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문제 정의
- 따라서 본 연구는 녹용을 분리 정제한 녹용약침 (N, 약침 학회 부설 약침 연구소)을 배 양액 에 첨가한 후 정액에 처리하여 정자의 운동성에 미치는 영향과, 이의 불임치료로의 적용가능성을 알아보고자 시행하였다.
- 본 연구에서는 한방의학에서 가장 중요한 약재 중의 하나인 녹용을 정자의 처리에 있어 녹용약침액 상태로 배양액에 첨가 후 정자에 미치는 영향을 운동성 측면에서 비교해 보았다. 정상정액군에서는 Ham's F-10 배양액에 0.
제안 방법
- 1) 항에 서 준비 된 Ham's F-10에 BSA를 0.3% 첨가하였다.
- Milli-Q(Millipore Co., USA) 장치에서 준비한 물 700ml에 Ham's F-10 1 봉지를 녹인 후 Sodium Bicarbonate 1.6804g//, Calcium Lactate 0.02452g/ Potassium Bicarbonate 0.5076g//를 각기 다른 tube에서 녹인 후 섞은 다음, Penicillin-Streptomy- cin(10, 000IU)을 10ml// 첨가한 후 최종배양액 양이 1000mlo] 되도록 Milli-Q 물을 첨가하였다. 이때 pH를 7.
- 정액 표본을 Ham's F-10 배양액으로 세척한 후에 4군으로 나누었다. 각각을 대조군과 실험군의 네가지 배양액으로 세척한 후, swim-up을 실시하여 운동성 있는 정자를 분리하고 이것을 5% CO2, 37℃ 조건의 배양기에서 1시간, 3시간, 24시간, 48시간, 72시간 동안 배양한 후 각각 정자의 운동성을 Hamilton-Thom (Version 10.6, HTM-IVOS, USA)을 이용하여 분석하였다.
- 위의 3)항에서 제조된 media 10ml에 0.03g의 BSA를 녹인 다음 0.22필터로 여과하여 제균하였다.
- 적어도 48〜72 시간의 금욕기간을 가진 환자로부터 수음으로 채취된 정액을 사용하였으며, 30분 정도 실온에서 액화시킨 후 WHO 기준에 의한 정액 검사를 실험 전과 후에 실시하였다. 정액 표본을 Ham's F-10 배양액으로 세척한 후에 4군으로 나누었다.
- 정상정액군과 무력정자증을 보이는 정액 군을 대상으로 4가지 다른 배양액에서 Swim-up을 실시하고 회수된 정자의 수를 살펴보았다. 정액 성상이 정상인 군에서 swim-up 실시 후의 정자의 수는 Ham's F-10 배양액과 Ham's F-10에 0.
- 실험 전과 후에 실시하였다. 정액 표본을 Ham's F-10 배양액으로 세척한 후에 4군으로 나누었다. 각각을 대조군과 실험군의 네가지 배양액으로 세척한 후, swim-up을 실시하여 운동성 있는 정자를 분리하고 이것을 5% CO2, 37℃ 조건의 배양기에서 1시간, 3시간, 24시간, 48시간, 72시간 동안 배양한 후 각각 정자의 운동성을 Hamilton-Thom (Version 10.
대상 데이터
- 녹용은 각각 사용된 양과 질에 있어 규격화된 포장이나 기준이 없었으나 최근 한국약침학회 부설 약침연구소에서 한약의 경구투약이라는 한계를 극복하며 보편적 활용 기반을 확보하고 또한 임상 활용도를 높이기 위하여 규격화로 제조된 녹용 약침 [N; 녹용(100%)-분쇄 - 퍼콜레 이터 에 충전 - 추출 및 여과(3차 여과) -3일간 동결건조 - 소분(권 등, 1997)]을 본 실험에 사용하였다.
