본 연구는 사람의 조혈촉진 유전자(hEPO)가 도입된 형질전환 돼지를 생산하기 위해 사계절동안 수행하였다. 약 8∼15개월령의 순종의 랜드레이스 경산돈 및 미경산돈 42두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG 600 주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다. Altrenogest를 9일간 급여 후 1,500IU의 PMSG와 500IU의 hCG를 주입하므로서 과배란을 유도하였다. 미세주입을 위한 유전자는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터에 hEPO 유전자를 연결하여 준비하였으며, 호르몬 처리후 23두의 공란돈으로 부터 650개의 난자를 회수하였으며, 이 중 83.1%(540/650)는 DNA 미세주입을 위해 전핵을 관찰할 수 있는 1-세포기의 수정란이었다. 이중 유전자가 미세주입 된 543개의 난자를 19두의 수란돈에 이식하였으며 7두의 임신돈으로부터 47두의 자돈을 생산하였다. 생산된 자돈 47두로부터 꼬리조직으로부터 분리된 DNA의 PCR 검정 결과 수컷 1두가 형질전환 양성반응을 나타내어 2.13%의 형질전환율을 나타내었으며, 이러한 연구의 결과는 생체반응기(bioreactor)연구에 있어서 형질전환 돼지생산의 성공적이며 유용한 정보를 제공할 것으로 사료된다.
본 연구는 사람의 조혈촉진 유전자(hEPO)가 도입된 형질전환 돼지를 생산하기 위해 사계절동안 수행하였다. 약 8∼15개월령의 순종의 랜드레이스 경산돈 및 미경산돈 42두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG 600 주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다. Altrenogest를 9일간 급여 후 1,500IU의 PMSG와 500IU의 hCG를 주입하므로서 과배란을 유도하였다. 미세주입을 위한 유전자는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터에 hEPO 유전자를 연결하여 준비하였으며, 호르몬 처리후 23두의 공란돈으로 부터 650개의 난자를 회수하였으며, 이 중 83.1%(540/650)는 DNA 미세주입을 위해 전핵을 관찰할 수 있는 1-세포기의 수정란이었다. 이중 유전자가 미세주입 된 543개의 난자를 19두의 수란돈에 이식하였으며 7두의 임신돈으로부터 47두의 자돈을 생산하였다. 생산된 자돈 47두로부터 꼬리조직으로부터 분리된 DNA의 PCR 검정 결과 수컷 1두가 형질전환 양성반응을 나타내어 2.13%의 형질전환율을 나타내었으며, 이러한 연구의 결과는 생체반응기(bioreactor)연구에 있어서 형질전환 돼지생산의 성공적이며 유용한 정보를 제공할 것으로 사료된다.
This study was performed during the four seasons for the production of transgenic pigs containing the human erythropoietin(hEPO) transgene. Purebred Landrace gilts and sows approximately 8∼15 months of age (n=42) were used fur the collection of 1-cell zygotes for DNA microinjection and transfer. Ret...
This study was performed during the four seasons for the production of transgenic pigs containing the human erythropoietin(hEPO) transgene. Purebred Landrace gilts and sows approximately 8∼15 months of age (n=42) were used fur the collection of 1-cell zygotes for DNA microinjection and transfer. Retrospectively, estrus synchronization and superovulation schemes were evaluated to assess practicality for zygote collection. Synchronization and superovulation procedures were used that cyclic gilts were synchronized with 20mg altrenogest (ALT) per day for 9days after PG600 administration followed by superovulation with 1500IU pregnant mares serum gonadotropin (PMSG) and 500IU human chorionic gonadotrophin (hCG). Preparation of recombinant gene for microinjection is mice whey acidic protein promoter (mWAP) linked to human erythropoietin (hEPO) gene. After hormone treatment, 650 embryos were collected from 23 donors and 83.1% (540/650) embryos were in 1-cell stage which can be visualized the pronuclei for DNA microinjection. A total of 543 DNA microinjected embryos fiom donors were transferred to 19 synchronized recipients, seven of them maintained pregnancy and delivered 47 piglets. One of the 47 offsprings were determined to have transgene by PCR analysis. The overall rate of transgenic production was 2.13% (tansgenic/offspring). This study provides the success and useful information regarding production of transgenic pig for bioreactor research.
