선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 S. mutans의 치태형성을 억제하는 S. sali~ varius를 아동의 구강으로 부터 분리하여 그 특성과 S. mu~ tans의 치태형성을 억제하는 S. salivarius 생성물질을 thin layer chromatography로 규명하고자 하였다.
- 소아의 구강으로부터 분리된 9주의 S. sMjuarius의 특성과 S. mutans 및 Streptococcus oralis에 대한 영향을 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
제안 방법
- 016 inch 스테인레스스틸 재질의 교정용 wire (Ormco, Glendora, CA, USA)를 50 mg 내외가 되게 준비하여 3 개씩비커에 매달아 배지에 잠기도록 하였다. 37℃ 배양기에서 회전시키면서 15시간 배양한 후, 3개의 wire 상에 형성된 인공치태의 무게를 평균하였다. 동시에 세균배양액을 희석하여 M17 한천배지상에 접종하여 37P 배양기에서 18시간 배양한 후 생균수를 산정하였다.
- sobrinus BT3을 M17 액체배지 에 5배 희석하여(약 IO** colony forming unit/ml, cfu/rnl) 약 4시간 진탕 배양하였다. 5배 희석하여 (약 1(户 cfu/ml) 5% 자당이 첨가된 M17 한천배지에 접종하여건조시킨 후, 여기에 각각의 타액을 100배 희석하여 (약 10七 103 * 5 cfu/ml) 접종하고 37笔에서 48시간 배양 후 넓은 투명대 (clear zone) 를 형성하는 세균을 분리하였다.
- 카탈라아제 시험 (Catalase test)은 M17 한천배지에 분리균주를 접종하여 37XJ에서 1일 배양한후 3% H2O2를 가할 때 기포 발생 여부로 보았다. M17 한천배지에 분리균주를 접종하여 10℃와 45P에서 각각 배양한 후분리균주의 증식 여부를 관찰하였다. pH 9.
- s. mutans 배양액을 1:1로 5% 자당과 0.1M TES 가 첨가된 M17 액체배지 (M17S 액체배지)에 접종하였다. 37℃ 에서 24시간 배양하여 비수용성 글루캔 형성을 억제하는 균주 9주를 선택하였다.
- M17 한천배지에 분리균주를 접종하여 10℃와 45P에서 각각 배양한 후분리균주의 증식 여부를 관찰하였다. pH 9.6의 M17 액체배지와 6.5% NaCl이 함유된 M17 액체배지에 분리균주를 접종하여 37℃에 배양한 후, 분리균주의 증식 여부를 관찰하였다. 탄수화물 발효시험은 GPI (Gram-Positive Identification card, BioMerieux Vitek, Inc.
- )를 이용하여 분리균주를 동정하였다. 검사 방법은 단일 집락만을 증류수에 현탁해서 M17 한천배지상에 접종하여 37t, 24시간 배양하였다. 멸균된 면봉으로 세균액을 GPI kit 에 세균액을 접종하고 배양하여 반응액을 첨가해서 기질의 색깔 변화와 당의 산성화를 관찰하였다.
- 37℃ 배양기에서 회전시키면서 15시간 배양한 후, 3개의 wire 상에 형성된 인공치태의 무게를 평균하였다. 동시에 세균배양액을 희석하여 M17 한천배지상에 접종하여 37P 배양기에서 18시간 배양한 후 생균수를 산정하였다.
- 검사 방법은 단일 집락만을 증류수에 현탁해서 M17 한천배지상에 접종하여 37t, 24시간 배양하였다. 멸균된 면봉으로 세균액을 GPI kit 에 세균액을 접종하고 배양하여 반응액을 첨가해서 기질의 색깔 변화와 당의 산성화를 관찰하였다.
- Louis, MO, USA)을 40ml M17S 액체배지에 가하여 1%가 되도록 비커에 준비하였다. 여기에 S. mutans를 2 x1b씩 접종하고 위와 같은 방법으로 인공치 태 무게를 구하였다.
- 배양 상청액 20 m와 M17S 액체배지 20 ml 를 비커에 준비하였다. 여기에 S. mutans를 2><府씩 접종하고 위와 같은 방법으로 인공치태 무게와 생균수를 산정하였다.
- 여기에 S. mutans와 분리균주를 각각 2x1(网 접종하고 0.016 inch 스테인레스스틸 재질의 교정용 wire (Ormco, Glendora, CA, USA)를 50 mg 내외가 되게 준비하여 3 개씩비커에 매달아 배지에 잠기도록 하였다. 37℃ 배양기에서 회전시키면서 15시간 배양한 후, 3개의 wire 상에 형성된 인공치태의 무게를 평균하였다.
