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문제 정의
- 본 실험 에서는, 옥수수 불검화 추출물과 후박 추출물의 혼합제제를 치주염을 유발시킨 비글견에 경구투여한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다.
- 본 연구는 옥수수 불검화 추출물과 후박 추출물의 혼합물을 적정비율로 혼합하였을 때, 비글견에서 실험적으로 유발된 치주염에 대하여 임상적인 효과를 알아보기 위한 실험으로서, 임상지수 및 치은열구액량의 변화를 평가하였다.
- 본 연구에서는 비글견에서 실험적으로 유발된 치주질환에 대해, 생물학적 효능을 지니는 옥수수 불검화 추출물과 우수한 항균, 항염작용을 지니는 후박 추출물을 적정 비율로 혼합하여, 두 약제의 상승효과를 도모하여 치주질환 예방 및 치료제로서의 효능을 검증하고자 하였다.
제안 방법
- 않았다. 12주째에 결찰한 봉합사와 교정용 wire를 제거하고 하악 양측의 제2소구치, 제3소구치, 제4소구치, 제 1대구치 등 4개의 치아와, 상악 양측의제2소구치제3소구치제1대구치 등 3개의 치아 부위의 치태지수, 치은지수, 치주낭 깊이, 임상부착 수준을 측정하였다. 임상부착수준(Clinical attachment level)의 기준점으로 치조정의 높이에 해당되는 치면에 notch를 형 성하였다.
- 비글 견에게 사료와 함께 한번에 혼합약제 캡슐을 3 개씩( 혼합약제 투여군 I), 6개씩 (혼합약제 투여군 II) 하루세 번에 걸쳐서 투여하였다
- 비글견을 각각 3마리씩 대조군 (약제 무 투여), 혼합약제 투여군 I , 혼합약제 투여군 II 등의 3개 군으로 나누어 하루 세 번씩 사료와 함께 혼합약제를 경구투여하였다
- 상기한 방법으로 비글견을 마취시키고 3-0 봉합사와 교정용 wire를 사용하여 치경부에 결찰하여 12주간 sticky food 를 섭취하게 하며 구강위생술식은 시행하지 않았다. 12주째에 결찰한 봉합사와 교정용 wire를 제거하고 하악 양측의 제2소구치, 제3소구치, 제4소구치, 제 1대구치 등 4개의 치아와, 상악 양측의제2소구치제3소구치제1대구치 등 3개의 치아 부위의 치태지수, 치은지수, 치주낭 깊이, 임상부착 수준을 측정하였다.
- 실험시작, 4, 8, 12 주째에 상기한 해당 치아 주위를 거즈로 방습한 다음, Periopaper® (ProFlow Inc., New York, USA)를 치주낭 내에 30초간 삽입 후 꺼내어 Periotron 8000® (ProFlow Inc., New York, USA)으로 치은열구액량을 측정하였다.
- 체중 10kg 정도의 생후 12개월 된 9마리의 비글견 (Marshall Farms Inc., New York, U.S.A.)을 실험동물로 하였으며, 실험 전 동일한 치주조직상태를 만들기 위하여 2% 염산자일리진액 (Rompun®, 바이엘 코리아, 서울, 한국) 5㎎/㎏과 염산 케타민 ( Ketara®, 유한양행, 서울, 한국) 10㎎/㎏을 근육 주사하여 전신마취를 유도한 후, 치은연상치석 및 치태를 제거하고 치면 세 마를 실시하였고, 2주간 매일 구강위생 술 식을 시행하여 건강한 치주조직상태를 유지시 켰다.
- 통법으로 마취된 비글견의 상악 제 2, 3 소구치와 제 1대구치, 하악 제 2, 3, 4 소구치와 제1 대구치를 대상으로 치주염 유발 직후와 4, 8, 12 주째에 각 대상 치아의 근심 협측, 협측 중앙 원심 협측부위 에서 치태지수 ( Plaque Index, Silness and Loe), 치은지수 ( Gingival Index, Loe and Silness)를 측정 하였으며 , 치주탐침 ( PCP 12, Hu-Friedy Mfg. Inc. Illinois, USA) 을 이용하여 치주낭 깊이 및 치주염 유발직후 형 성된 기준점 (reference notch)을 기준으로 임상부착수준(Clinical attachment level)을 측정하였다.
