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문제 정의
- 보호살균제에 대한 감수성. EBI에 대하여 저항성 균주와 감수성인 균주의 보호살균제에 대한 감수성을 조사하였다. 보호용 살균제로 알려진 iminoctadine-triacetate, chlorothaonil, dithianon, propieneb를 사용하여 위에서 서술한 것과 같은 한천희석법으로 균사 생장 억제 효과를 조사하였다.
제안 방법
- 탄저병균의 포자형성 실험. 2001-45, 2001-44, JC24균주의 포자 형성능을 조사하기 위하여 PDA에 이식하여 25℃의 암상태에서 5, 10, 15일간 배양한 후 20 m/의 증류수를 가하고 배지 표면을 긁어 균사와 포자를 현탁하였다. 현탁액은 4겹의 가제에 걸러서 균사와 배지의 찌꺼기를 제거하고, 현탁액 중의 포자수를 혈구계산기로 조사하였다.
- 이때 DMSO 의 최종농도는 1%가 되도록 조절하였다. 25℃의 PDA에서 배양한 균총의 선단을 직경 5 mm로 절취하여 살균제가 첨가된 PDA에 균사면이 배지에 닿게 접종하고 25℃ 에서 5~7일간 배양한 후, 균총의 직경을 측정하였다. 약제의 균사 생장 억제 효과는 1%의 DMSO만을 첨가한 PDA에서 자란 균총의 직경에 대한 약제 첨가 배지에서의 균총의 직경으로 아래의 식에서 균사 생장 억제율을 구하였다.
- DMSO(demethyl sulfoxide)에 용해하여 멸균된 PDA(potato dextrose agar)에 소정 농도가 되도록 첨가하고, 직경 9 cm의 petri dish에 약 10 씩 분주하였다. 이때 DMSO 의 최종농도는 1%가 되도록 조절하였다.
- 보호용 살균제로 알려진 iminoctadine-triacetate, chlorothaonil, dithianon, propieneb를 사용하여 위에서 서술한 것과 같은 한천희석법으로 균사 생장 억제 효과를 조사하였다. Iminoctadine-triacetate, chlorothaonil, dithianon에대하여는 첨가한 배지에서의 살균제의 최종 농도는 500, 50, 5, 0.5 |4_g/mZ로 하였고, propieneb는 500, 250, 125, 62.5 |ig/mZ에서 실험 하였다.
- gloeosporioides와 C. acutatuni) 균주를 사용하여 EBI에대한 감수성 정도를 조사하였다. 탄저병의 방제에 사용되는 EBI(Table 1)를 PDA에 최종농도가 50, 5, 0.
- 선발된 2001-45, 2001-44, JC24 균주의 고추에 대한 병원성 정도를 검정하기 위하여 청옥 고추(농우 바이오)를 실험에 사용하였다. 각 균주의 포자현탁액의 포자 농도를 iX1067H/m/S 조절한 후 고추의 표면에 5씩 점적하여 접종하였다. 고추의 표면은 70%의 methanol로 잘 닦은 다음, 표면에 핀으로 상처를 내고 접종하는 상처 접종과 무상처 접종을 실시하였다.
- 각 균주의 포자현탁액의 포자 농도를 iX1067H/m/S 조절한 후 고추의 표면에 5씩 점적하여 접종하였다. 고추의 표면은 70%의 methanol로 잘 닦은 다음, 표면에 핀으로 상처를 내고 접종하는 상처 접종과 무상처 접종을 실시하였다. 접종한 고추는 25℃의 암 상태의 습실에 1주일간 보관하고 발병 여부를 조사하였다.
- 온도별 균사생장. 균사 생장 억제실험에서 EBI 저항성으로 판별된 2001-45와 감수성으로 판별된 2001-44, JC24 균주의 균사 생장에 미치는 온도의 영향을 조사하기 위하여 PDA배지에 이식하고, 20, 25, 3(FC에서 배양하여, 7 일 후 균총의 직경을 측정하였다.
- 1 m/씩 도말하였다. 도말한 배지를 25℃의 암 상태에서 3일간 배양한 후 형성된 균총의 균사 선단 부위를 잘라 새로운 PDA에 이식하였다. 순수분리된 탄저병균은 PDA 사면 배지에 배양, 4℃에 보관하면서 각종 실험에 사용하였고, 장기간 보관을 위하여 6%의 DMSO 용액에 넣어 -70℃서 보관하였다.
