Methanol extract obtained from Lindera erythocarpa leaves was successively fractionated with n-hexane, ethylacetate, n-butanol, and $H_2O$. From ethylacetate fraction, an active fraction was isolated through repeated silica gel column chromatography and recrystallization, and was identifi...
Methanol extract obtained from Lindera erythocarpa leaves was successively fractionated with n-hexane, ethylacetate, n-butanol, and $H_2O$. From ethylacetate fraction, an active fraction was isolated through repeated silica gel column chromatography and recrystallization, and was identified as a stereoisomer complex of methyllucidone by MS and MMR analyses. The complex showed 85% antifungal activity at 50 {\mu}g/ml$ against the disease wheat leaf rust.
Methanol extract obtained from Lindera erythocarpa leaves was successively fractionated with n-hexane, ethylacetate, n-butanol, and $H_2O$. From ethylacetate fraction, an active fraction was isolated through repeated silica gel column chromatography and recrystallization, and was identified as a stereoisomer complex of methyllucidone by MS and MMR analyses. The complex showed 85% antifungal activity at 50 {\mu}g/ml$ against the disease wheat leaf rust.
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문제 정의
대상으로 항진균 활성검정을 실시하였다. 그 결과 비목나무 잎의 MeOH 추출물(2, 00ig/m/)이 in vivo test에서 86%의 병원균 증식억제 효과를 나타내었다따라서 본 연구에서는 비목나무 유래의 항진균 활성물질을 규명하고자, 비목나무 잎의 MeOH 추출물을 증류수 1,000 mZ에 현탁시켜 n- hexane, EtOAc, n-BuOH 용매로 용매분획하여 각 분획을 대상으로 in vivo test에 의한 밀 붉은녹병의 증식억제 효과를 조사하였다. 그 결과 EtOAc 분획에서 강한 활성을 나타냈다.
제안 방법
시약 및 기기. -(400 MHz) 및 13C-NMR(100 MHz) 스펙트럼은 Varian 의 Unity Inova로, IR 스펙트럼은 Perkin- Elmer Model 599B로, EI/MS는 JEOL의 JMSAX 505-WA로 측정하였다. 융점은 Fisher Melting Point Apparatus로 측정하였고 미보정하였다.
23꽈) 하지만 NMR, 특히 13C-NMR 에 대한 data는 상세히 동정되지 않았다. COSY를 이용하여 1H-NMR에서의 각 signal을 확인하였고, g-HSQC NMR 기법을 이용하여 l3C- NMR 스펙트럼에서 4급 탄소를 제외한 모든 signal들을 정확히 동정하였다. 4급 탄소의 경우는 HMmC를 이용하여 확인하였다.
항진균 활성을 조사할 비목나무 추출물 및 compound 1은 dimethylsulfoxide (DMSO)를 사용하여 용해한 후에 DMSO의 최종농도가 1%가 되도록 Tween 20 용액 (250g/mZ)으로 희석하여 실험하고자 하는 약제농도로 약제용액을 준비하였다. 무처리구는 약제 없이 DMSO 1%와 Tween 20 250|ig/m/] 되도록 하였다.
비목나무 유래의 항진균물질을 구명하기 위하여 비목나무 잎을 MeOH로 추출하여 용매분획과 chromatograph로 분리 . 정제하여 활성 화합물을 얻었다.
접종한 식물은 하루동안 20℃ 습실상(상대습도 95% 이상)어두어 습실처리 하였다. 습실처리한 식물은 항온항습실(2UC, 상대습도 60~70%)로 이동하여 형광등이 켜진 선반에서 재배하면서 발병시켰다. 접종 7일 후, 병이 충분히 발생한 후에 병반면적율을 달관조사하고 방제 가를 계산하였다.
, cv Chokwang)에 식물체 추출물 혹은 분리된 화합물 용액을 spray 하고 온실에서 풍건하였다. 약제처리한 식물은 1일 후에 병원균인 Puccinia recondita의 포자를 접종하였다. P.
정제하여 활성 화합물을 얻었다. 이 화합물에 대하여 NMR과 MS 분석 기법을 이용하여 화학적 구조를 결정하였고 밀 붉은 녹병에 대한 방제효과를 검토하였다.
이상과 같이 비목나무 잎으로부터 항진균 활성물질로서 methyllucidone의 두 입체이성질체를 분리, 동정하였다. 비목나무의 성분에 관해서 지금까지 보고된 연구결과에 의하면, terpene계 화합물로서 methyllucidone을 비롯하여 linderone, methyllinderone, lucidone, sitosterol-D-glucoside 이 보고되었으며, ”3)essential oil 성분으로 caryophyllene, geranyl acetate, a-pinene, camphene, |3-pinene, limonene, bomy acetate 등이 밝혀졌다.
자생식물자원으로부터 천연물 농약을 개발하기 위하여 국내 자생식물을 대상으로 항진균 활성검정을 실시하였다. 그 결과 비목나무 잎의 MeOH 추출물(2, 00ig/m/)이 in vivo test에서 86%의 병원균 증식억제 효과를 나타내었다따라서 본 연구에서는 비목나무 유래의 항진균 활성물질을 규명하고자, 비목나무 잎의 MeOH 추출물을 증류수 1,000 mZ에 현탁시켜 n- hexane, EtOAc, n-BuOH 용매로 용매분획하여 각 분획을 대상으로 in vivo test에 의한 밀 붉은녹병의 증식억제 효과를 조사하였다.