- 후박 추출물과 옥수수 불검화 추출물을 2:1의 중량비로 혼합하여 105mg(후박추출물 70mg+ 옥수수불검화 추출물 35mg) 캡슐제제로 만들었다. 비글 견에게 사료와 함께 한번에 혼합약제 캡슐을 3 개씩( 혼합약제 투여군 I), 6개씩 (혼합약제 투여군 II) 하루세 번에 걸쳐서 투여하였다
대상 데이터
- 본 연구에 사용된 후박 추출물은 동국제약 (서울, 대한민국)에서 제공받았으며, 그 제조방법은 다음과 같았다. 후박(Magnolia obovata thunberg) 수피를 조말로 한 다음 1kg 을 취하여 75% ethanol 5L를 사용하여 65P 의 수욕에서 3시간 추출하고 냉각하여 여과한 다음 여과액을 얻었다.
- 본 연구에 이용된 옥수수 불검화 추출물은 동국제약 (서울, 대한민국)에서 제공받았으며, 그 제조 방법은 다음과 같았다 옥수수의 배아에서 채취한 옥수수 기름 12kg을 라운드 플라스크에 넣고 ethanol 52L, 수산화나트륨, 수산화칼륨을 가하여 80℃ 에서 3 시간 검화한후 냉각시켰다. 이를 여과하여 여액을 농축하여 흑갈색 추출물 1.
- 남은 잔사에 상기 조작을 다시 하여 2차 여과액을 얻고, 1, 2차 여과액을 합하여 감압 농축하여 에탄올 추출물 200g을 얻었다. 이 추출물을 HPLC로 분석하여 주성분인 magnolol 을 지표로 정 량하여 이 물질이 0.5 %이상 함유된 것을 실험에 사용하였다
- 후박(Magnolia obovata thunberg) 수피를 조말로 한 다음 1kg 을 취하여 75% ethanol 5L를 사용하여 65P 의 수욕에서 3시간 추출하고 냉각하여 여과한 다음 여과액을 얻었다. 남은 잔사에 상기 조작을 다시 하여 2차 여과액을 얻고, 1, 2차 여과액을 합하여 감압 농축하여 에탄올 추출물 200g을 얻었다.
데이터처리
- 각 군별 임상지수 및 미생물 동정결과의 통계분석은 SPSS® version 11으로 일원분산분석을 실시하였다. 유의수준(a)은 0.
이론/모형
- 유의수준(a)은 0.05로 설정하였으며, 사후분석은 Tukey 법을 적용하였다.
성능/효과
- 1. 대조군에 비해 혼합약제 투여군이 약제투여 후 4주, 8주, 12주째 치태지수, 치은지수, 치주낭 깊이, 임상부착수준, 치은열구액량의 개선에 효과적이었다.
- 12주간 실험적으로 치주염이 유발된 상태의 치태지수는 대조군은 2.93, 혼합약제 투여군Ie 2.85, 혼합약제 투여군Ⅱ는 2.91 로, 세 군간 baseline 상태의치태지수는 통계학적으로 유의성 있는 차이를 보이지 않았기 에 동일한 상태에서 실험이 진행되었다고 볼 수 있었다( p=Q518).
- 2. 4주, 8주, 12주째 혼합약제를 투여한 I군과 II군 간의 치태지수, 치은지수, 치주낭 깊이, 임상부착수준, 치은열구액 변화율에서 유의성있는 차이는 관찰되지 않았다.
- 3. 이상의 결과로서, 후박 주출물과 옥수수 불검화추출물의 혼합약제(조성비 2:1, 94.5㎎/㎏) 가치주염의 염증상태를 개선시킴을 확인할 수 있었다.
- 4주 후, 대조군, 혼합약제 투여군 I, Ⅱ는 각각 3.67, 3.78, 3.69를 보였고, 8주 후에는 각각 3.97, 2.90, 3.이을 보였으며, 12주 후엔 4.51, 3.32, 3.39 의 임상부착수준을 나타내었는데, 대조군과 혼합약제투여군 간에는 차이를 보였으나 혼합 약제 투여군 간의 차이는 없는 것으로 확인되었다(Table 4, Figure 4).
- 4주 후의 결과는 대조군이 2.55, 혼합약제 투여군Ie 2.09, 혼합약제 투여군Ⅱ는 2.13을 보였고, »주 후는 각각 2.68, 1.79, 1.77, 12주 후는 2.84, 2.06, 2.04 의 결과를 얻었는데, 대조군과 혼합약제투여군 간에는 유의성 있는 차이를 보였으나, 혼합약제투여군 간의 유의성 있는 차이는 관찰되지 않았다{Table 3, FK잉ure 3).