- 같은 조작을 2번 반복하고원심하여 남은 침전물을 80℃ oven에서 가열하였다. 침전물을 증류수에 녹인 것과 침전물을 1 M HC1 용액을 가하여 121 ℃ oven에서 20분간 방치한 것을 포도당, 과당, 자당과 함께 silica gel에서 thin layer chromatography를 실시하였다. 이때 developer로 85% acetonitrile액을 사용하고 발색제로 5% H2SO4와 300 mg/L a-naphthol이 든 methanol을 사용하여 121 ℃ oven에서 10분간 방치하였다.
- 분리균주는 Gram 염색을 실시하여 그람양성의 연쇄상구균임을 확인하였다. 카탈라아제 시험 (Catalase test)은 M17 한천배지에 분리균주를 접종하여 37XJ에서 1일 배양한후 3% H2O2를 가할 때 기포 발생 여부로 보았다. M17 한천배지에 분리균주를 접종하여 10℃와 45P에서 각각 배양한 후분리균주의 증식 여부를 관찰하였다.
대상 데이터
- 1998년 9월부터 12월까지 광주지역 유치원 아동 658명의 타액을 각각 채취하였다. 16시간 배양한 S.
- Inulin과 levan (Sigma, St. Louis, MO, USA)을 40ml M17S 액체배지에 가하여 1%가 되도록 비커에 준비하였다. 여기에 S.
- S. mu tans Ingbritt strain, S. sobrinus B-13 (ATCC 35037, Rockville, MA, USA)를 공시하였으며, 배양은 동결건조로 보관중인 세균을 M17 액체배지 ①ifco, Detroit, MI, USA)에 접종하여 37P 배양기에서 배양하였다.
- 사멸시켰다. 배양 상청액 20 m와 M17S 액체배지 20 ml 를 비커에 준비하였다. 여기에 S.
데이터처리
- 각 군간의 무게 차이는 Mann-Whitney test를 이용하여 비교하였으며 통계학적 인 유의성은 p value가 0.05 이하인 경우로 하였다.
이론/모형
- 선택된 분리균주 9주의 형태학적, 생물학적, 생화학적 성질등은 Bergey's manual of systematic bacteriology에 있는방법is으로 검사하였다. 분리균주는 M17 액체배지에 배양한후 glycerol의 최종농도가 20% (w/v) 되도록 첨가하여 ~7Q℃ 에 냉동 보관하면서 필요에 따라 재접종, 배양한 후 실험에 사용하였다.
- 5% NaCl이 함유된 M17 액체배지에 분리균주를 접종하여 37℃에 배양한 후, 분리균주의 증식 여부를 관찰하였다. 탄수화물 발효시험은 GPI (Gram-Positive Identification card, BioMerieux Vitek, Inc.)를 이용하여 분리균주를 동정하였다. 검사 방법은 단일 집락만을 증류수에 현탁해서 M17 한천배지상에 접종하여 37t, 24시간 배양하였다.
성능/효과
- 1. 비커 와이어 검사에서 S. mutans 배양시 형성된 인공치태무게는 204.9 mg이었으나, S. mutms와 분리된 S. sali- varfus의 혼합 배양시 형성된 인공치태 무게는 1.9 mg에서 20.6 mg으로 S. mutans 단독 배양시와 큰 차이가 있었다 (p<0.05). 배양 후 생균수 검사에서는 큰 차이가 없었다.
- 2. M17 액체배지에서 배양된 분리균주의 배양 상청액을 가한 비커 와이어 검사에서 형성된 인공치태 무게는 평균 117.1 mg인데 반해, 5% 자당이 함유된 M17 액체배지에서 배양된 분리균주 배양 상청액을 가한 비커 와이어 검사에서는 평균 47.7 mg이었다.
- 3. 분리된 S. salivariuse] 배양 상청액을 thin layer chro- matography를 실시한 결과, 분리균주가 형성한 중합체는프럭 탄이었다.
- 4. 비커 와이어 검사에서 프럭탄의 일종인 inulin과 levan 모두 S. mE&is의 인공치태 형성을 억제하지 못하였다.
- 6mg 으로 현저히 감소되었다. S. salivarius 분리균주에 의한 S. mutans의 인공 치태 형성 억제 기전을 알고자 M17 액체배지와 M17S 액체배지에서 배양한 S. salivarius 분리균주 배양상청액을 각각 가한 비커 와이어 검사에서 S. mutans에 의하여 형성된 인공치태 무게는 각각 평균 117.1 mg, 47.7 mg이었다. 이와 같은 결과는 배양 후 S.