습실처리한 식물은 항온항습실(2UC, 상대습도 60~70%)로 이동하여 형광등이 켜진 선반에서 재배하면서 발병시켰다. 접종 7일 후, 병이 충분히 발생한 후에 병반면적율을 달관조사하고 방제 가를 계산하였다.'
한편 함량이 적은 성분의 경우 여러가지 data 가 methyllucidone과 매우 유사하였기 때문에, C-a 및 C의 기하학적 구조만이 다른 즉, cis 구조를 갖는 성분으로 추정하였다. 하지만 1H-NMR에서 H-a와 H-p 사이의 coupling constant 가 15.
대상 데이터
COSY를 이용하여 1H-NMR에서의 각 signal을 확인하였고, g-HSQC NMR 기법을 이용하여 l3C- NMR 스펙트럼에서 4급 탄소를 제외한 모든 signal들을 정확히 동정하였다. 4급 탄소의 경우는 HMmC를 이용하여 확인하였다. 즉 H-a (87.
융점은 Fisher Melting Point Apparatus로 측정하였고 미보정하였다. Column duomatography(c.c.)는 silica gel(70- 230 or 230-400 mesh, Merck), ODS gel(70-230 mesh, YMC)를 사용하였다.
실험재료. 본 연구에 사용된 비목나무 (Ldera erythrocarpa) 잎은 2001년 8월 전북 완주군 구이면 소재 모악산에서 채취하였다.
온실에서 재배한 1엽기 밀 (Triticum aestivum L., cv Chokwang)에 식물체 추출물 혹은 분리된 화합물 용액을 spray 하고 온실에서 풍건하였다. 약제처리한 식물은 1일 후에 병원균인 Puccinia recondita의 포자를 접종하였다.
밀 붉은녹병 대한 in vivo 항진균 활성 검정. 항진균 활성을 조사할 비목나무 추출물 및 compound 1은 dimethylsulfoxide (DMSO)를 사용하여 용해한 후에 DMSO의 최종농도가 1%가 되도록 Tween 20 용액 (250g/mZ)으로 희석하여 실험하고자 하는 약제농도로 약제용액을 준비하였다. 무처리구는 약제 없이 DMSO 1%와 Tween 20 250|ig/m/] 되도록 하였다.
성능/효과
94, both 3H, each s) signal도 관즉되었다. I3C-NMR 및 DEPT 스펙트럼으로부터 2개의 ketone (191.52, 185.25), 산소가 결합한 2개의 olefine 4급탄소 0169.83, 168.66), 탄소가 결합한 2개의 olefine 4급탄소 (6135.25, 109.12), 8개의 olefine methine 탄소 (8142.60, 130.24, 128.80 (x2), 128.44 (x2), 121.31, Ⅲ.61) 및 2개의 methoxy (864.62, 58.56) signal이 확인되었다. 이상의 결과로부터 이 화합물은 비목나무에서 분리 보고된 바 있는 methyllucidone으로 동정 되었다.
그 결과 비목나무 잎의 MeOH 추출물(2, 00ig/m/)이 in vivo test에서 86%의 병원균 증식억제 효과를 나타내었다따라서 본 연구에서는 비목나무 유래의 항진균 활성물질을 규명하고자, 비목나무 잎의 MeOH 추출물을 증류수 1,000 mZ에 현탁시켜 n- hexane, EtOAc, n-BuOH 용매로 용매분획하여 각 분획을 대상으로 in vivo test에 의한 밀 붉은녹병의 증식억제 효과를 조사하였다. 그 결과 EtOAc 분획에서 강한 활성을 나타냈다. 이 분획을 silica gel c.
나타내었다. 그러나 현재 살균제로 사용되고 있는 대조 약제인 mancozeb(50 ng/m/ 농도에서 100% 방제)나 flusilazole (2p.g/mZ 농도에서 100% 방제)에 비하여 compound 1은 방제 효과가 약하게 나타났다(Table 1).
밀 붉은녹병 병원균인 Puccinia 에 대한 증식억제 효과를 실험한 결과, 50|ig/mZ 농도에서 85%의 높은 방제 효과를 나타내었다. 그러나 현재 살균제로 사용되고 있는 대조 약제인 mancozeb(50 ng/m/ 농도에서 100% 방제)나 flusilazole (2p.
항진균 활성물질의 분리. 비목나무 잎의 MeOH 추출물을 용매 분획하여 밀 붉은녹병 (wheat leaf rust) 에 대한 방제 효과를 분석한 결과, EtOAc fraction(fr.)에서 강한 활성을 나타내었다. EtOAc fr.
56) signal이 확인되었다. 이상의 결과로부터 이 화합물은 비목나무에서 분리 보고된 바 있는 methyllucidone으로 동정 되었다. Methyllucidonee Lindera litcida의 과실로부터 처음 분리되어 구조가 밝혀졌으며, 22)그 후 비목나무로부터도 분리되었다.
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