- 4주 후의 치은지수는 대조군이 1.69, 혼합약제 투여군은 1.05, 혼합약제 투여군Ⅱ는 1.07이었고, 8주 후의 치은지수는 각각 1.92, 0.91, 0.96 이었으며, 12 주 후의 치은지수는, 각각 2.19, 1.16, 1.04의 결과를 보였다. 4주, 8주, 12주 모두 대조군과 혼합약제 투여군 간의 통계학적 유의성을 나타내었고, 혼합약제 투여군 간의 유의성 있는 차이는 나타나지 않았다.
- 4주 후의 치태지수는 대조군이 2.05, 혼합약제 투여군 Ie 1.27, 혼합약제 투여군Ⅱ는 1.35의 수치를 보였고, 8주 후에는 각각 2.54, 0.77, 0.71, 그리고 12주 후에는 2.99, 1.44, 0.99의 결과를 나타내었는데, 대조군과 혼합약제투여군 간에는 유의성 있는 차이를 보였으나, 혼합약제군 I, II간에는 차이를 보이지 않았다(Table 1, Figure 1).
- 04의 결과를 보였다. 4주, 8주, 12주 모두 대조군과 혼합약제 투여군 간의 통계학적 유의성을 나타내었고, 혼합약제 투여군 간의 유의성 있는 차이는 나타나지 않았다. (Table 2, Figure 2)
- I군과 II군은 비글견의 체중에 따른 농도환산시, 94.5mgkg 와 189㎎/㎏의 농도에 해당되며, 이것으로서 비글견에서 실험적으로 유발된 치주염의 임상지수개선 및 치은열구액량의 변화를 얻기 위해서는 94.5㎎/㎏의 농도를 지니는 I군 약제로도 충분한 효과를 얻을 수 있음을 확인할 수 있었다. 이는 백서의 두개골 결손부 실험에서 얻은 결과와도 일치하였다岡.
- 비글견을 사용한 본 실험에서는 하루 9개의 105mg의 혼합약제캡슐을 경구투여한 I군과 18개씩 투여한 II군 모두 아무런 약제를 투여하지 않은 대조군에 비해서는 임상지수 및 치은열구액량의 변화량에 유의성있는 차이를 보였지만, I군과 II군간의 유의성 있는 차이는 관찰되지 않았다.
- 약제투여 후 각 기간마다의 치은열구액량은 각각 baseline 수치와의 변화량을 백분율로 계산하여 얻었는데, 4주 후, 대조군은 9664%, 혼합약제 투여군I 은 69.91%, 혼합약제 투여군H는 70.14%를 나타내었고, 8주 후는 각각 120.47%, 54.64%, 55.55%을 보였으며, 12주 후엔 136.34%, 58.23%, 62.94%의 치은열구액 변화량을 나타내었는데, 대조군과 혼합약제투여군 간에는 차이가 나타났으나, 혼합약제투여군 간의 유의성 있는 차이는 보이지 않았다(Table 5, Figure 5).
- 치주염이 유발된 상태에서 대조군의 임상부착 수준은 4.57, 혼합약제 투여군Ie 4.66, 혼합약제 투여군 I는 4.72를 보여 세 군간의 bas신ine 상태의 치은지수는 통계학적으로 유의성 있는 차이를 보이지 않았다«)=0.332).
- 치주염이 유발된 상태에서 대조군의 치은열구액량은 106.05, 혼합약제 투여군Ie 109.47, 혼합약 제 투여군 II는 99.27를 보였다.
- 치주염이 유발된 상태에서 대조군의 치주낭 깊이는 2.85, 혼합약제 투여군Ie 2.59, 혼합약제 투여군II 는 2.78을 보여 세 군간의 baseline 상태의 치은지수는 통계학적으로 유의성 있는 차이를 보이지 않았다 (p=0.203).
- 치주염이 유발된 상태의 대조군의 치은지수는 2.18, 혼합약제 투여군Ie 2.10, 혼합약제 투여군Ⅱ는 2.23을 보여 세 군간의 baseline 상태의 치은지수는통계학적으로 유의성 있는 차이를 보이지 않았다( p=0.434).
후속연구
- 결론적으로, 후박 추출물과 옥수수 불검화 추출물을 2:1의 중량비로 혼합한 생약제제가 94.5㎎/㎏ 농도에서 임상지수 및 치은열구액량 개선에 효능을 나타낸 바, 차후에 비글견의 치주질환 유발균 및 치조골 재생량의 관찰을 통한 추가실험을 실시하여 치주질환의 치료보조제로서의 사용가능성을 보다 구체적으로 확인하는 것이 필요하다고 생각된다.
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