- 대조군의 배양액으로는 Ham's F-10 배양액(Gibco BRL, USA)을 사용하였고 대조군 배양액에 0.3% 우혈청 알부민(BSA, bovine serum albu min, Sigma, USA)을 포함한 배양액을 배양액 A, 대조군 배양액에 녹용약침 (0.02g 소분; N + 20ml Ham's F-10) 을 첨가한 배양액을 배 양액 B, 그리고 배 양액 B에 0.3% BSA를 첨 가한 배 양액을 배 양액 C라 하였으며, 이의 준비 과정은 다음과 같다.
- 본 실험을 위하여 4가지 서로 다른 배양액을 준비하였다. 대조군의 배양액으로는 Ham's F-10 배양액(Gibco BRL, USA)을 사용하였고 대조군 배양액에 0.
- 본 연구는 1998년 11월부터 1999년 3월 사이 차병원 여성의학연구소에 내원하여 정액검사를 받은 환자를 대상으로 실시하였다. 연구는 세계보건기구(WHO)의 기준에 의 하여, 정 액량이 2.
- 대상으로 실시하였다. 연구는 세계보건기구(WHO)의 기준에 의 하여, 정 액량이 2.0ml 이상, 정자수 20x10%^ 이 상, 운동성 50% 이 상의 정상인 분석 결과를 보이는 14명의 환자의 정액과 정액량, 정자수는 정상이며 운동성이 50% 미만인 무력정자증을 보이는 14명의 환자의 정액을 대상으로 시행하였다.
데이터처리
- 본 연구의 결과는 One-way ANOVA test로 유의성을 검정하였다.
성능/효과
- 1%로서 운동성이 시간이 지남에 따라서 감소하지만, 그 감소의 폭이 훨씬 적었다. 48시간이 지난 후에는 Ham's F-10, Ham's F・10에 녹용약침액만 넣은 경우에는 정자운동성이 관찰되지 않았으나 Ham's F・10에 BSA가 첨가된 경우에는 8.8%의 운동성이, Ham's F-10에 BSA와 녹용약침액을 같이 넣은 경우에는 44.9%의 정자운동성이 관찰되었다. 72시간이 지난 후 정자운동성을 관찰했던 결과 녹용 성분이 들어간 경우만 4.
- 9%의 정자운동성이 관찰되었다. 72시간이 지난 후 정자운동성을 관찰했던 결과 녹용 성분이 들어간 경우만 4.0%의 운동성이 관찰되었다(Table 2). 그리고 model effect를 분석한 P값은 swim-up, lh, 3h, 24h, 48h 그리고 72h에서 각각0.
- 0%의 운동성이 관찰되었다(Table 2). 그리고 model effect를 분석한 P값은 swim-up, lh, 3h, 24h, 48h 그리고 72h에서 각각0.01 이하로 유의한 차이가 있었다.
- 1%로서 큰 차이가 없었다. 또한 3일까지 정자를 배양하면서 관찰한 정자의 운동성을 보면, 배양 1〜3 시 간까지 의 관찰에 서는 4군 모두 비슷하게 정자의 운동이 유지되었지만, 24시간이 지난 후에 정자운동성을 관찰하였을 때 Ham's F-10과 Ham's F-10에 녹용약침 액만 들어간 경우에는 정자운동성 이 각각 4.1%와 1.3%로서 급격히 떨어지는 것이 관찰되었다. 반면에 Ham's F-10에 0.
- 그러나 녹용 약침 액을 단독으로 배양액에 첨가한 경우에는 정자 운동성 증진 및 유지에 별다른 도움을 주지는 못했다. 또한 BSA를 단독으로 배 양액 에 첨 가했을 때에도 배양액에 녹용약침액 및 BSA를 둘 다 첨가한 결과보다도 상당히 낮은 정자운동성이 관찰되었다. 특히 정액성상이 정상인군에 비해 무력정자 군의 경우 BSA가 첨가된 실험군에서 배양 후 24시간째에 정자의 운동성이 BSA와 녹용약침액을 같이 첨가한 실험군에 비해 좀더 급격히 떨어지는 경향을 보여주고 있다.
