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문제 정의
- 2의 lane 3)보다 더 많고 다양한 길이의 거대분자 (lane 5 와 6)를 만들어냄을 알게 되었다. 따라서 이들 pp의 세포내로의 이동 및 원위치 중합효소 연쇄반응에 어느 pp가 더 효율적인 지를 조사하기로 하였다.
- 그런데 PCR 용액의 주요 반응물들이 세포내로 들어가도록 하기위한 처리로 자칫히면 세포손상을 일으키어 증폭된 핵산들이 세포밖으로 유출되고, 이들이 인접세포들 내부로 침투하거나 세포외부에서 또 증폭되어 결국에는 가양성반응을 나타내게 된다(14). 이러한 PCR 생성물의 세포밖 유출을 막기위해 여러 방법들(4, 11, 13, 19)이 사용되었는데, 본 연구실에서는 인간 면역결핍 바이러스(HIV-1)에 감염된 두 가지 현탁 배양세포들(Molt/LAV와 U1.1)에 꼬리 프라이머, 바이오틴이 결합된 dNTR 아가로오스를 이용한 다중 (concatemer) PCR로 각각 긴 길이의 PCR 생성물(high molecular weight product)(ll)과 몸집이 큰 PCR 산물(12)을 만들어 내어, 이들에 의한 유출방지 가능성을 보고하였다. 그러나 이 방법들도 통상 50-60 회 정도의 긴 증폭시간이 소요되는 단점이 있고, PCR 초기에 짧은 초기 PCR 산물이 세포밖으로 유출되어 세포 외부에서 계속 증폭이 되어 배경신호를 만들어내는 등 효율성이 크게 감소되는 현상을 보였다(11).
- 그러나 이 방법들도 통상 50-60 회 정도의 긴 증폭시간이 소요되는 단점이 있고, PCR 초기에 짧은 초기 PCR 산물이 세포밖으로 유출되어 세포 외부에서 계속 증폭이 되어 배경신호를 만들어내는 등 효율성이 크게 감소되는 현상을 보였다(11). 이를 극복하기 위해 이번 연구에서는 먼저 목표 핵산없이 꼬리 프라이머만의 PCR을 통하여 프라이머 중합체가 형성되는 지를 조사하고, 짧은 시간동안에 프라이머 중합체에 의한 원위치 중합효소 연쇄반응 효과를 조사하고자 한다.
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