This study was performed during the four seasons for the production of transgenic pigs containing the human erythropoietin(hEPO) transgene. Purebred Landrace gilts and sows approximately 8∼15 months of age (n=42) were used fur the collection of 1-cell zygotes for DNA microinjection and transfer. Retrospectively, estrus synchronization and superovulation schemes were evaluated to assess practicality for zygote collection. Synchronization and superovulation procedures were used that cyclic gilts were synchronized with 20mg altrenogest (ALT) per day for 9days after PG600 administration followed by superovulation with 1500IU pregnant mares serum gonadotropin (PMSG) and 500IU human chorionic gonadotrophin (hCG). Preparation of recombinant gene for microinjection is mice whey acidic protein promoter (mWAP) linked to human erythropoietin (hEPO) gene. After hormone treatment, 650 embryos were collected from 23 donors and 83.1% (540/650) embryos were in 1-cell stage which can be visualized the pronuclei for DNA microinjection. A total of 543 DNA microinjected embryos fiom donors were transferred to 19 synchronized recipients, seven of them maintained pregnancy and delivered 47 piglets. One of the 47 offsprings were determined to have transgene by PCR analysis. The overall rate of transgenic production was 2.13% (tansgenic/offspring). This study provides the success and useful information regarding production of transgenic pig for bioreactor research.
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문제 정의
따라서 본 연구는 고가의 의료용 단백질인 사람의 조혈촉진인자(h旧PO)를 도입하여 고생리활성물 질을 유즙으로 분비하는 형질전환돼지를 생산하는데 그 목적이 있다고 하겠다.
Table 3에서 제시된 것과 같이 사람과 돼지 EPO cDNA의 상동성은 86%로 monkey와의 93%에 비하여서는 낮은 상동성을 나타내지만 다른 종간의 상동성보다는 높다는 것을 알 수 있다. 따라서 본 연구에서는 사람 게놈 EPO 유전자에서 두 곳을 증폭하여 돼지와의 상동성으로 인한 PCR 검정의 오류를 방지하도록 하였는데 그 모식도를 Fig. 2에 나타내었다.
본 연구는 사람의 조혈촉진 유전자 <hEPO)가 도입된 형질전환돼지를 생산하기 위해 사계절 동 안 수행하였다. 약 8〜15개월령의 순종의 랜드레이스 경산돈 및 미경산돈 42두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG 600주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다.
제안 방법
K4600-10) 벡터에 클로닝하여 초원심 분 리 방법으로 순수 정제시킨 후 EcoR I과 BamH [제한효소로 목표하는 부위만을 절단하였다. 제한효소 처리된 단편들을 0.9% 아가 로즈겔 전기영동 후, 수정란 주입용 DNA단편(7.8kb)만 얻어내어 Gel Extraction Kit(Qiagen; Cat. No. 28704)를 이용, 이들의 DNA단편을 아가 로즈로부터 회수하고 2회 정제하였으며, 최종 농도는 2〜4 ng/"l로 희석하여 미세 주입용 발현벡터로 준비하였다.
Altrenogest(Regumate, Hoechst Roussel Pharma ceuticals Inc., Somerville, NJ)를 발정 주기 12일부터 14일 사이에 매일 두 당 사료 2kg에 20tng을 혼합하여 9일간 급여하였으며 그 후과배 란은 PMSG (Intervert International, B.V Boxmeer, Holland)를 1000IU 근육 주사한 후 72시간이 경과되었을 때 750IU의 hCG를 근육 주사하여 과 배란을 실시한다.