- 6%(48시간)로서 다른 3가지 배양액에서 정자를 배양했을 때보다 높은 정자운동성이 관찰되었다(Table 3). 또한 model effect를 분석한 P값은 swim-up, lh, 3h, 24h, 48h 그리고 72h에서 각각 0.01 이하로 유의한 차이가 있었다.
- 본 연구에서는 한방의학에서 가장 고귀한 약재 중의 하나인 녹용을 추출물 형태인 녹용약침액 상태로 배양액에 첨가 후 정자를 처리하여 3일 동안 관찰한 결과 정자의 운동성에 있어 녹용약침액에 0.3% BSA가 첨가된 배양액에서 운동성이 유지능력이 유지되는 것을 관찰하였다. 그러나 녹용 약침 액을 단독으로 배양액에 첨가한 경우에는 정자 운동성 증진 및 유지에 별다른 도움을 주지는 못했다.
- 본 연구의 결과로 미루어 보아 녹용의 어떠한 성분이 인간정자의 운동성을 유지시키는 것이라 사료되지만 그것이 단독적으로 영향을 미치는 것이 아니라 알부민과 같은 물질과 상호작용을 하여 상승작용을 일으키는 것으로 사료된다. 따라서 인공 수정이나 체외수정 시에 정자의 처리에 있어 녹용 약침 액을 첨가하면 정자의 운동성 유지에 도움이 되나, 본 연구는 정자만을 대상으로 하였기 때문에 체외수정 시에 난자에게 녹용약침액이 어떤 영향을 미치는지는 추가로 연구를 해야 할 것으로 사료된다.
- 운동성 측면에서 비교해 보았다. 정상정액군에서는 Ham's F-10 배양액에 0.3% BSA가 첨 가된 너H 양액과 Ham's F-10 배 양액에 0.3% BSA와 녹용약침액이 같이 첨가된 배양액에서 24시간 배양한 정자의 운동성 이 높았으며 48시 간동안 배 양 후의 운동성은 BSA와 녹용약침액이 같이 들어간 경우에서 다른 배양액과 비교하여 높은 정자의 운동성이 관찰되었다. 무력 정자증을 보이는 정액 군에서도 같은 양상을 보여주었다.
- 정액성상이 비정상인 무력정자군의 최초 정액양은 4.4± 1.8ml, 운동성은 75.3±31.7%이고 pH는 7.5±0.3이었으며 이 경우에도 배양시간에 따른 정자 운동성의 변화는 비슷한 양상을 띠어서 1〜3시간까지 의 정자운동성은 4가지 다른 배 양액에 서 비슷하게 나왔으나 24시간, 48시간이 지나면서 Ham's F-10에 BSA와 녹용약침액이 들어간 경우에만 85.19Q4시간), 29.6%(48시간)로서 다른 3가지 배양액에서 정자를 배양했을 때보다 높은 정자운동성이 관찰되었다(Table 3). 또한 model effect를 분석한 P값은 swim-up, lh, 3h, 24h, 48h 그리고 72h에서 각각 0.
후속연구
- 일으키는 것으로 사료된다. 따라서 인공 수정이나 체외수정 시에 정자의 처리에 있어 녹용 약침 액을 첨가하면 정자의 운동성 유지에 도움이 되나, 본 연구는 정자만을 대상으로 하였기 때문에 체외수정 시에 난자에게 녹용약침액이 어떤 영향을 미치는지는 추가로 연구를 해야 할 것으로 사료된다.
- 무력 정자증을 보이는 정액 군에서도 같은 양상을 보여주었다. 본 연구의 결과로 미루어 녹용 성분(녹용약침액)을 포함한 배양액의 처리가 정자의 회수율을 증진시키고, 체외배양시 회수되는 정자의 운동성 유지에 상당한 효과가 있음을 알 수 있었고, 인공수정이나 시험관 아기 시술에 미치는 영향에 대한 추가의 연구가 필요하다고 사료된다.
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