park et al.
- )를 얻었다. n-BuOH ext. 20g으로부터 유효성분을 분리하기 위해 silica gel column chromatography를 실시하였다. 이때 용출 용매로는 CHCl3/MeOH/H2O 혼합용매계를 사용하였으며 순차적으로 극성을 높여가며 기울기 용리로 물질을 분리하였다.
- 45 μm membrane filter로 여과하여 HPLC 시료액으로 하였다. 건조방법별 지표 성분의 추출에서는 80% MeOH을 사용하여 1회씩 동일한 방법으로 추출하였다.
- 건조조건은 양건, 양건 1일, 양건 2일, 양건 3일 후 50°C에서 건조, 양건 없이 40°C, 50°C, 60°C에서 각각 열풍 건조 등 총 7가지 처리조건에서 실시하였다.
- , 2001). 길경의 MeOH 추출액으로부터 platycodin D를 효율적으로 정량분석하기 위해 가장 적절한 ELSD의 조건과 HPLC 컬럼의 조건을 찾고자 하였으며 그 결과, 최종 HPLC 분석조건은 table 1과 같이하여 platycondin D를 시료로부터 효율적으로 정량분석하였다(Fig. 2). Platycondin D의 HPLC-ELSD 정량분석조건을 설정한 후 길경 분말시료로부터 이 성분의 회수율을 최대화할 수 있는 추출조건을 재검토하였다.
- 길경의 부탄올 추출액으로부터 주요성분인 platycodin D를 분리하기 위해 총 3회의 Si2O 컬럼크로마토그래피를 실시하여 최종 화합물 1을 순수 분리하였다. 화합물 1의 구조는 NMR 분광학적 분석으로 동정하였다.
- 추출용매는 메탄올과 에탄올을 50%, 80%, 99% 조성별로 비교하였다. 시료 0.05g에 각각의 용매 1 ml씩을 EP tube에 넣고 microson 초음파 추출기로 1분간 총 3회 추출하였으며 추출 후 원심분리기에서 잔류물을 원리분리시켜 제거하고 상층부 추출액만을 0.45 μm membrane filter로 여과하여 HPLC 시료액으로 하였다. 건조방법별 지표 성분의 추출에서는 80% MeOH을 사용하여 1회씩 동일한 방법으로 추출하였다.
- 나타내었다. 엑스함량은 50% 묽은 에탄올 엑스 함량으로 측정하였으며 회분은 1차 연소된 시료를 550°C 회화로에서 4시간 회화(灰化)한 후 중량법으로 측정하였다.
- 이때 용출 용매로는 CHCl3/MeOH/H2O 혼합용매계를 사용하였으며 순차적으로 극성을 높여가며 기울기 용리로 물질을 분리하였다. 총 3차의 silica gel column chromatography를 실시하여 화합물 1을 분리, 정제하였다(Scheme 1).
- Platycondin D의 HPLC-ELSD 정량분석조건을 설정한 후 길경 분말시료로부터 이 성분의 회수율을 최대화할 수 있는 추출조건을 재검토하였다. 추출 용매별로 platycondin D의 회수량을 정량하였으며 이를 위해 platcondin D의 표준곡선을 구하였다(Fig. 3). Platycondin D 표준곡선은 상관계수 R2이 0.
- 적절한 추출용매을 구명하였다. 추출용매는 메탄올과 에탄올을 50%, 80%, 99% 조성별로 비교하였다. 시료 0.
- 최종 화합물 1을 순수 분리하였다. 화합물 1의 구조는 NMR 분광학적 분석으로 동정하였다.
대상 데이터
- 밀양 1호는 4월 상순에 파종하고 재식거리는 20×10 cm, 비료의 시비량은 N-P2O5-K2O가 17-20-20(kg/10a)이 되게 하였고 퇴비는 2000 kg/10a으로 시비하여 재배하였다. 2년생 도라지를 9월 하순에 수확 후 뿌리를 세척한 후 적당한 크기로 세절하여 건조 후 분쇄하여 시험에 사용하였다.
- 급을 사용하였다. Column chromatography용 silica gel 충진제와 precoated TLC plate는 각각 Merck사(Germany)의 Kiesel gel 60(70~ 230 mesh)와 Kiesel gel 60F254를 사용하였으며, column chromatography용 용매는 G.R. 급을 사용하였다. 구조동정을 위한 NMR 분석은 독일 Bruker사의 AVANCE 600 FT-NMR(600MHz) 분광기를 사용하여 측정하였으며 이때 용매는 pyridine-d5(Sigma Chemical.
- HPLC system은 HP사의 Agilent 1100을 사용하였고 검출기는 ELSD (Evaporative Light Scattering Detector)로서 Alltech사의 500ELSD 모델을 사용하였다. HPLC 컬럼은 YNC사의 YMC-Pack 0DS-AM( 250 × 4.
- Alltech사의 500ELSD 모델을 사용하였다. HPLC 컬럼은 YNC사의 YMC-Pack 0DS-AM( 250 × 4.6 mm, 5μm)을 정량용으로 사용하였으며 HPLC 용매는 모두 HPLC급을 사용하였다.
- 급을 사용하였다. 구조동정을 위한 NMR 분석은 독일 Bruker사의 AVANCE 600 FT-NMR(600MHz) 분광기를 사용하여 측정하였으며 이때 용매는 pyridine-d5(Sigma Chemical. Co., USA)를 사용하였다.
- 길경(Platycodi radix)은 영남농업시험장에서 육성 중인 밀양 1호를 사용하였다. 밀양 1호는 4월 상순에 파종하고 재식거리는 20×10 cm, 비료의 시비량은 N-P2O5-K2O가 17-20-20(kg/10a)이 되게 하였고 퇴비는 2000 kg/10a으로 시비하여 재배하였다.