약 8〜15개월령의 순종의 랜드레이스 경산돈 및 미경산돈 42두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG 600주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다. Altrenogest를 9일간 급여 후 l, 500IU의 PMSG와 500IU의 hCG를 주입하므로서 과 배란을 유도하였다. 미세 주입을 위한 유전자는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터에 hEPO 유전자를 연결하여 준비하였으며, 호르몬 처리 후 23두의 공란 돈으로 부터 650개의 난자를 회수하였으며, 이 중 83.
TAP-201)로 하였다. PCR을 수행하기 위한 조건은 94°C에서 4분간 전처리를 한 후 94°C에서 1분, 58°C에서 1분, 74°C에서 1분간 30cycle를 반복하고 다시 74°C에서 4분간 수행한 후, PCR산 물은 2.5% 아가 로즈 겔(0.5X TBE) 전기영동을 실시하여 형질전환 여부를 판별하였다.
hCG(Intervert International, B.V Boxmeer, Holl and) 투여 후 매일 09시와 18시에 2회씩 육안적 관찰을 실시하여 점액의 유무, 음부의 상태 및 부동자세 등 발정 초기 증상이 나타난 종빈돈에 한하여성성숙된 수퇘지를 접촉시켜 최초 수퇘지 허용 시 1회 자연교배를 실시하였으며 1회 자연교배후 24시간에 2회 교배를 실시하였다.
마취제로는 하이프노딜(JANSSEN, German) 7~8 ml를 돼지 귀정맥에 주입하여 1차 마취를 실시하고, 그 후가연성 흡입 마취제인 할로탄 가스(신성신약) 3〜5%를 산소(600〜 1, 000ml/분) 순환 시스템에 연결하여 마취 상태를 유지시키면서 공란돈의 난관은 자궁-난관접합부에 18gage주사바늘을 이용하여 1회용 주사기로 1% BSA(Sigma, USA)와 항생제를 혼합한 25ml의 D-PBS(Gibco, USA)를 난관관류시킴으로써 수정란을 회수하였다. 관류된 D-PBS는 멸균시험 튜브에 수집하여 실온에서 난자를 회수하여 실체현미경상에서 수정 유무를 판단한 후 1세포 기 수정란만을 이용하였다.
돼지의 수정란을 이식하여 산자를 생산할 목적으로 외과적인 방법에 의해서 수정란이식을 실시하였다. 먼저 호르몬 처리에 의해서 발정이 동기화된 수란돈 또는 자연적으로 발정 주기가 동기화된 수란 돈을 전신 마취하였다.
먼저 호르몬 처리에 의해서 발정이 동기화된 수란돈 또는 자연적으로 발정 주기가 동기화된 수란 돈을 전신 마취하였다. 마취된 수란 돈의 정중선을 중심으로 광범위하게 면도기를 이용하여 털을 제거하고 소독을 실시한 다음 정 중선을 따라 약 10〜 15cm를 절개하여 생식기를 노출시킨 후 난소 표면의 황체의 존재를 확인한 후, 재조합 유전자가 미세주입된 20〜50개의 수정란을 polycate- ther (Cook, Austraila)를 이용하여 난관팽대부에 주입하였다.
마취제로는 하이프노딜(JANSSEN, German) 7~8 ml를 돼지 귀정맥에 주입하여 1차 마취를 실시하고, 그 후가연성 흡입 마취제인 할로탄 가스(신성신약) 3〜5%를 산소(600〜 1, 000ml/분) 순환 시스템에 연결하여 마취 상태를 유지시키면서 공란돈의 난관은 자궁-난관접합부에 18gage주사바늘을 이용하여 1회용 주사기로 1% BSA(Sigma, USA)와 항생제를 혼합한 25ml의 D-PBS(Gibco, USA)를 난관관류시킴으로써 수정란을 회수하였다. 관류된 D-PBS는 멸균시험 튜브에 수집하여 실온에서 난자를 회수하여 실체현미경상에서 수정 유무를 판단한 후 1세포 기 수정란만을 이용하였다.