- 온도별 균사생장 실험. 선발된 2001-44, JC24, 2001- 45을 201, 25℃, 30℃에서 각각 7일간 배양한 후 균총의 직경을 측정하였다. 저항성인 2001-45는 감수성인 2001- 44와 모든 실험 온도에서 비슷한 균사 생장을 보였다(Fig.
- 25℃의 PDA에서 배양한 균총의 선단을 직경 5 mm로 절취하여 살균제가 첨가된 PDA에 균사면이 배지에 닿게 접종하고 25℃ 에서 5~7일간 배양한 후, 균총의 직경을 측정하였다. 약제의 균사 생장 억제 효과는 1%의 DMSO만을 첨가한 PDA에서 자란 균총의 직경에 대한 약제 첨가 배지에서의 균총의 직경으로 아래의 식에서 균사 생장 억제율을 구하였다.
- 고추의 표면은 70%의 methanol로 잘 닦은 다음, 표면에 핀으로 상처를 내고 접종하는 상처 접종과 무상처 접종을 실시하였다. 접종한 고추는 25℃의 암 상태의 습실에 1주일간 보관하고 발병 여부를 조사하였다.
- acutatuni) 균주를 사용하여 EBI에대한 감수성 정도를 조사하였다. 탄저병의 방제에 사용되는 EBI(Table 1)를 PDA에 최종농도가 50, 5, 0.5, 0.05 jig/ ml7\ 되도록 배지에 첨가하는 한천희석법으로 살균제 의균사 생장 억제 효과를 조사하였다. 사용한 모든 EBI를
- 2001-45, 2001-44, JC24균주의 포자 형성능을 조사하기 위하여 PDA에 이식하여 25℃의 암상태에서 5, 10, 15일간 배양한 후 20 m/의 증류수를 가하고 배지 표면을 긁어 균사와 포자를 현탁하였다. 현탁액은 4겹의 가제에 걸러서 균사와 배지의 찌꺼기를 제거하고, 현탁액 중의 포자수를 혈구계산기로 조사하였다.
- 2001년 충북의 고추 재배지역에서 탄저병 균에 감염된 고추를 채집, 세척 후, 25℃의 습실에보존하며 포자 형성을 유도하였다. 형성된 탄저병균의 포자를 살균 증류수에 100~200개/m/의 밀도로 현탁한 후, 300 ppm의 streptomycin을 첨가한 감자 한천 배지 (potato dextrose agar medium, PDA)에 0.1 m/씩 도말하였다. 도말한 배지를 25℃의 암 상태에서 3일간 배양한 후 형성된 균총의 균사 선단 부위를 잘라 새로운 PDA에 이식하였다.
대상 데이터
- 병원균의 분리 . 2001년 충북의 고추 재배지역에서 탄저병 균에 감염된 고추를 채집, 세척 후, 25℃의 습실에보존하며 포자 형성을 유도하였다. 형성된 탄저병균의 포자를 살균 증류수에 100~200개/m/의 밀도로 현탁한 후, 300 ppm의 streptomycin을 첨가한 감자 한천 배지 (potato dextrose agar medium, PDA)에 0.
- 고추에 대한 병원성 실험. 선발된 2001-45, 2001-44, JC24 균주의 고추에 대한 병원성 정도를 검정하기 위하여 청옥 고추(농우 바이오)를 실험에 사용하였다. 각 균주의 포자현탁액의 포자 농도를 iX1067H/m/S 조절한 후 고추의 표면에 5씩 점적하여 접종하였다.
이론/모형
- EBI에 대하여 저항성 균주와 감수성인 균주의 보호살균제에 대한 감수성을 조사하였다. 보호용 살균제로 알려진 iminoctadine-triacetate, chlorothaonil, dithianon, propieneb를 사용하여 위에서 서술한 것과 같은 한천희석법으로 균사 생장 억제 효과를 조사하였다. Iminoctadine-triacetate, chlorothaonil, dithianon에대하여는 첨가한 배지에서의 살균제의 최종 농도는 500, 50, 5, 0.
성능/효과
- 2001-45의 균사 생장 정도는 감수성인 2001-44과 비교하여 2(TC와 25℃에서는 느렸지만, 생장 적온인 30℃에서는 동일하였으며, 또 다른 감수성균인 JC24보다는 조사한 모든 온도에서 빨랐다. 이러한 결과는 포장 적응력을 비교하는데 있어서 균사 생육은 좋은 요인이 아님을 보여주고 있다.
- 07 [ig/mlS. 4개의 EBI에 대해서 감수성으로 나타난 2001-4와 JC24보다도 낮았다. 사용한 EBI에 대한 JC24 의 EC50 값은 5.