성능/효과
- 확인되었다. Platycodin D의 HPLC 정량법을 검토한 결과, 검출기는 증기화광산란검출기 (ELSD)를, 컬럼은역상컬럼을 사용하여 길경 MeOH 추출액으로부터 효율적인 지표성분 정량이 가능하였다. 추출조건을 재검토한 결과 환류추출보다는 초음파 추출이 더 효율적이었으며 추출 용매로는 80% MeOH이 다른 용매조건보다 추출효율이 우수하였다.
- 3). Platycondin D 표준곡선은 상관계수 R2이 0.999로서 고도의 상관성을 보여 정량분석의 검량선으로 충분히 사용할 수 있었다.
- 건조조건은 크게 양건, 양건 후 열풍건조기 건조, 직접 열풍건조기 건조로 나누어 실시하였는데 직접 열풍 건조한 시료에서 가장 지표성분 함량이 많이 측정되었다. 이러한 결과는 50°C 열풍건조 시료가 천일건조(양건)한 시료보다 platycodin D 함량이 더 높다는 Higashi 등 (1997)의 연구와 일치하는 것이었다.
- 추출조건을 재검토한 결과 환류추출보다는 초음파 추출이 더 효율적이었으며 추출 용매로는 80% MeOH이 다른 용매조건보다 추출효율이 우수하였다. 건조조건의 검토에서는 playtcodin D의 함량이 양건이나 양건과 건조기 혼용건조 보다 건조기 단독 건조시 더 높았으며 특히 60°C 열풍건조에서 그 함량이 0.083%로서 가장 높았다. 묽은 에탄올 엑스 함량도 건조기만을 이용한 열풍건조가 양건과 건조기 열풍 건조를 혼용한 방법보다 4% 정도 더 높았다.
- 길경의 부탄올 분획으로부터 지표성분을 분리, 정제하기 위해 SiO2 컬럼크마토그래피를 실시한 결과 1종(화합물 1)의 단일 물질을 순수 분리하였으며 화합물 1의 구조는 1H, 13C NMR 등 분광학적 관측 결과 platycodin D로 확인되었다. Platycodin D의 HPLC 정량법을 검토한 결과, 검출기는 증기화광산란검출기 (ELSD)를, 컬럼은역상컬럼을 사용하여 길경 MeOH 추출액으로부터 효율적인 지표성분 정량이 가능하였다.
- 이러한 결과는 50°C 열풍건조 시료가 천일건조(양건)한 시료보다 platycodin D 함량이 더 높다는 Higashi 등 (1997)의 연구와 일치하는 것이었다. 다만 열풍건조 온도를 좀 더 세분화하여 함량을 측정해 본 결과 60°C에서의 열풍건조시 platycodin D 함량이 0.083%로서 양건시 0.045%보다 1.84배 더 높은 함량을 보였다. 묽은 에탄올 엑스 함량도 60°C 열풍건조시 45.
- Platycodin D의 함량이 고온으로 갈수록 증가되는 것은 건조시간이 단축되므로써 나타나는 효과일 것으로 추정되며 건조 시간이 경과하면서 저온건조시 길경의 2차 대사물의 조성에 변이가 생기는 것으로 생각된다. 따라서 platycodin D 고함유 길경을 생산하기 위해서는 수확 후 건조조건으로 양건보다는 열풍건조기 건조, 특히 60°C에서의 열풍 건조가 적합할 것으로 판단되었다(Table 3).
- 84배 더 높은 함량을 보였다. 묽은 에탄올 엑스 함량도 60°C 열풍건조시 45.8%로서 양건시 42.8%보다 3% 더 높은 함량을 보였다. Platycodin D의 함량이 고온으로 갈수록 증가되는 것은 건조시간이 단축되므로써 나타나는 효과일 것으로 추정되며 건조 시간이 경과하면서 저온건조시 길경의 2차 대사물의 조성에 변이가 생기는 것으로 생각된다.
- 083%로서 가장 높았다. 묽은 에탄올 엑스 함량도 건조기만을 이용한 열풍건조가 양건과 건조기 열풍 건조를 혼용한 방법보다 4% 정도 더 높았다.
- 지표성분의 추출방법은 예비시험에서 기존의 환류 추출보다 초음파 추출이 더 효율적이었으므로 초음파 추출로 적절한 추출용매을 구명하였다. 추출용매는 메탄올과 에탄올을 50%, 80%, 99% 조성별로 비교하였다.
- 추출용매별 platycodin D의 회수율에서는 50% MeOH과 80% MeOH이 다른 용매조건보다 높은 회수량율을 보였는데 80% MeOH은 80% EtOH 보다는 추출지수로서 약 34%정도 더 높은 회수율 보여 가장 적합한 추출 용매로 판단되었다(Table 2).
- Platycodin D의 HPLC 정량법을 검토한 결과, 검출기는 증기화광산란검출기 (ELSD)를, 컬럼은역상컬럼을 사용하여 길경 MeOH 추출액으로부터 효율적인 지표성분 정량이 가능하였다. 추출조건을 재검토한 결과 환류추출보다는 초음파 추출이 더 효율적이었으며 추출 용매로는 80% MeOH이 다른 용매조건보다 추출효율이 우수하였다. 건조조건의 검토에서는 playtcodin D의 함량이 양건이나 양건과 건조기 혼용건조 보다 건조기 단독 건조시 더 높았으며 특히 60°C 열풍건조에서 그 함량이 0.
- 화합물 1의 NMR 스펙트럼 데이터는 문헌과 면밀한 비교 결과 platycodin D의 데이터와 일치하예Kim et al., 1990) 화합물 1은 platycodin D로 최종 동정하였다(Fig. 1).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.