1과 같다. 먼저 클로닝된 약 2.6 kb 의 mouse Whey Acidic Protein(mWAP) 프로모터 하류에 약 2.6kb의 사람 게놈 Eiythropoietin 유전자(hEPO)를 연결하였으며, hEPO 후반부에는 SV40 poly A(2.6 kb) 부분이 존재하도록 재조합하여 전체 7.8 kb의 미세 주입용 발현벡터를 제작하였다 (Fig. 1).
돼지의 수정란을 이식하여 산자를 생산할 목적으로 외과적인 방법에 의해서 수정란이식을 실시하였다. 먼저 호르몬 처리에 의해서 발정이 동기화된 수란돈 또는 자연적으로 발정 주기가 동기화된 수란 돈을 전신 마취하였다. 마취된 수란 돈의 정중선을 중심으로 광범위하게 면도기를 이용하여 털을 제거하고 소독을 실시한 다음 정 중선을 따라 약 10〜 15cm를 절개하여 생식기를 노출시킨 후 난소 표면의 황체의 존재를 확인한 후, 재조합 유전자가 미세주입된 20〜50개의 수정란을 polycate- ther (Cook, Austraila)를 이용하여 난관팽대부에 주입하였다.
Altrenogest를 9일간 급여 후 l, 500IU의 PMSG와 500IU의 hCG를 주입하므로서 과 배란을 유도하였다. 미세 주입을 위한 유전자는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터에 hEPO 유전자를 연결하여 준비하였으며, 호르몬 처리 후 23두의 공란 돈으로 부터 650개의 난자를 회수하였으며, 이 중 83.1%(540/650)는 DNA 미세 주입을 위해 전핵을 관찰할 수 있는 1-세포기의 수정란이었다. 이중 유전자가 미세 주입 된 543개의 난자를 19두의 수란 돈에 이식하였으며 7두의 임신 돈으로부터 47두의 자돈을 생산하였다.
재조합 발현벡터는 다시 pCRII-TOPO (Invitrogen; Cat. No. K4600-10) 벡터에 클로닝하여 초원심 분 리 방법으로 순수 정제시킨 후 EcoR I과 BamH [제한효소로 목표하는 부위만을 절단하였다. 제한효소 처리된 단편들을 0.
PCR 검정을 위해 사용된 primer는 hEPO 게놈의 exon 2 와 3을 증폭하는 304 bp 단편을, intron 3과4를 증폭하는 567 bp 크기의 단편을 증폭할 수 있도록 제작하였다. 제작된 mWAP-hEPO304(Forward; 5'-CgA gAA TAT CAC ggT AgA ACC-3', Reverse; 5'- CTC ATT CAA gCT gCA gTg TTC-3, )와 mWAP -hEPO567 (Forward; 5*-AAg Tgg TgC ATg gTg gTA gTC-3', Reverse; 5'-TTA CAg AAA ggg CAA gCA gAA-3') primer를 이용 PCR을 수행하였는데, 반응 총액은 25“1로 하였고 tDNA는 100〜200ng, primer는 각각 20 pmole, 중합효소는 lunit(Toyobo; Cat. No.TAP-201)로 하였다. PCR을 수행하기 위한 조건은 94°C에서 4분간 전처리를 한 후 94°C에서 1분, 58°C에서 1분, 74°C에서 1분간 30cycle를 반복하고 다시 74°C에서 4분간 수행한 후, PCR산 물은 2.
수정란이식 후분만된 자돈의 꼬리 조직을 채취한 후 Sambrook과 Russell(2001)의 페놀 방법으로 게놈DNA를 추출하였다. 추출된 게놈 DNA는 PCR 을 하기 위해 25 ng//zl 농도로 희석하였다. PCR 검정을 위해 사용된 primer는 hEPO 게놈의 exon 2 와 3을 증폭하는 304 bp 단편을, intron 3과4를 증폭하는 567 bp 크기의 단편을 증폭할 수 있도록 제작하였다.