- 동시에 생균수 검사를 한 결과, M17 액체배지에서 배양한 분리 균주 배양 상청액을 가한 배지에서 증식한 S. mutans는 ml당 2.6X10, 에서 6.8x10이었고, M17S 액체배지에서 배양한 분리균주 배양 상청액을 가한 배지에서 증식한 S. mu- tans는 ml당 AOxlCT에서 7.2><1俨으로 분리균주 배양 상청액을 가하지 않은 대조군에서의 ml당 9.0x107와 차이가 없었다 (Table 3).
- 배양 후 생균수 검사를 한 결과, S. mutans 단독 배 양시에는 ml당 9.0x108이었고, 분리균주 단독 배양시에는 ml당 2.0x IT에서 1.2x109이었다. S.
- 본 연구에서는 비커 와이어 검사에서 S. mutans 단독 배양 시 형성된 인공치태 무게 204.9 mg에 비교하여 S. mutans와 S. salivarius 분리균주 혼합 배양시에는 1.9 mg에서 20.6mg 으로 현저히 감소되었다. S.
- 분리균주 배양 상청액을 thin layer chromatography를 실시한 결과, S. salivarius S8을 비롯한(Fig. 3) 분리균주 모두가 생성한 중합체는 프럭탄이었다.
- 분리균주는 M17 액체배지에 배양한후 glycerol의 최종농도가 20% (w/v) 되도록 첨가하여 ~7Q℃ 에 냉동 보관하면서 필요에 따라 재접종, 배양한 후 실험에 사용하였다. 분리균주는 Gram 염색을 실시하여 그람양성의 연쇄상구균임을 확인하였다. 카탈라아제 시험 (Catalase test)은 M17 한천배지에 분리균주를 접종하여 37XJ에서 1일 배양한후 3% H2O2를 가할 때 기포 발생 여부로 보았다.
- 5% NaCl이나 bile-esculin이 함유된 배지에서 증식하지 못하였다. 분리균주를 GPI kit를 사용하여 당발효 및 생화학적검사를 실시한 결과, arginine HC1 은 분해하였으나, tellurite 는 환원시키지 못하였다. Dextrose, lactose, salicin, sucrose 를 분해하였으나, mannitol, raffinose, arabinose, pyruvic acid, inulin, melibiose, melezitose, ribose, xylose는 분해하지 못하였다.
- 비커 와이어 검사에서 S. mutans 단독 배양시 형성된 인공치태 무게는 204.9 mg이었으나, S. mutans와 분리균주 혼합배양시 형성된 인공치태 무게는 1.9 mg에서 20.6 mg으로 S. mutans 단독 배양시와 큰 차이가 있었다 (p<0.05)(Table 1).
- Dextrose, lactose, salicin, sucrose 를 분해하였으나, mannitol, raffinose, arabinose, pyruvic acid, inulin, melibiose, melezitose, ribose, xylose는 분해하지 못하였다. 이러한 당발효 및 생화학적 실험 결과, 모두 S. salivarius로 동정되었다. 분리된 9주의 세균을 S.
- 이상의 결과를 종합하면 프럭탄을 생성하는 S. salivarius는 5.의 인공치태 형성을 억제하였다.
- 7 mg이었다. 이와 같은 결과는 배양 후 S. mutans 생균수의 감소 없이 인공치태 억제 현상이 일어나는 것으로 보아 5% 자당이 함유된 M17 액체배지에서 배양한 S. salivarius 분리균주 배양 상청액에 함유된 성분에 의한 것으로 사료되었다. 그래서 S.
- salivarius 분리균주가 형성한 중합체는 프럭탄이었다. 즉 S. salivarius 분리균주가 형성한 프럭탄에 의하여 S. mutans의 비수용성 글루캔 형성이 억제되는 것으로 사료되었다. 그러나 프럭탄의 일종인 inulin과 levan 모두 비커 와이어 검사에서 S.
후속연구
- 이상의 결과로 볼 때, 분리균주는 프럭탄을 생성하여 S mu- 场刀s의 비수용성 글루캔 생성을 저지함으로써 치태 형성을 억제하는 것으로 사료되나, 분리균주가 만드는 프럭탄에 대한 연구는 더 필요한 것으로 생각된다.
- mutans의 인공치태 형성을 억제하지 못하였다. 이와 같은 결과는 S. salivarius 분리균주가 형성한 프럭탄은 in- ulin과 levan과는 구조가 다른 프럭 탄이 거 나 다른 성 분이 프럭탄에 포함되어 있을 것으로 생각되어 추후 이에 대한 연구를 계속할 예정이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.