- 2001-44와 같이 EBI에 대하여 감수성인 JC24는 배양 초기부터 다른 두 균주보다 많은 양의 포자를 형성하였다. 5, 10, 15일간 배양하였을 때 plate당 형성된 포자의 수가 103.7, 691.7, 591.7X 104개로, 10일간 배양하였을 때 가장 많은 포자를 형성하고 15일째부터는 형성되는 수가 감소하였다.
- 4). JC24를 상처 접종하고 3일 후부터 접종 부위가 움푹 파이기 시작하다가 5일 후부터는 뚜렷한병징을 관찰할 수 있었다. 그러나 다른 감수성인 2001-44 와 저항성인 2001-45는 상처 부위가 갈변하기만 하였을 뿐, 뚜렷한 병반이 형성되지 않았다.
- 또한 두 균주 모두 고온인 30℃에서 균사 생장이 활발하였다. 또 다른 감수성인 JC24는 모든 온도에서 2001- 45와 2001-44보다 균사생장이 느리게 나타났으며, 두 균주와는 다르게 25℃에서 가장 생장이 빠르게, 30℃의 고온에서는 균사 생장이 가장 느리게 나타났다.
- 이처럼 동일한 작용 기작을 갖는 EBI들 간에 교차 저항성을 보이는 탄저병 균주에 대해서 prochloraz가교차 저항성을 보이지 않는 것과, De Waard(1992)의 보고처럼 최근에 개발된 새로운 EBI가 기존의 EBI에 대하여 저항성을 나타내는 흰가루 병균에 대하여 교차 저항성을 나타내지 않는 것을 보면 아직도 새로운 활성을 보이는 EBI의 개발이 가능하고, EBI에 대하여 저항성을 보이는 병원균의 방제에 기존의 EBI 중에서 효과 있는 살균제를 선발하여 방제할 수 있음을 보여주고 있다. 또한 2001-45는 prochloraz뿐만이 아니라 propineb, dithianon, iminoctadine과 같은 보호살균제에 대하여 EBI에 대하여 감수성 균주로 판명된 JC24보다도 낮은 감수성을 보이고있어, EBI에 대한 저항성균의 방제에 보호살균제를 사용할 수 있다는 가능성을 보여주고 있다.
- 이러한 결과에 의하면 포장에서의 EBI에 대한 탄저병 균의 저항성 발현이 크게 문제되지 않을 것으로 예상되지만, 2001년에 고추의 포장에서 분리한 탄저병 균에서 EBI에 대한 저항성균이 발견되었기 때문에 포장에서 EBI에 대한 탄저병균의 지속적인 모니터링은 필요한 실정이다. 본 연구 결과 2001-45 균주는 스테롤 생합성 저해 살균제에 대하여 저항성이나, 적응력에 있어서 다른 균주들에 비해 열등한 것으로 나타났다.
- 대한 병원성 실험. 실험에 사용한 2001-45, 2001-44, JC24의 세 균주 모두 무상처 접종에서는 병을 일으키지 못하였고 상처 접종시에만 스테롤 생합성 저해제에 대하여 감수성인 JC24에서 탄저병의 병징을 확인할 수 있었다(Fig. 4). JC24를 상처 접종하고 3일 후부터 접종 부위가 움푹 파이기 시작하다가 5일 후부터는 뚜렷한병징을 관찰할 수 있었다.
- 에 대한 prochloraz의 효과가 다른 EBI에 비하여 절대적으로 높거나, prochloraz가 다른 EBI들과의 교차 저항성 정도가 적은 살균제일 가능성이 있다. 이처럼 동일한 작용 기작을 갖는 EBI들 간에 교차 저항성을 보이는 탄저병 균주에 대해서 prochloraz가교차 저항성을 보이지 않는 것과, De Waard(1992)의 보고처럼 최근에 개발된 새로운 EBI가 기존의 EBI에 대하여 저항성을 나타내는 흰가루 병균에 대하여 교차 저항성을 나타내지 않는 것을 보면 아직도 새로운 활성을 보이는 EBI의 개발이 가능하고, EBI에 대하여 저항성을 보이는 병원균의 방제에 기존의 EBI 중에서 효과 있는 살균제를 선발하여 방제할 수 있음을 보여주고 있다. 또한 2001-45는 prochloraz뿐만이 아니라 propineb, dithianon, iminoctadine과 같은 보호살균제에 대하여 EBI에 대하여 감수성 균주로 판명된 JC24보다도 낮은 감수성을 보이고있어, EBI에 대한 저항성균의 방제에 보호살균제를 사용할 수 있다는 가능성을 보여주고 있다.
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