대상 데이터
추출된 게놈 DNA는 PCR 을 하기 위해 25 ng//zl 농도로 희석하였다. PCR 검정을 위해 사용된 primer는 hEPO 게놈의 exon 2 와 3을 증폭하는 304 bp 단편을, intron 3과4를 증폭하는 567 bp 크기의 단편을 증폭할 수 있도록 제작하였다. 제작된 mWAP-hEPO304(Forward; 5'-CgA gAA TAT CAC ggT AgA ACC-3', Reverse; 5'- CTC ATT CAA gCT gCA gTg TTC-3, )와 mWAP -hEPO567 (Forward; 5*-AAg Tgg TgC ATg gTg gTA gTC-3', Reverse; 5'-TTA CAg AAA ggg CAA gCA gAA-3') primer를 이용 PCR을 수행하였는데, 반응 총액은 25“1로 하였고 tDNA는 100〜200ng, primer는 각각 20 pmole, 중합효소는 lunit(Toyobo; Cat.
본 연구는 사람의 조혈촉진 유전자 <hEPO)가 도입된 형질전환돼지를 생산하기 위해 사계절 동 안 수행하였다. 약 8〜15개월령의 순종의 랜드레이스 경산돈 및 미경산돈 42두는 유전자 미세주입을 위한 1세포기 단계의 수정란 채란 및 이식을 위해 사용하였으며, 발정동기화 및 과배란 방법은 PG 600주입 후 9일간 매일 20mg의 altrenogest를 사료에 첨가하여 급여하였다. Altrenogest를 9일간 급여 후 l, 500IU의 PMSG와 500IU의 hCG를 주입하므로서 과 배란을 유도하였다.
1%(540/650)는 DNA 미세 주입을 위해 전핵을 관찰할 수 있는 1-세포기의 수정란이었다. 이중 유전자가 미세 주입 된 543개의 난자를 19두의 수란 돈에 이식하였으며 7두의 임신 돈으로부터 47두의 자돈을 생산하였다. 생산된 자돈 47두로부터 꼬리 조직으로부터 분리된 DNA의 PCR 검정 결과 수컷 1두가 형질 전환 양성 반응을 나타내어 2.
이론/모형
이러한 재조합 유전자를 이용한 생명공학의 발달로 최근에는 인체고가 의료용 생리활성물질 중의 하나인 사람의 조혈촉진 유전자(human erythro poietin : hEPO)가 도입된 형질전환 동물을 생산하기 위해 외국의 많은 연구자들이 형질전환 연구를 하고 있는 것으로 보고(Mikus 등, 2001; Divoky 등, 2001; Kirby, 1999; Kochling 등, 1998; Aguirre 등, 1998; Korhonen 등, 1997; Massoud 등, 1996; Rodriguez 등, 1995; Semenza 등, 1989, 1990)가 있으나 대가축(소 또는 돼지)에서는 성공한 사례가 없고 본 연구의 돼지를 이용한다는 면에서 성공 가능성이 기대되고 있다. 또한 유용유전자를 도입한 형질전환 동물에서의 물질 분비를 위하여 많은 pro- moter의 연구가 이루어지고 있으며 본 연구에서는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터를 이용하여 돼지의 유즙으로 유용물질의 분비를 유도하기 위하여 이용하였다(Mikus 등, 2001; Inuzuka 등, 2001; Barash 등, 1999; Lee 등, 1998; Van Cott 등, 1997; Wall, 1996; Wall 등, 1996). 한편 일반적인 수정란 전핵 내 미세 주입에 의한 형질전환 동물 생산 효율은 소를 포함한 가축에 있어 효율이 1% 전후로 낮으며, 초기 배 발달과 임신율에서도 감소하는 경향이 있다고 보고(Wall 등, 1985; Eye stone, 1994) 하였으나 본 연구에서 는 많은 연구자들이 사용하고 있는 체내 수정란을 이용한 미세 주 입 방법을 이용하였다 (Persei과 Wall.
수정란이식 후분만된 자돈의 꼬리 조직을 채취한 후 Sambrook과 Russell(2001)의 페놀 방법으로 게놈DNA를 추출하였다. 추출된 게놈 DNA는 PCR 을 하기 위해 25 ng//zl 농도로 희석하였다.
또한 유용유전자를 도입한 형질전환 동물에서의 물질 분비를 위하여 많은 pro- moter의 연구가 이루어지고 있으며 본 연구에서는 mouse whey acidic protein(mWAP) 프로모터를 이용하여 돼지의 유즙으로 유용물질의 분비를 유도하기 위하여 이용하였다(Mikus 등, 2001; Inuzuka 등, 2001; Barash 등, 1999; Lee 등, 1998; Van Cott 등, 1997; Wall, 1996; Wall 등, 1996). 한편 일반적인 수정란 전핵 내 미세 주입에 의한 형질전환 동물 생산 효율은 소를 포함한 가축에 있어 효율이 1% 전후로 낮으며, 초기 배 발달과 임신율에서도 감소하는 경향이 있다고 보고(Wall 등, 1985; Eye stone, 1994) 하였으나 본 연구에서 는 많은 연구자들이 사용하고 있는 체내 수정란을 이용한 미세 주 입 방법을 이용하였다 (Persei과 Wall. 1996; Bowen 등, 1994; Eyestone, 1994; Hill 등, 1992).
성능/효과
Fig. 2에서와 같이 구축한 primer(mWAP-hEPO 304, 567)를 이용하여 PCR 수행 후 전기영동 결과를 VI74 DNA-HaeM 와 pBR322 DNA-Haeffl Size marker와 비교한 결과 예측된 크기의 304와 567bp에서 band를 확인할 수 있었다.
Fig. 3(A)에서 나타난 것과 같이 mWAP-hEPO 567 primer를 사용하여 생산된 자돈에 대해 PCR 검정을 수행한 결과 0-74번 개체에서 PC와 동일한 크기의 567bp 단편을 확인할 수 있었으며, Fig. 3 (B)에서도 mWAP-hEPO304 primer를 사용한 결과 0-74번 개체가 PC와 같은 304 bp 단편이 확인되었다. 따라서 0-74번 개체가 사람의 조혈촉진 유전자 (hEPO)가 형질전환된 것으로 판명하였으며, 그 개체는 수컷으로 나타났다.
Fig. 4에 나타났듯이 꼬리 조직과 혈액 및 정액의 정자로부터 추출된 DNA에서도 모두 567bp와 304bp 크기의 단편이 PCR 재검정으로 확인되어 사람의 조혈촉진 유전자가 다음 세대로의 전이 가능하다는 것이 밝혀졌다.
Table 3에서 제시된 것과 같이 사람과 돼지 EPO cDNA의 상동성은 86%로 monkey와의 93%에 비하여서는 낮은 상동성을 나타내지만 다른 종간의 상동성보다는 높다는 것을 알 수 있다. 따라서 본 연구에서는 사람 게놈 EPO 유전자에서 두 곳을 증폭하여 돼지와의 상동성으로 인한 PCR 검정의 오류를 방지하도록 하였는데 그 모식도를 Fig.
수정란의 발달 단계에 대한 변이는 배란 시점에서의 조절이 중요하므로 배란 유기시 hCG 주입 시기에 의해 좌우될 수 있다 (Soede 등, 1992). 그러므로 우리의 결과는 hCG 주입 농도를 500내지 750 IU를 주입함으로써 과배란을 유기할 수 있었으며 동기화된 One cell stage 의 수정란을 회수할 수 있었다. 이식 시 수정란의 수가 임시율에 미치는 영향에 관한 연구는 Brem 등(1985), Wei 등(1993)에 의해 보고되었으며 우리의 보고되지 않은 결과에 의하면 21〜24개의 수정란을 이식 시 그보다 적거나 많은 수의 수정란 이 식시보다 약간의 차이를 보였는데 이것은 1993년 Wei 등의 보고와 거의 유사한 것으로.
3 (B)에서도 mWAP-hEPO304 primer를 사용한 결과 0-74번 개체가 PC와 같은 304 bp 단편이 확인되었다. 따라서 0-74번 개체가 사람의 조혈촉진 유전자 (hEPO)가 형질전환된 것으로 판명하였으며, 그 개체는 수컷으로 나타났다. 이렇게 분만 모돈 7두로부터 생산된 47두의 자돈에 대하여 PCR 검정을 수행한 결과를 Table 4에 나타내었다.
이중 유전자가 미세 주입 된 543개의 난자를 19두의 수란 돈에 이식하였으며 7두의 임신 돈으로부터 47두의 자돈을 생산하였다. 생산된 자돈 47두로부터 꼬리 조직으로부터 분리된 DNA의 PCR 검정 결과 수컷 1두가 형질 전환 양성 반응을 나타내어 2.13%의 형질전환율을 나타내었으며, 이러한 연구의 결과는 생체반응기(bioreactor) 연구에 있어서 형질전환돼지생산의 성공적이며 유용한 정보를 제공할 것으로 사료된다.
호르몬 처리에 의한 발정동기화 및 과배란 처리된 돼지의 외과적인 방법에 의한 과배란 및 수정 란 회수 성적은 Table 1과 같다. 총 23두의 공란 돈 으로부터 738개의 황체수를 확인하여 650개의 난자를 회수하였으며 회수율은 88.08%로 나타났다. 외수된 난자 중, 1세포기 단계의 수정란은 540개로 전체 회수난 중 83.
후속연구
후에 머물고 있는 실정이다(Wall 등, 1985). 결과적으로 우리의 data에서 보는 바와 같 이 미세주입방법을 통한 형질전환 가축을 생산하 기 위한 단계는 복잡하며 생산 효율이 낮을 뿐 아 니라 많은 인력과 돈을 필요로 하는 분야이므로 이러한 문제점을 극복하기 위한 새로운 방법들이 많이 시도되고는 있으나 그러한 방법들 또한 이론 적 배경과는 달리 성공률이 극히 저조한 편이며 그럼에도 불구하고 성공시 경제적 효과 등을 고려 한다면 형질전환 가축생산을 위한 연구는 지속적 으로 발전할 것이며 결론적으로 본 연구 결과로서 생산된 형질전환돼지는 돼지 사육에 있어 사료 효 율을 높이고 생산성을 향상시키는 데 일조할 것으로 기대한다.
참고문헌 (44)
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Barash, I., Faermanm, A., Richenstein, M., Kari, R, Damary, G. M., Shani, M. and Bissell, M. J. 1999. In vivo and in vitro expression of human serum albumin genomic sequences in mammary epithelial cells with beta-lactoglobulin and whey acidic protein promoters Mol. Reprod. Dev., 52(3):241-252
Bowen, R. M. R., Schnieke, A., Seidel, G., Brink, Z., Stacey, A., Thomas, W. and Kajikawa, K. 1994. Transgenic cattle resulting from biopsied embryos: Expression of c-ski in a transgenic calf. BioI. Reprod., 6:647-652
Brem, G., Brenig, B., Goodman, H. M., Selden, R. C., Graf, F., Kruff, B., Springman, K., Hondele, J., MEyer, J., Winnaker, E-I. and Krausslich, H. 1985. Production of transgenic mice, rabbit and pigs by microinjection into pronuclei. Zuchthygiene, 20:251-252
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